滿 霞，鄭 進

（1.華東療養(yǎng)院醫(yī)學檢驗中心，江蘇 無錫214065；2.新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學工程股份有限公司，深圳518000）

胰腺癌是常見的消化系統(tǒng)腫瘤之一，由于胰腺癌早期診斷較困難，一旦發(fā)現(xiàn)多為晚期，切除率低，預(yù)后差，死亡率高，故通過腫瘤標志物檢測以獲得早期診斷，是目前臨床關(guān)注的焦點。糖類抗原242（CA242）是一種唾液酸化的糖鏈抗原，是一種新型的腫瘤標志物，其升高在惡性腫瘤患者中明顯高于良性病變患者及正常體檢者，而且以胰腺癌最高，其次為腸癌、胃癌［1］。糖類抗原50（CA50）是一種唾液酸脂和唾液酸糖蛋白為主的廣譜腫瘤相關(guān)抗原，主要用于胰腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌等的輔助診斷，其中胰腺癌患者升高最明顯［2］。CA50與CA242聯(lián)合檢測可使診斷胰腺癌的敏感性達到95.0%，CA50與CA242聯(lián)合檢測有助于增強對胰腺癌的診斷，可能在胰腺癌的早期診斷中具有重要的意義［3］。中國合格評定國家認可委員會（CNAS）將ISO 15189作為我國醫(yī)學實驗室的認可準則，并開始國內(nèi)醫(yī)學實驗室的認可工作。其中，對儀器進行性能驗證是ISO 15189實驗室認可的要求之一，在本院檢驗科ISO 15189實驗室認可中，對深圳新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學工程股份有限公司研發(fā)的原裝配套CA242、CA50檢測系統(tǒng)的主要分析性能進行了驗證。

材料與方法

1 樣本來源

來本院行健康體檢的體檢者血清樣本，外觀無溶血、黃疸和脂血?？崭轨o脈血采集后，室溫靜置，離心，分離血清立即用于分析，不能立即分析的血清樣本分裝后保存在-20℃冰箱。

2 儀器與試劑

深圳新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學工程股份有限公司生產(chǎn)的全自動化學發(fā)光測定儀Maglumi 4000 Plus（以下簡稱深圳新產(chǎn)業(yè)“Maglumi 4000 Plus”），試劑、標準品及質(zhì)控品均為本儀器原裝配套試劑、標準品及質(zhì)控品，并全部使用同一批號，CA242檢測試劑、標準品及質(zhì)控品批號均為06118073101，CA50檢測試劑、標準品及質(zhì)控品批號均為03718062202。

2 方法

用深圳新產(chǎn)業(yè)Maglumi 4000 Plus原裝配套質(zhì)控品進行常規(guī)室內(nèi)質(zhì)控檢測，室內(nèi)質(zhì)控在控后進行下列驗證實驗。

2.1 精密度驗證 批內(nèi)精密度驗證：使用血清制備的低、高2個濃度樣本，連續(xù)重復(fù)測定每個樣本20次，記錄每個樣本20次測定結(jié)果，分別計算均值、標準差及變異系數(shù)（CV）；批間精密度驗證：使用血清制備的低、高2個濃度樣本，每天測試2批，每批測定1次，兩批間隔時間2小時以上，連續(xù)測定10天，記錄每個樣本20次測定結(jié)果，分別計算均值、標準差、變異系數(shù)（CV）。精密度以不超過廠家聲明為判斷標準。

2.2 正確度驗證 參考CLSI EP15-A［4］文件，以衛(wèi)生部臨檢中心提供的室間質(zhì)量評價控制品為定值參考物質(zhì)，對衛(wèi)生部臨床檢驗中心2019年6月發(fā)放的5個批號的室間質(zhì)控品進行檢測，每個批號連續(xù)檢測2次，計算均值，測量均值與靶值和可接受限進行比對。

2.3 線性范圍驗證 按照CLSI EP6-A［5］文件要求，收集本院體檢者血清樣本，選取試劑說明書測量范圍低限附近樣本（CA242：2.00IU／mL，CA50：7.00IU／mL）為低值（L）樣本，選取試劑說明書測量范圍高限附近樣本（CA242：200.00IU／mL，CA50：500.00IU／mL）為高值（H）樣本，CA242、CA50低值樣本和高值樣本均使用原裝配套試劑自帶的標準品按照廠家說明書規(guī)定的方法定值，CA242標準品定標點1濃度為10.000 IU／mL，定標點2濃度為94.574IU／mL；CA50標準品定標點1濃度為7.955 IU／mL，定標點2濃度為250.752IU／mL。將高值（H）樣本和低值（L）樣本按照6L、5L＋1H、4L＋2H、3L＋3H、2L＋4H、1L＋5H、6H的比例進行混合配制，充分混勻形成系列驗證樣本，每個樣本作3次重復(fù)，計算均值和變異系數(shù)（CV）。每個均值即為各個濃度的實測值，將得到的實測值和預(yù)期值用直線回歸統(tǒng)計方法對數(shù)據(jù)進行處理，得到直線回歸方程Y＝b X＋a和相關(guān)系數(shù)R2，若0.97≤b≤1.03，a趨于0，且R2≥0.95，則可以接受。

2.4 臨床可報告范圍驗證［6］選取分析測量上限附近血清樣本（CA242：172.60IU／mL，CA50：423.10IU／mL），使用生理鹽水進行倍比稀釋，如1∶2、1∶4、1∶8、1∶16，依據(jù)稀釋比例計算出各個稀釋濃度的預(yù)期值，測定稀釋樣本，每個樣本測定2次，以均值表示它們的檢測值，比較各個稀釋樣品的檢測值和預(yù)期值，分別計算比值R＝檢測值／預(yù)期值，如110%≥R≥90%，定為可接受限，低于90%或者高于110%相應(yīng)的稀釋度則為不可接受稀釋度。

2.5 生物參考區(qū)間驗證 參考CLSI C28-A2［7］文件，選取合格參考個體20名，按實驗室操作程序，采集處理分析樣本，將20個樣本檢驗結(jié)果與參考區(qū)間比較，如超出參考區(qū)間比例小于5%，則通過驗證。

3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計學軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

結(jié) 果

1 精密度驗證結(jié)果

CA242批內(nèi)精密度和批間精密度CV均小于廠家聲明，CA50批內(nèi)精密度和批間精密度CV均小于廠家聲明。驗證通過。見表1、表2。

表1 批內(nèi)精密度驗證結(jié)果

表2批間精密度驗證結(jié)果

3 正確度驗證結(jié)果

CA242的5個不同批號的室間質(zhì)控品測量值與靶值的偏倚為5.25%～11.74%，CA50的5個不同批號的室間質(zhì)控品測量值與靶值的偏倚為6.53%～12.47%，兩個項目的偏倚均在CLIA′88規(guī)定的允許誤差范圍內(nèi)。驗證通過。見表3。

表3 正確度驗證結(jié)果

4 線性范圍驗證結(jié)果

CA242濃度范圍在1.78～195.00IU／mL線性回歸方程為Y＝0.9854X-1.1027，相關(guān)系數(shù)R2為0.9995；CA50濃度范圍在7.09～498.27IU／mL線性回歸方程為Y＝1.002X-0.627，相關(guān)系數(shù)R2為0.9999。見表4、表5。

表4 線性范圍驗證實驗結(jié)果（CA242）

表5 線性范圍驗證實驗結(jié)果（CA50）

5 臨床可報告范圍驗證結(jié)果

CA242和CA50稀釋16倍的R值均在90%～110%之間，符合判斷要求；CA242的臨床可報告范圍上限可擴展至3120.00IU／mL，CA50的臨床可報告范圍上限可擴展至為7972.32IU／mL。見表6。｀

表6 CA242和CA50各個稀釋樣本的R（%）值

6 生物參考區(qū)間驗證結(jié)果

20名健康體檢者檢測CA242的濃度范圍為0.97～10.38IU／mL，100%的結(jié)果在廠家提供的生物參考區(qū)間（＜20 IU／mL）范圍內(nèi)；20名健康體檢者檢測CA50的濃度范圍為0.50～18.62IU／mL，100%的結(jié)果在廠家提供的生物參考區(qū)間（＜25IU／mL）范圍內(nèi)。

討 論

ISO 15189：2012［8］規(guī)定了中國合格評定國家認可委員會（CNAS）對醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力進行認可的專用要求，包含了醫(yī)學實驗室為證明其按質(zhì)量管理體系運行、具有相應(yīng)技術(shù)能力并提供正確的技術(shù)結(jié)果所必須滿足的要求。其中5.5.1.2檢驗程序驗證要求未經(jīng)修改而使用的已確認的檢驗程序在常規(guī)使用前，應(yīng)經(jīng)過實驗室的獨立驗證。實驗室應(yīng)從制造商或方法開發(fā)處獲得相關(guān)信息，以確定檢驗程序的性能特征。實驗室進行的獨立驗證，應(yīng)通過獲取客觀的證據(jù)（以性能特征形式）證實檢驗程序的性能與其聲明相符。驗證過程證實的檢驗程序的性能指標，應(yīng)與檢驗結(jié)果的預(yù)期用途有關(guān)。檢驗程序的性能指標包括：測量正確度、測量準確度、測量精密度、測量不確定度、分析特異性、分析靈敏度、檢出限和定量限、測量區(qū)間、診斷特異性和診斷靈敏度。CNAS-CL38：2012［9］要求檢測方法和程序的分析性能驗證內(nèi)容至少包括正確度、精密度和可報告范圍。美國臨床實驗室修正案（CLIA′88）文件中明確規(guī)定使用未經(jīng)修改的完整檢測系統(tǒng)的實驗室只需完成4個驗證實驗，即準確度、精密度、可報告范圍及生物參考區(qū)間驗證實驗。在本科室申報ISO 15189實驗室認可中，對深圳新產(chǎn)業(yè)Maglumi 4000 Plus全部4個檢測項目進行了性能驗證，本文以CA242和CA50為例，闡述其精密度、正確度、線性范圍、臨床可報告范圍和生物參考區(qū)間的驗證過程。

精密度是指在規(guī)定條件下，對同一或類似被測對象重復(fù)測量所得示值或測量值間的一致程度［10］。精密度通常用不精密度程度以在規(guī)定測量條件下的標準偏差、方差或變異系數(shù)表示。精密度性能是檢測系統(tǒng)的基本分析性能之一，也是其他方法學評價的基礎(chǔ)，目前臨床醫(yī)學實驗室對樣本只做單次測量便發(fā)出報告，這種情況下精密度更是至關(guān)重要。本文參考CLSI EP5-A2［11］文件，進行了CA242和CA50批內(nèi)精密度驗證實驗；批間精密度驗證不同于CLSI EP5-A2文件驗證方案，在考慮人力、物力、財力的基礎(chǔ)上，結(jié)合科室具體實際，采用2×1×10方案，在相對較短的時間內(nèi)完成了實驗。精密度驗證結(jié)果顯示，CA242批內(nèi)精密度和批間精密度CV均小于廠家聲明，CA50批內(nèi)精密度和批間精密度CV均小于廠家聲明，表明廠家聲稱的精密度可靠。

正確度定義為無窮多次重復(fù)測量所得量值的平均值與一個參考量值間的一致程度［10］。正確度通常用偏倚表示。正確度性能是檢測系統(tǒng)或方法重要的分析性能之一，是分析測量范圍（線性范圍）及生物參考區(qū)間驗證等實驗的基礎(chǔ)。目前，關(guān)于正確度評價有很多種方案，本文參考CLSI EP15-A文件進行正確度驗證實驗，包括兩種方案：使用患者樣本和使用參考物質(zhì)。本文采用衛(wèi)生部臨床檢驗中心2019年6月發(fā)放的5個不同批號的室間質(zhì)控品進行正確度驗證，結(jié)果顯示CA242的5個不同批號的室間質(zhì)控品測量值與靶值的偏倚為5.25%～11.74%，CA50的5個不同批號的室間質(zhì)控品測量值與靶值的偏倚為6.53%～12.47%，兩個項目的偏倚均在CLIA′88規(guī)定的允許誤差范圍內(nèi)。

線性范圍即分析測量范圍，指樣本未經(jīng)任何處理（稀釋、濃縮或其他預(yù)處理），由檢測系統(tǒng)直接測量得到的可靠結(jié)果范圍，在此范圍內(nèi)一系列不同樣本分析物的測量值與其實際濃度（真值）呈線性比例關(guān)系［12］。線性范圍驗證實驗結(jié)果顯示，CA242的濃度范圍在1.78～195.00IU／mL的線性回歸方程為Y＝0.9854X-1.1027，相關(guān)系數(shù)r2為0.9995，說明組成回歸線的所有數(shù)據(jù)點緊密貼近回歸線，預(yù)測值和實測值之間相關(guān)性極好（0.97≤b≤1.03且R2≥0.950）；CA50的濃度范圍在7.09～498.27IU／mL的線性回歸方程為Y＝1.002X-0.627，相關(guān)系數(shù)r2為0.9999，說明組成回歸線的所有數(shù)據(jù)點緊密貼近回歸線，預(yù)測值和實測值之間相關(guān)性極好（0.97≤b≤1.03且R2≥0.950）。表明采用深圳新產(chǎn)業(yè)Maglumi 4000 Plus檢測CA242的濃度范圍在1.78～195.00IU／mL成線性，和廠家聲明的線性范圍（CA242：2.00～200IU／mL）基本一致；檢測CA50的濃度范圍在7.09～498.27IU／mL成線性，和廠家聲明的線性范圍（CA50：10.00～500IU／mL）基本一致。

臨床可報告范圍是指定量檢測項目向臨床能報告的檢測范圍，患者樣本可經(jīng)稀釋、濃縮或其他預(yù)處理［12］。本文研究結(jié)果顯示CA242和CA50稀釋16倍的R值均在90%～110%之間，符合判斷要求；CA242的臨床可報告范圍上限可擴展至3120.00IU／mL，CA50的臨床可報告范圍上限可擴展至為7972.32IU／mL。本院是健康體檢單位，CA242和CA50特別高濃度的檢測結(jié)果罕見，稀釋倍數(shù)只進行到1∶16，已能夠滿足臨床需求。

參考區(qū)間是兩參考限之間的區(qū)間，指參考下限到參考上限的區(qū)間，通常指中間95%區(qū)間［13］。由于地理、人種、性別及年齡差異，各實驗室應(yīng)建立自己的生物參考區(qū)間。本文參考CLSI C28-A2文件，選取無系統(tǒng)疾病、表面健康的體檢者20名，其中男10名，年齡在25～72歲之間；女10名，年齡在27～62歲之間，對深圳新產(chǎn)業(yè)Maglumi 4000 Plus檢測CA242和CA50的生物參考區(qū)間進行驗證。研究結(jié)果顯示20名健康體檢者檢測CA242的濃度范圍為0.97～10.38IU／mL，100%的結(jié)果在廠家提供的生物參考區(qū)間（＜20 IU／mL）范圍內(nèi)；20名健康體檢者檢測CA50的濃度范圍為0.50～18.62IU／mL，100%的結(jié)果在廠家提供的生物參考區(qū)間（＜25IU／mL）范圍內(nèi)。說明廠家提供的CA242和CA50生物參考區(qū)間是可以接受的，可直接使用。

選擇性能良好的檢測系統(tǒng)是保證病人檢驗結(jié)果可靠性的前提。通過本文研究，深圳新產(chǎn)業(yè)Maglumi 4000 Plus檢測CA242和CA50的精密度、正確度、線性范圍、臨床可報告范圍、生物參考區(qū)間均和廠家聲明一致，能夠保證檢測結(jié)果的準確，滿足臨床檢驗的需要。同時，Maglumi 4000 Plus有144個樣本位，25個試劑位，每小時達到280個測試，并且樣本和試劑可連續(xù)加載，能夠隨機、批量測試，大大提高了檢測效率，而且國產(chǎn)試劑較進口試劑價格低廉，能夠降低醫(yī)療成本，可以在臨床實驗室推廣使用。