白文學 龍川江

(重慶市江津區(qū)婦幼保健院 重慶 402260)

遺傳代謝病(先天性代謝缺陷)有1000多種，單一發(fā)病率較低，總發(fā)病率較高。有調(diào)查表明，新生兒的遺傳代謝病發(fā)病率超過0.5%[1]。目前，美國、日本等發(fā)達國家已全面覆蓋串聯(lián)質(zhì)譜技術，用其進行普查新生兒是否患先天代謝病[2]。隨著串聯(lián)質(zhì)譜法在全世界的推廣及應用，它在我國醫(yī)學臨床上逐漸廣泛地應用于篩查與診斷。江津地區(qū)婦幼保健院聯(lián)合重慶金域醫(yī)學檢驗所有限公司中心實驗室研究員，計劃于2018年3月～2018年6月這段時間內(nèi)投入使用串聯(lián)質(zhì)譜法，篩選與診斷3200例新生兒遺傳代謝病?，F(xiàn)將結果敘述如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

在家屬簽訂《用串聯(lián)質(zhì)譜法篩查新生兒是否患先天代謝疾病》同意書后，選取于2018年3月～2018年6月在江津婦幼保健院待出生和已出生的3200例新生兒，其中男1700例，女1500例；早產(chǎn)兒(孕周<37周)46例，足月兒(孕周≥37周)3154例。經(jīng)SPSS19.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計后，發(fā)現(xiàn)P>0.05，因此性別比例可作為無關因素處理。

1.2 方法

1.2.1標本的采集

在新生兒的足跟扎微量的血液于干血濾紙片上，得到均勻血斑，讓其在15～22℃無菌空氣中自然風干3～4h后，置于塑料袋封口，存在-20℃環(huán)境中備檢[3]。

1.2.2儀器與試劑

采用三重四極桿質(zhì)譜儀，儀器型號API3200MDTM，該儀器主要用于確定人體樣本中的無機或有機化合物,臨床應用中主要用于定性定量分析，如內(nèi)源性物質(zhì)如氨基酸類、肉毒堿和糖類物質(zhì)、外源性物質(zhì)等。采用廣州南杰生物技術有限公司生產(chǎn)的樣本釋放劑，也是診斷劑。將診斷劑的1mL樣本釋放劑的萃取液于2～8℃中密封放置，使用前將其置于18～25℃的環(huán)境中，作為工作劑備用[4～5]。將打孔器在干血濾紙片的血斑標本處打孔，將含不同標本血斑的打孔片各放入100μL的工作劑中，45℃震蕩45min，各取75μL打入V型底，耐熱微孔板內(nèi)封裝置后，打開電源，啟動儀器，讓其自動分析[6]。

1.2.3假陽性復查

若出現(xiàn)初篩指標高于1.5倍標本，則需及時聯(lián)系出現(xiàn)可疑陽性新生兒的家長，帶其進行復查，用串聯(lián)質(zhì)譜儀器重新檢測采集的血液標本。復查后標本值指標仍高于1.5倍，則聯(lián)系家長檢測尿液的有機酸含量，靜脈基因順序，同時計算、分析基因突變的概率[7]，在確診后通知家長帶新生兒進行治療。

1.2.4質(zhì)量控制

江津區(qū)婦幼院的采血人員及地方衛(wèi)生部基層管理員要經(jīng)過專業(yè)的培訓。血樣采集和保存工作由經(jīng)過培訓的采血人員負責，地方衛(wèi)生部基層管理員負責傳送血樣標本，婦幼院和新生兒疾病篩查中心有串聯(lián)質(zhì)譜法檢驗人員和研究員。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

采用SPSS19.0統(tǒng)計數(shù)據(jù)結果，用描述統(tǒng)計法進行統(tǒng)計分析，地區(qū)分布服從χ2檢驗。

2 結果

2.1 新生兒參與串聯(lián)質(zhì)譜疾病篩查情況

2018年3～2018年6月期間，江津區(qū)婦幼保健院共篩查3200例新生兒，采用傳統(tǒng)的ELISA檢測技術檢測苯丙酮尿癥、先天性甲狀腺功能減退、G6PD、先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥四癥的新生兒共464例，質(zhì)譜篩查法(四癥普查和46種遺傳代謝疾病串聯(lián)質(zhì)譜篩查)2736例，質(zhì)譜篩查率達85.83%，見表1。

表1 2018年3月～2018年6月江津市質(zhì)譜法篩查疾病情況

縣市區(qū)質(zhì)譜篩查人數(shù)總篩查人數(shù)質(zhì)譜篩查率(%)市區(qū)1043118987.72幾江街道18518997.88德感街道15319279.68慈云鎮(zhèn)19620695.14白沙鎮(zhèn)30234088.82廣興鎮(zhèn)8822040.00嘉平鎮(zhèn)15215598.06四平鎮(zhèn)21726083.46西湖鎮(zhèn)22929976.58永興鎮(zhèn)28831092.90石門鎮(zhèn)34736894.29合計3200372885.83

由表1可得，χ2=1069.08，P<0.05，表明結果具有統(tǒng)計學差異。

2.2 串聯(lián)質(zhì)譜法與傳統(tǒng)疾病篩查法比較

MS/MS檢查的假陽性率低于傳統(tǒng)ELISA檢測方法，χ2=7.98，P<0.05，表明結果具有統(tǒng)計學差異，見表2。

表2 MS/MS與傳統(tǒng)疾病篩查法比較

篩查方法篩查正?？梢申栃詮筒檎４_診復查正常復查正常總數(shù)假陽性率(%) 串聯(lián)質(zhì)譜法3200201220.50傳統(tǒng)ELISA檢測320036812.22

2.3 MS/MS檢出疾病情況

MS/MS篩查出患病新生兒4例，檢出率為1/800。其中有機酸代謝?。杭谆嵫Y1例(女)；脂肪氧化疾?。乎；o酶脫氫酶缺乏癥1例(男)；氨基酸代謝疾病：苯丙酮尿癥1例(女)；尿素循環(huán)障礙：新生兒膽汁積留1例(男)。

3 討論

江津區(qū)婦幼院聯(lián)合重慶金域醫(yī)學檢驗所有限公司中心實驗室將串聯(lián)質(zhì)譜法(MS/MS)應用于3200例新生兒的代謝疾病篩查研究過程發(fā)現(xiàn)，質(zhì)譜篩查率達85.83%。與普通的新生兒遺傳代謝疾病相比，利用傳統(tǒng)的ELISA檢測技術，一項實驗只能檢測一種疾病，周期長、耗資高[7]，受客觀因素影響大，假陽性高，使疾病的篩查范圍受到局限，易造成遺傳代謝病的漏診誤診。MS/MS檢測的假陽性率為0.50%，傳統(tǒng)的ELISA檢測技術的假陽性率為2.22%，數(shù)據(jù)對比可知MS/MS與傳統(tǒng)的ELISA檢測技術相比，MS/MS檢查的假陽性率低于傳統(tǒng)ELISA檢測方法。說明MS/MS檢測的確診率高于ELISA檢測法，能減少復查率，減少新生兒家長的精神及經(jīng)濟負擔，對新生兒的遺傳代謝疾病有非常重要的作用[8～9]。

MS/MS可檢測氨基酸代謝疾病、有機酸血癥、脂肪酸氧化等多項疾病，3200例嬰兒中查出有4例嬰兒患遺傳代謝疾病。MS/MS實現(xiàn)了一次檢測多個病種、檢測時間縮短、特異性靈敏度提高等目標，因而MS/MS能在短周期內(nèi)實現(xiàn)大量遺傳代謝疾病的快速、精準、低耗資檢測，減小新生兒遺傳代謝病的發(fā)病率，對江津市乃至更多地區(qū)的出生人口預防遺傳代謝疾病及提高人口素質(zhì)有重要有非常重要的意義[10]。通過篩查的方法，讓孕婦在產(chǎn)前得知腹中胎兒是否患了代謝疾病，因而能提前診斷、治療；若篩查過程中不能查出有先天畸形，則在新生兒出生后不久，抽取新生兒微量血液進行復查，將先天代謝異?；蛏眢w結構異常帶來的損傷降低到最小值。除此之外，MS/MS檢測技術對想生二胎的家長有不可替代的指導意義，能讓該類家長避免生育患先天遺傳代謝病的患兒及教育患兒成長。

綜上所述，串聯(lián)質(zhì)譜檢測法能檢測可氨基酸代謝疾病、有機酸血癥、脂肪酸氧化等多項疾??；能在早期發(fā)現(xiàn)新生兒患遺傳代謝疾病的具體情況，降低患病假陽性率，確診率高；讓患兒能得到及時的治療；檢測周期短、精確、操作簡單，進而能增大檢測的新生兒例數(shù)，降低耗資，為臨床推廣MS/MS檢測技術提供依據(jù)，為預防及治療先天性遺傳代謝病提供參考。