高強 孫榕 薛耀武

摘要? ? 檢測標準發(fā)生變更時，檢驗檢測機構(gòu)應(yīng)做好新方法的驗證工作。本文以水果和蔬菜中阿維菌素殘留量測定標準變更為例，詳述了如何開展方法驗證，以期為化學(xué)分析方法發(fā)生變更時更好地開展驗證工作提供參考。

關(guān)鍵詞? ? 農(nóng)藥殘留;檢測標準;方法變更;方法驗證

中圖分類號? ? TS207.3;O652.1? ? ? ? 文獻標識碼? ? A? ? ? ? 文章編號? ?1007-5739（2019）12-0084-01

Abstract? ? The inspection and testing organization should do a good job of verifying the new method when the test standard changed.In this paper，the change of avermectin residue in fruits and vegetables was taken as an example，the process of method validation was detailed，in order to provide reference for better verification of chemical analysis methods.

Key words? ? pesticide residue;test standard;method change;method validation

蔬菜在生產(chǎn)周期內(nèi)，由于易發(fā)生病蟲害，農(nóng)藥使用的頻次較高，農(nóng)藥殘留問題一直受到消費者重點關(guān)注。做好監(jiān)管，合理使用農(nóng)藥是農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的重要保障。近年來，為了進一步提升食品安全水平，國家對食品安全國家標準和食品安全相關(guān)標準進行了專項清理整合工作。因此，有大量農(nóng)藥殘留檢測標準被作廢或代替，還有許多全新標準發(fā)布實施。由于新版《檢驗檢測機構(gòu)資質(zhì)認定管理辦法》（163號令）的實施，資質(zhì)認定證書有效期增加到6年，依據(jù)資質(zhì)認定準則4.5.14的規(guī)定[1]，檢驗檢測機構(gòu)應(yīng)跟蹤方法的變化，并重新進行證實或確認，當檢測標準發(fā)生變更代替時，要做好變更后檢測方法的驗證工作，質(zhì)量監(jiān)督局安排考核組專家現(xiàn)場進行能力確認。綜上所述，有必要對檢測方法變更驗證試驗進行探析，這對檢驗檢測人員在應(yīng)對方法變更時有很好的指導(dǎo)意義。本文在論述過程中以水果和蔬菜中阿維菌素殘留量的測定GB 23200.19—2016代替SN/T 2114—2008為實例。

1? ? 標準變化內(nèi)容

通過對新舊標準內(nèi)容對比，可找出新標準對以下幾個方面進行了修訂，標準的本質(zhì)內(nèi)容未發(fā)生改變。

（1）此標準由出入境檢驗檢疫行業(yè)標準變更為食品安全國家標準。

（2）應(yīng)用范圍。由其他水果和蔬菜可以參考本標準改變?yōu)槠渌称房蓞⒄請?zhí)行，增加了檢測應(yīng)用范圍。

（3）增加了規(guī)范性引用文件內(nèi)容。

（4）修訂了試樣制備與保存，與現(xiàn)行強制標準GB 2763附錄A對接。

（5）試劑和材料。丙酮的試劑等級變更為色譜純。

（6）儀器和設(shè)備。增加了對于分析天平的規(guī)格。

（7）結(jié)果計算與表述。增加了計算結(jié)果保留有效數(shù)字的位數(shù)。

（8）增加了對精密度的要求描述。

（9）將測定底限準確變更表述為檢測定量限。

2? ? 實驗室是否滿足新標準要求

2.1? ? 人員

儀器設(shè)備的操作人員未發(fā)生改變，所有實驗室檢測人員都通過考核，持證上崗，明確人員授權(quán)能力范圍;人員年度能力確認，使檢測人員能夠持續(xù)滿足檢測工作要求。

2.2? ? 儀器設(shè)備

做好儀器設(shè)備的檢定、期間核查工作，使儀器性能確保符合檢測要求以及量值溯源;檢測所用儀器及檢測器未發(fā)生變化，均滿足檢測需求。

2.3? ? 試劑耗材

每年做好供應(yīng)商評價工作、耗材驗收工作，以及指定購買特定廠家的服務(wù)。

2.4? ? 體系文件

每年做好管理評審工作，根據(jù)體系文件的適應(yīng)性以及資質(zhì)認定準則和機構(gòu)考核細則的變化，及時完成體系文件的再版、修訂工作，使體系文件運行持續(xù)有效，檢測工作受到嚴格控制。

2.5? ? 環(huán)境條件

做好實驗室環(huán)境控制工作，對于可能對實驗結(jié)果產(chǎn)生影響的實驗室溫濕度進行控制，并及時記錄環(huán)境條件，液相色譜儀所在檢測室符合儀器運行的規(guī)定。

3? ? 方法驗證參數(shù)

3.1? ? 線性范圍

農(nóng)藥殘留檢測濃度范圍通常覆蓋關(guān)注濃度50%～150%，應(yīng)至少包含方法定量限濃度點;元素檢測應(yīng)覆蓋關(guān)注濃度0～150%，要充分考慮試劑對響應(yīng)值的影響[2]。濃度為0.20、0.40、0.80、1.00、2.00、4.00 μg/mL時，對應(yīng)的峰面積分別為7.629 01、15.464 94、32.122 50、40.704 24、79.919 59、163.440 83，線性擬合方程為y=40.865 58x-0.569 963，R=0.999 94。其中0.20 μg/mL是定量限濃度值。

3.2? ? 檢出限和定量限

通常只有當目標物的含量接近于0時確定檢出限（LOD）或定量限（LOQ）。對于濃度接近痕量和超痕量檢測時，檢測報告為“未檢出”時，或者接近超標限量時，實驗室需要利用檢出限和定量限進行風(fēng)險評估或者法規(guī)決策。對于現(xiàn)代儀器分析方法來講，檢出限可分為儀器檢出限和方法檢出限2個部分，定量限也可分為儀器定量限和方法定量限。農(nóng)藥殘留定量檢測主要應(yīng)用色譜法和質(zhì)譜法，均可采用信噪比法評估檢出限和定量限;較低濃度的分析物濃度的確定可根據(jù)檢測標準的方法檢出限或超標限量確定;典型可接受的信噪比是3∶1為檢測限，10∶1為定量限[3-4]。由于農(nóng)產(chǎn)品的基質(zhì)較復(fù)雜，不同的基質(zhì)可能需要分別評估檢出限和定量限。

3.2.1? ? 儀器檢出限和儀器定量限。儀器信噪比法評估：根據(jù)阿維菌素標品濃度0.20 μg/mL檢測譜圖信噪比（s/n）約為10∶1;阿維菌素標品濃度0.40 μg/mL檢測譜圖信噪比（s/n）約為20∶1。按照信噪比3∶1為檢出限，10∶1為定量限，可以推算出儀器檢出限為0.003 3 mg/kg，儀器定量限為0.010 mg/kg。

3.2.2? ? 方法檢出限和儀器定量限。儀器信噪比法評估：按照下述加標實驗方案，加標濃度0.20 mg/kg，檢測譜圖信噪比（s/n）約為20∶1。按照信噪比（s/n）3∶1為檢出限，10∶1為定量限，可以推算出方法檢出限為0.003 3 mg/kg，方法定量限為0.010 mg/kg。

3.3? ? 正確度和精密度

測量結(jié)果的正確度用于表述多次重復(fù)測定結(jié)果的平均值與參考值之間的接近程度，表示的是系統(tǒng)誤差，系統(tǒng)誤差可通過加標回收試驗進行評估，方法回收率的偏差范圍可參考相關(guān)規(guī)定進行評價（可參考GB/T 27404附錄F.1）[5-6]。精密度通過測量結(jié)果重復(fù)性和再現(xiàn)性進行評估。重復(fù)性（rep-eatability）是指在正常和正確操作情況下，由同一操作人員，在同一實驗室內(nèi)，使用同一儀器，并在短期內(nèi)對相同試樣所做多個單次測試結(jié)的分散性，用測試結(jié)果變異系數(shù)進行評價（可參考GB/T 27404附錄F.3）。再現(xiàn)性（reproducibility）是指在正常和正確操作情況下，用相同的方法、同一試驗材料，在不同的條件下獲得的單個結(jié)果之間的一致程度[7-9]。不同的條件指不同操作者、不同實驗室、不同或相同的時間，對不同試樣所做多個單次測試結(jié)果，在95%置信概率水平獨立測試結(jié)果的最大差值[10-12]。在實例中選擇了用加標回收率評定正確度，加標回收檢測結(jié)果的重復(fù)性評定精密度。

阿維菌素加標試驗方案：樣品為菠菜;稱樣量20 g;標液濃度4.0 μg/mL，加入100 μL（0.40 μg）;加標量0.020 mg/kg;7組平行樣。

7組平行樣的檢測結(jié)果見表1。平均值x為0.018 1;標準偏差S為0.001 09;變異系數(shù)（相對標準偏差）CV為6.0%。

4? ? 結(jié)論

以阿維菌素農(nóng)藥殘留檢測標準變更為實例，對比了標準變化內(nèi)容，從“人、機、物、法、環(huán)”5個方面分析實驗室是否滿足新標準要求，設(shè)計了線性范圍、檢出限、定量限、正確度、精密度等方法驗證參數(shù)的試驗方案，通過對施工檢驗結(jié)果評價符合相關(guān)要求，可以證明實驗室具備此標準方法檢測能力，以期為大家開展化學(xué)分析方法發(fā)生變更時的驗證工作提供參考。此外，試驗方案設(shè)計時可從再現(xiàn)性、基質(zhì)效應(yīng)、測量不確定度評定等方面做繼續(xù)探析。

5? ? 參考文獻

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