喬 柱 趙 虎

多形性腺瘤（pleomorphic adenoma，PA）又被稱做混合瘤（mixed tumor），最常見于腮腺組織，為唾液腺疾病中最為常見的一種良性腫瘤，但該腫瘤可發(fā)生惡變，且隨著病程增長惡變幾率逐漸增大。根據(jù)WHO（2017）涎腺腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)，腮腺組織中的惡性多形性腺瘤主要為癌在多形性腺瘤中（carcinoma ex pleomorphic adenoma，ca ex PA），約占所有涎腺腫瘤的12%[1]。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示90%以上的惡性多形性腺瘤是因多形性腺瘤惡變所導(dǎo)致，并且其預(yù)后比常見的其它涎腺腫瘤較差[2]。

近年來的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞增殖與凋亡的平衡失調(diào)成為腫瘤發(fā)病的重要機(jī)理，Survivin 蛋白和COX-2 蛋白都具有細(xì)胞凋亡抑制、血管生成參與、細(xì)胞增殖促進(jìn)等生物學(xué)功能。已有研究表明Survivin和COX-2 在腺源性腫瘤表達(dá)機(jī)制及陽性結(jié)果存在相關(guān)性，在結(jié)直腸癌[3]、口腔鱗癌[4]、胃癌[5]、乳腺癌[6]等均有報(bào)道。本研究通過對Survivin 及COX-2 免疫組化中陽性表達(dá)程度的檢測，分析其與腮腺良、惡性腫瘤的關(guān)系。

資料和方法

1.臨床資料與組織標(biāo)本：實(shí)驗(yàn)組織收集來源于保定市第一中心醫(yī)院2014年7月～2017年10月病理科存檔的腮腺組織的良、惡性多形性腺瘤的蠟塊標(biāo)本共46 例，其中良性組織24 例，惡性組織22例；另取正常腮腺組織標(biāo)本20 例。所有病例臨床資料充足，病理學(xué)診斷明確，取材前無其他頭頸部腫瘤史且無放化療史，石蠟包埋組織完整。

2.試劑：鼠抗人Survivin 單克隆抗體（北京博奧森生物技術(shù)有限公司）；鼠抗人COX-2 單克隆抗體（北京博奧森生物技術(shù)有限公司）；濃縮型DAB 顯色試劑盒（天津?yàn)笊镏破房萍加邢薰荆?/p>

3.方法：采用免疫組化SP 二步法檢測各個(gè)分組每個(gè)標(biāo)本中Survivin 和COX-2 的表達(dá)情況。用PBS代替一抗做陰性對照。

4.結(jié)果判定與統(tǒng)計(jì)：將細(xì)胞中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒標(biāo)記作為陽性細(xì)胞。由經(jīng)驗(yàn)豐富的兩位病理科醫(yī)師在電鏡高倍視野下觀察，采用雙盲法閱片，將每個(gè)視野下以100 個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)，以陽性細(xì)胞率和陽性細(xì)胞染色深淺強(qiáng)度（-，+，++，+++）進(jìn)行細(xì)胞陽性表達(dá)的評定。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：Survivin 和COX-2 陽性表達(dá)情況均采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)數(shù)資料應(yīng)用百分率（%）表示，采用Fisher 精確概率分析，以P＜0.05 作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.Survivin 蛋白表達(dá)特征及結(jié)：Survivin 在腺管樣的導(dǎo)管上皮細(xì)胞及粘液樣組織中常見表達(dá)，細(xì)胞漿與/或細(xì)胞核中可見棕褐色顆粒狀的陽性表達(dá)。正常腮腺組織中陽性表達(dá)可見于少許分泌管上皮細(xì)胞外側(cè)的肌上皮細(xì)胞核、基底細(xì)胞層、小葉間導(dǎo)管中。Survivin 在正常腮腺組織組、腮腺多形性腺瘤組和惡性多形性腺瘤病組中的陽性表達(dá)率分別為：5%、58.8%和95.5%，各組之間有顯著差異，見表1。

表1 Survivin 陽性表達(dá)情況

表2 COX-2 陽性表達(dá)情況

2.COX-2 蛋白表達(dá)特征及結(jié)果：COX-2 蛋白免疫組化的陽性表達(dá)定位在腺瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，偶爾可見于細(xì)胞膜和細(xì)胞核中，實(shí)驗(yàn)各組中COX-2 蛋白均有表達(dá)，鏡下可觀察到表達(dá)情況有所不同，惡性多形性腺瘤組陽性表達(dá)較強(qiáng)。COX-2 陽性表達(dá)在正常腮腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞膜中也可尋及。正常腮腺組織、良性多形性腺瘤、惡性多形性腺瘤中的COX-2 陽性表達(dá)率分別為55%、79.2%和90.9%。三組之間經(jīng)fisher 百分比對比檢驗(yàn)具有顯著差異性，見表2。

討 論

腮腺多形性腺瘤主要為唾液腺上皮源性腫瘤，乃涎腺腫瘤在臨床中最為常見的一種，占涎腺良性腫瘤的87%以上[7]。腮腺多形性腺瘤臨床治療中以手術(shù)切除方法為主，然而有臨床術(shù)后統(tǒng)計(jì)占3%左右的病例出現(xiàn)復(fù)發(fā)情況，反復(fù)復(fù)發(fā)的患者癌變概率又顯著增加[8]。目前專家們針對多形性腺瘤惡變的原因以及良惡性之間的關(guān)系已經(jīng)進(jìn)行了許多實(shí)驗(yàn)和研究，以期待能早期診斷或干預(yù)腮腺良惡性多形性腺瘤的發(fā)生及發(fā)展。

Survivin 蛋白又被稱作生存素，是凋亡抑制蛋白家族中的一位成員，于1997年被Ambrosini 等[9]首先發(fā)現(xiàn)，是目前為止證實(shí)的具有最強(qiáng)功能凋亡抑制的因子。Survivin 蛋白的功能機(jī)制比較復(fù)雜，存在抑制細(xì)胞的凋亡以及參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞周期的雙重作用，同時(shí)已證實(shí)其在正常分化組織中幾乎沒有表達(dá)，而在惡性早期胚胎組織及腫瘤組織中則多存在高表達(dá)的典型特點(diǎn)[9]，使得該因子同腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展、增殖分化以及惡性變的關(guān)系成為目前實(shí)驗(yàn)中研究的熱點(diǎn)。梁永強(qiáng)等[10]研究發(fā)現(xiàn)Survivin 陽性表達(dá)的多形性腺瘤病例，多數(shù)為細(xì)胞增生活躍且存在包膜邊緣浸潤者，預(yù)示著多形性腺瘤中存在Survivin 表達(dá)病例具備惡性生物學(xué)傾向。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)Survivin蛋白陽性表達(dá)主要見于癌組織細(xì)胞的胞漿和/或胞核，在惡性多形性腺瘤組存在有高度表達(dá)（陽性率95.5%），多形性腺瘤組中表達(dá)較高（陽性率58.8%），提示Survivin 蛋白的表達(dá)與多形性腺瘤的增殖活性有關(guān)。以上組間對比結(jié)果經(jīng)分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）表明了Survivin 在良、惡性多形性腺瘤的表達(dá)具有顯著性差異，這與王旭等[11]研究Survivin 在良、惡性涎腺多形性腺瘤中陽性表達(dá)分別56%及100%基本相符合。COX-2 又被稱為前列腺素內(nèi)過氧化物合成酶，乃催化生成前列腺素重要活性物質(zhì)的關(guān)鍵限速酶。COX-2 蛋白存在細(xì)胞凋亡抑制，細(xì)胞增殖促進(jìn)，新生血管發(fā)生，阻礙細(xì)胞周期，腫瘤轉(zhuǎn)移促進(jìn)等的生物學(xué)功能。向國林[12]等研究COX-2 在多形性腺瘤和癌在多形性腺瘤中的表達(dá)情況中發(fā)現(xiàn)，在初發(fā)多形性腺瘤組、復(fù)發(fā)多形性腺瘤組和惡性多形性腺瘤組中的陽性表達(dá)率呈逐漸增高趨勢，并且明顯高于正常腮腺組。提示COX-2 與多形性腺瘤腫瘤細(xì)胞的增殖分化相關(guān)，參與了多形性腺瘤的發(fā)生、復(fù)發(fā)及惡變過程。本實(shí)驗(yàn)中COX-2 蛋白在腮腺正常組織、多形性腺瘤、惡性多形性腺瘤各組中表達(dá)分別為55.0%、79.2%、90.9%各組之間有顯著性差異（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，代表COX-2 在涎腺多形性腺瘤中的良惡性表達(dá)呈正相關(guān)性。王旭等[11]研究COX-2 蛋白在良、惡性涎腺多形性腺瘤中陽性表達(dá)分布情況相符合，提示COX-2 與腫瘤的細(xì)胞增殖分化的密切相關(guān)性，表明參與了多形性腺瘤的發(fā)生及惡變過程。

本研究結(jié)果提示Survivin、COX-2 的表達(dá)與腮腺多形性腺瘤的癌變病程進(jìn)展相一致，均有可能成為今后涎腺腫瘤分化發(fā)展的一項(xiàng)生物學(xué)指標(biāo)。腮腺多形性腺瘤是一種臨界性腫瘤，該腮腫瘤中兩蛋白的高表達(dá)也表明了其潛在惡性傾向的可能，提示在腫瘤癌變的過程中存在有重要的作用。掌握Survivin、COX-2 的表達(dá)與定位特點(diǎn)，有可能為腮腺良、惡性多形性腺瘤的鑒別診斷起到一定作用，并為其臨床治療及預(yù)后評估提供一定的理論支持。