王建芳，康樂

(駐馬店市中心醫(yī)院，1．檢驗科；2．新生兒科，河南 駐馬店 463000)

IgA腎?。↖gAN）是一種常見的原發(fā)性腎小球疾病，發(fā)病機制較為復雜，目前大多認為是多種細胞因子及炎性因子水平異常導致機體免疫功能障礙而引發(fā)[1]。病理表現為腎小管間充質細胞彌漫性增生、細胞外基質堆積，對患者預后造成不利影響。轉化生長因子-β1（Transforming growth factor β1，TGF-β1） 能刺激細胞外基質的合成和沉積，促進間充質細胞增生，參與腎小管間質纖維化及腎小球硬化過程[2]。而T細胞免疫球蛋白與黏蛋白分子-1 （T-cell immunoglobulin and mucin domain，TIM-1）作為一種跨膜蛋白，廣泛參與了多種T細胞介導的免疫反應，可促進T細胞活化及免疫物質分泌[3]。有研究發(fā)現，在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者體內TIM-1表達水平與促炎因子水平呈正相關，而IgAN發(fā)病與體內免疫系統(tǒng)異常同樣密切相關[4]。目前臨床上對TIM-1、TGF-β1與 IgAN患者病理相關性研究較少，因此本次研究通過檢測IgAN患者腎組織中TIM-1、TGF-β1的表達水平，探究其與病理及臨床指標的關系。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取2017年1月到2018年12月我院收拾的75例IgA腎病患者作為A組，納入標準：⑴經腎組織活檢確診為IgAN，參考中華醫(yī)學會腎病學主編的 《臨床診療指南·腎臟病學分冊》[5]；⑵年齡18～65歲；⑶患者知情并簽署知情同意書。排除標準：⑴合并嚴重心肝脾肺功能異常、糖尿病、惡性腫瘤、遺傳性或繼發(fā)性腎臟疾病等；⑵合并其他臟器有纖維化病變（除腎臟）；⑶患者資料不全。選取40例微小病變腎病患者作為B組，排除標準與A組相同，同時選擇30例腎臟腫瘤切除術后腫瘤周邊正常腎組織作為對照組，A組男40例，女 35 例，年齡（35．7±3．0）歲；B 組男 22 例，女18 例，年齡（36．1±3．2）歲，對照組男 17 例，女 13例，年齡（35．9±2．8）歲，各組患者性別、年齡等基線資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。

1．2 方法 采集各組患者清晨空腹血5ml，離心取上清液，采用ELLSA法檢測白細胞介素-4（Interleukin，IL-4）和干擾素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）水平，并計算IFN-γ/IL-4比值。采用Jaffe法檢測血肌酐（SCr）含量。 肌酐清除率（CCr）采用 Cockcroft公式計算，CCr（ml/min）=（140-年齡）×體重(kg)/N×血肌酐（mg/dL)，N 取值：男性，N=72，女性，N=85。收集患者24h尿液，采用考馬斯亮藍法檢測24h尿蛋白量。將A、B組患者腎活檢組織及腫瘤周邊正常組織于10%甲醛固定，脫水、包蠟、切片、免疫組化 （分別加入 TIM-1、TGFβ1一抗）、DBA 顯色，標本放大400倍后，取腎小球8個以上、腎小管50個以上視野，采用Image pro-plus 6．0系統(tǒng)對其中陽性信號進行圖像分析，計算腎小球陽性面積占總腎小球面積的比值，作為TIM-1、TGFβ1在腎小球中的相對表達量。采用Haas法[6]對A組患者進行分型，Ⅰ型為輕微病變，Ⅱ型為局部增生；Ⅲ型為彌漫性增生，Ⅳ型為彌漫性增生，Ⅴ型為進行性慢性腎炎。采用Katafuchi法[7]按照腎小管間質病變面積對A組患者進行分級，0級為無明顯病變，Ⅰ級為病變面積小于30%，Ⅱ級為病變面積30%～70%，Ⅲ級為病變面積大于70%。

1．3 統(tǒng)計方法 采用SPSS 22．0統(tǒng)計軟件包進行數據分析，符合正態(tài)分布計量資料以均數±標準差表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，相關性分析采用Spearman法，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2．1 各組腎功能指標比較 A組24h尿蛋白量、SCr水平明顯高于B組和對照組，CCr低于B組和對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0．05），見表 1。

表1 各組腎功能指標比較

表1 各組腎功能指標比較

組別A組B組對照組例數 SCr(μmol/L)75 40 30 70．58±4．62 46．74±2．57 46．12±2．40 CCr(ml/min) 24h尿蛋白定量(g)98．54±2．79 129．25±3．56 130．25±3．48 1．83±0．48 1．44±0．39 1．42±0．35

2．2 各組炎性因子比較 A組IL-4明顯高于B組和對照組，IFN-γ/IL-4低于B組和對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0．05），各組 IFN-γ 水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05），見表 2。

表2 各組炎性因子比較

表2 各組炎性因子比較

組別A組B組對照組例數 IL-4(pg/ml)75 40 30 67．94±3．28 43．29±2．93 42．17±2．85 IFN-γ(pg/ml) IFN-γ/IL-4 24．17±2．47 24．69±2．53 25．08±2．61 0．36±0．11 0．57±0．16 0．59±0．18

2．3 各組腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平 A組腎組織中TIM-1、TGFβ1表達水平明顯高于B組和對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0．05），見表 3。

表3 各組腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平

表3 各組腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平

組別A組B組對照組例數 TIM-1（%）75 40 30 7．48±0．53 2．15±0．46 2．09±0．42 TGF-β1（%）10．82±0．72 3．10±0．53 3．14±0．51

2．4 A 組患者 TIM-1、TGF-β1表達水平與臨床指標的相關性 Spearman相關性分析顯示，A組腎組織中TIM-1表達水平與IL-4呈正相關 （r=0．497，P＜0．05）， 與 IFN-γ/IL-4 呈負相關 （r=-0．309，P＜0．05），TGFβ1表達水平與 24h 尿蛋白定量呈正相關（r=0．330，P＜0．05），見表 4。

表4 TIM-1、TGF-β1表達水平與臨床指標的相關性

2．5IgAN患者不同 Haas分型腎組織 TIM-1、TGF-β1表達水平 IgAN患者Haas各分型中Ⅳ、Ⅴ型腎組織中TIM-1、TGFβ1表達水平高于Ⅰ-Ⅲ型，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0．05），見表 5。

表5 IgAN患者不同Haas分型腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平

表5 IgAN患者不同Haas分型腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平

HaasⅡ(n=15)HaasⅢ(n=22)HaasⅣ(n=14)HaasⅤ(n=12)7．44±0．52 9．39±0．81 7．52±0．56 9．83±0．90 8．73±0．79 12．05±1．54 9．02±0．86 12．26±1．73指標 HaasⅠ(n=12)TIM-1 TGF-β1 7．31±0．48 9．32±0．72

2．6 IgAN患者不同Katafuchi分級腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平 隨Katafuchi分級增加，IgAN患者腎組織中TIM-1、TGFβ1表達水平逐漸升高，差異具有統(tǒng)計學意義（F=77．49、216．07，P＜0．05），見表6。

2．7 IgAN 患者腎組織 TIM-1、TGF-β1表達水平與病理情況的相關性 Spearman相關分析顯示，IgAN患者腎組織中TIM-1、TGFβ1表達水平與Haas分型、Katafuchi分級呈正相關（r＞0，P＜0．05），見表 7。

表6 IgAN患者不同Katafuchi分級腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平

表6 IgAN患者不同Katafuchi分級腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平

Ⅰ級(n=28) Ⅱ級(n=13) Ⅲ級(n=7)7．58±0．43 12．36±0．63 8．43±0．52 13．57±0．68 9．68±0．55 15．74±0．72指標 0級(n=27)TIM-1(%)TGF-β1 7．02±0．41 9．84±0．59

表7 IgAN患者腎組織TIM-1、TGF-β1表達水平與病理情況的相關性

3 討論

IgAN臨床表現為血尿、蛋白尿、水腫等癥，病理表現為腎小球硬化、系膜增生、或腎小管萎縮、或腎間質纖維化等，是我國透析患者主要病因，給患者健康及家庭帶來較大危害和負擔[8]。目前IgAN發(fā)病機制尚不明確，推測可能是糖基化異常的IgA和抗體形成復合物在腎臟中沉積從而對腎臟造成損傷。有文獻報道，約22%血尿患者表現為腎間質纖維化和（或）腎小球萎縮，表明腎小管和間質損傷可能在腎小球疾病發(fā)展中起到重要作用，且對患者預后造成一定影響[9，10]。目前針對IgAN尚無確切治療方法，因此探討IgAN疾病發(fā)展相關因素對指導臨床診療具有重要意義。

TGF-β1是一種由脂多糖及巨噬細胞分泌、表達于機體多種組織器官中的細胞因子，能參與胚胎、骨骼發(fā)育、腫瘤發(fā)生、免疫調節(jié)等生理過程[11]。TGF-β1在組織損傷初期能促進損傷修復和再生，并能促進血管平滑肌的增生，同時通過多條信號途徑參與細胞增殖、分化和凋亡。有研究發(fā)現，TGF-β1能促進膠原蛋白類物質在組織中沉積，激活成纖維細胞，促進間質區(qū)域血管生成，在組織纖維化過程中起到關鍵作用[12，13]。本次研究中發(fā)現，A組腎組織中TGF-β1表達水平明顯高于B組和對照組，且在Haas分型（Ⅳ和Ⅴ型）及Katafuchi分級患者中表達水平逐級升高。相關性分析顯示，TGF-β1表達水平與24h尿蛋白定量、Haas分型、Katafuchi分級呈正相關，表明患者腎組織中TGF-β1表達水平與腎功能、IgAN病理發(fā)展密切相關。推測原因可能是TGF-β1可通過影響蛋白多糖、Ⅲ型膠原蛋白、纖連蛋白的表達水平，促進胞外基質的生成及沉積，加重了腎臟組織損傷[14]。

TIM是一種最早發(fā)現于小鼠體內的基因家族，能共同編碼具有生物活性的跨膜蛋白，通過影響T細胞亞群的分化及平衡[15]。人體TIM家族包括TIM-1、TIM-3、TIM-4， 其中 TIM-1 能特異性表達在T細胞表面，與TIM-4結合為細胞活化提供協同信號并促進Th0向Th2分化，從而影響T細胞亞群Th1/Th2平衡[16]。有研究發(fā)現，在過敏性紫癜患者外周血單核細胞中TIM-1 mRNA表達上調，且伴隨Th2水平的升高[17]。在SLE患者中，TIM-1表達水平與病情及體內IL-4水平呈正相關，表明在TIM-1可通過調節(jié)T淋巴細胞亞群參與多種自身免疫疾病的發(fā)生發(fā)展過程[18]。IFN-γ是Th1參與免疫反應的主要執(zhí)行細胞因子，IFN-γ/IL-4可反映Th1/Th2平衡情況。本次研究中發(fā)現，A組TIM-1表達水平明顯高于B組和對照組，CCr、IFN-γ/IL-4比值低于B組和對照組，IgAN患者Haas各分型中Ⅳ和Ⅴ型腎組織中TIM-1表達水平高于Ⅰ-Ⅲ型，且隨Katafuchi分級（0-Ⅲ級）增加，腎組織中TIM-1表達水平逐漸升高，經Spearman相關分析，IgAN患者腎組織中TIM-1表達水平與Haas分型、Katafuchi分級、IL-4水平呈正相關，與IFN-γ/IL-4呈負相關，推測TIM-1可能通過促進Th2分化表達，促進了Th2細胞優(yōu)勢反應，增加局部免疫反應強度，加重了對腎組織的免疫損傷[19]。因此臨床診療中可以考慮通過抑制TIM-1信號通路或下調TGF-β1表達水平從而降低免疫反應及腎小管間質損傷，可能成為一個治療IgAN新途徑[20]。

綜上所述，TIM-1、TGF-β1通過調控 Th免疫、腎小管間質病理損傷過程參與了IgAN發(fā)生和發(fā)展過程，TIM-1、TGF-β1高表達可加重IgAN病情發(fā)展及惡化，可作為腎小管間質損傷的標志物之一。我們設想通過降低TIM-1、TGF-β1表達水平從而減弱腎臟免疫損傷，為臨床診療提供新的依據和思路。