郭 鑫 張及亮 * 陳 魏 李 智 王家珍

（1.中國檢驗認證集團湖北有限公司 湖北武漢 430000；2.湖北中檢檢測有限公司）

1 前言

近年來，隨著醫(yī)藥、食品、飼料工業(yè)的飛速發(fā)展，國內(nèi)外對氨基酸的需求量越來越大。我國作為氨基酸生產(chǎn)的大國，氨基酸的出口量急劇上升。但近年來，國外對氨基酸的質(zhì)量要求也越來越嚴格，特別是涉及醫(yī)藥用氨基酸，某些國家對其中的氨基酸中的氯離子等陰離子的含量作出了更加嚴格的規(guī)定:Cl-≤30 mg/kg。我國藥典明確規(guī)定了該產(chǎn)品含氯量的值為19.80%～20.80%，樣品的含氯量已經(jīng)成為檢驗該藥品質(zhì)量的重要指標之一。

目前，測定氨基酸類藥品中的Cl-的方法較多，常見的有比濁法、化學滴定法、離子選擇電極法、離子色譜法等[1-3]。其中，離子色譜法具有分析時間快、靈敏度高、線性范圍寬、準確度高、選擇性好的優(yōu)點，已被廣泛用于該類藥品分析，而其他方法則存在著一定的局限性，故本文采用氧瓶燃燒法進行氨基酸鹽酸鹽的樣品前處理，離子色譜法來測定氨酸鹽酸鹽中的Cl-[4-8]。本方法的建立不僅為進出口氨基酸的質(zhì)量檢測提供了可借鑒的依據(jù)，同時也對我國氨基酸的生產(chǎn)企業(yè)提出了更高的要求，為我國氨基酸出口產(chǎn)業(yè)能更快更好地與世界接軌提供了良好的技術(shù)基礎(chǔ)。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

Dionex ICS 2000 型離子色譜儀；DS6 型電導檢測器和Chromeleon 6.50 色譜工作站；IonPac AS19型分析柱（250 mm×4 mm）；Ionpac AG19 型保護柱（50 mm×4 mm）；ASRS-ULTRA 陰離子抑制器（外加水電抑制）；Millipore 型超純水系統(tǒng)（Millipore Corporation）。

Cl-標準溶液購自國家標準物質(zhì)研究所，所用溶液均用電阻率為18.2 MΩ·cm 超純水配制。

2.2 色譜條件

手工配制NaOH 淋洗液:50%(W/W) NaOH 溶液為淋洗液儲備液。移取10.4 mL 此溶液于盛有1 989.6 mL 水的2 L 淋洗液瓶中，配制成100 mmol/L的淋洗液并立即保存在6～8 psi 的氮氣環(huán)境下。其梯度程序詳見表1。其中，流速為1.00 mL/min；進樣體積為 25 μL。

表1 淋洗液梯度程序

2.3 樣品的前處理

為避免氨基酸鹽酸鹽溶于水中其雜質(zhì)對Cl-峰的干擾，影響測量結(jié)果準確性，故本文采用氧瓶燃燒法[9，10]，具體操作如下:稱取約 0.20 g 氨基酸試樣于半張定量濾紙上，包扎好，再將包扎好的樣品夾在螺旋狀鉑絲上，然后點燃濾紙，引燃樣品后立即放入充滿氧氣的磨口三角瓶中充分燃燒。燃燒瓶中預先注入含有NaOH 的吸收溶液。待充分燃燒后，靜置一段時間后轉(zhuǎn)入100 mL 的容量瓶中，用去離子水定容，溶液經(jīng) 0.45 μm 濾膜過濾，再取 10 mL 定容于 100 mL容量瓶中，試樣供離子色譜儀分析。

3 結(jié)果與討論

3.1 樣品的前處理條件的優(yōu)化

3.1.1 吸收液的選擇

設(shè)計了2 種吸收溶液，一種為去離子水作為吸收溶液。另外，考慮到燃燒過程中，會有酸性氣體產(chǎn)物釋放到水中，為了更有效地吸收，另一種采用NaOH 溶液為吸收溶液。經(jīng)試驗比較，以NaOH 溶液為吸收溶液的吸收效果更好，準確度更高[11]。

3.1.2 吸收液中NaOH 的濃度對吸收效率的影響

實驗時，參照2.3 進行樣品前處理，分別移取0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL、5.0 mL 1%的NaOH 溶液于50 mL 容量瓶中，定容搖勻后將其轉(zhuǎn)入到磨口三角瓶中，在同一試樣平行取樣，按2.3 進行樣品前處理，以1%的NaOH 溶液的加入量為橫坐標，以吸收液中Cl-的含量(峰面積)為縱坐標，繪得圖1。

圖1 吸收液中NaOH 的加入量對測定結(jié)果的影響

由圖1可知，當吸收液中含有1%的NaOH 溶液的量大于2 mL 時，樣液中Cl-含量趨于恒定。由此可見，50 mL 吸收液中含有1%的NaOH 溶液的量為2 mL時，可得到滿意的吸收效率。

3.1.3 NaOH 吸收液吸收時間的選擇

實驗時，參照2.3 進行樣品前處理，移取2.0 mL 1%的NaOH 溶液于50 mL 容量瓶中，定容搖勻后，將吸收液轉(zhuǎn)入到燃燒瓶中，樣品經(jīng)燃燒、分別靜置10 min、20 min、30 min、50 min、60 min 后，將吸收液按2.3 處理后進樣分析，以靜置時間為橫坐標，以吸收液中Cl-的含量(峰面積)為縱坐標，繪得圖2。

圖2 吸收時間對測定結(jié)果的影響

由圖2可知，吸收液的吸收時間對Cl-的吸收效率有較大的影響，當靜置時間到30 min 后，試樣中的Cl-的量趨于恒定，故吸收液的吸收時間為30 min較好。

綜合上述實驗可知，當使用氧瓶燃燒法時，吸收液應采用NaOH 溶液，50 mL 吸收液中含1%的NaOH溶液2 mL；燃燒后，靜置吸收30 min，可獲得準確的檢測結(jié)果。

3.2 離子色譜儀淋洗液及其濃度、流速的選擇

因NaOH 淋洗液對一價無機陰離子或陰離子基團有較好的淋洗分離效果[12]，且配制簡單易操作，故本試驗選用NaOH 溶液作為淋洗液。結(jié)果表明，采用梯度淋洗的方式，在流速為1.00 mL/min 時，不僅Cl-與樣品中的其他雜離子之間有較好的分離，而且分析速度快，并具有較高的靈敏度。

3.3 工作曲線的繪制

在優(yōu)化的色譜條件下測定Cl-的標準溶液，以Cl-的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制工作曲線發(fā)現(xiàn)，Cl-濃度為 0.25～50.0 μg/mL 時，相關(guān)系數(shù)大于0.999，線性良好。

3.4 方法的精密度

對L-半胱氨酸鹽酸鹽用氧瓶燃燒法處理，進行6 次平行測定，結(jié)果詳見表2。

由表2可知，樣品經(jīng)氧瓶燃燒發(fā)處理后，Cl-的測定結(jié)果相對標準偏差小于5%。

表2 方法的精密度結(jié)果（n=6）

3.5 實際樣品的測定結(jié)果

為驗證方法適用性，對市場上常見的其他種類的氨基酸采用本文方法進行測定，圖3、圖4分別為標準溶液、樣品的色譜圖；實際樣品檢測結(jié)果詳見表3。

圖3 標準溶液離子色譜圖

圖4 樣品的離子色譜圖

表3 樣品經(jīng)氧瓶燃燒法處理后的檢測結(jié)果

4 結(jié)語

本文研究了離子色譜法測定氨基酸鹽酸鹽中Cl-的方法，該方法具有方便快捷、準確度好、靈敏度高、適用性廣的優(yōu)點。建立了氧瓶燃燒法的試樣前處理方法，詳細研究了前處理方法的實驗條件，并優(yōu)化了離子色譜儀的工作條件。該方法的建立為進出口氨基酸中Cl-的檢測提供了可借鑒的依據(jù)。