馬 暢，王素琴，劉 偉，付萍萍，王玉萍

(陜西省農(nóng)業(yè)檢驗檢測中心，陜西 西安 710068)

1 前言

單甲脒是20世紀(jì)80年代由我國科學(xué)工作者合成一種有機氮殺蟲劑，其商品形式是單甲脒鹽酸鹽(Semiamitraz chloride)，又稱N-(2，4-二甲苯基)-N'-甲基甲脒鹽酸鹽，分子式為C10H15ClN2，CAS號51550-40-4，純品為無色針狀結(jié)晶，易溶于乙醇、乙醚等有機溶劑。單甲脒鹽酸鹽是一種高效安全的殺螨劑，對害螨具有觸殺、拒食和趨避作用，兼有一定的胃毒和熏蒸作用，對成螨、卵、若螨都有效[1，2]。單甲脒鹽酸鹽產(chǎn)品質(zhì)控分析傳統(tǒng)上采用化學(xué)法進行，氣相色譜、液相色譜分析法多見于殘留檢測，國內(nèi)尚未見報道。本文建立了一種使用高效液相色譜測定單甲脒鹽酸鹽的方法，并使用該方法對80%單甲脒鹽酸鹽水分散粒劑中單甲脒鹽酸鹽的質(zhì)量分?jǐn)?shù)進行了測定。該方法操作簡單、快速，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均能達到定量分析要求，是一種比較實用的方法。

2 實驗部分

2.1 儀器和試劑

2.1.1 儀器與設(shè)備 Aglient 1260高效液相色譜儀(配備Aglient色譜工作站、自動進樣器、二極管陣列檢測器)；Kromasil C8不銹鋼色譜柱(250 mm×4.6 mm×5 μm)；超聲波清洗器；過濾器(0.45 μm)。

2.1.2 試劑和溶液 甲醇(色譜純)；水(新蒸二次蒸餾水或超純水)；乙酸銨(分析純)；乙酸銨水溶液(ρ(CH3COONH4)=2 g/L)；單甲脒鹽酸鹽原藥(ω≥91%，已用98%單甲脒鹽酸鹽標(biāo)樣定值)；80%單甲脒鹽酸鹽水分散粒劑(保定農(nóng)藥廠)。

2.2 液相色譜條件 流動相：甲醇：乙酸銨溶液=60∶40(V/V)，經(jīng)濾膜過濾，并進行脫氣；流速：0.8 mL/min；柱溫：30 ℃±2 ℃；檢測波長：240 nm；進樣體積：5 μL。在上述條件下，單甲脒(單甲脒鹽酸鹽的陽離子部分，為其在液相色譜中的實際測定形式)的保留時間約為5.6 min。

2.3 操作步驟

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 稱取0.05 g(精確至0.000 1 g)單甲脒鹽酸鹽標(biāo)樣于100 mL容量瓶中，加入80 mL甲醇，超聲波振蕩5 min，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度并搖勻，備用。

2.3.2 試樣溶液的配制 稱取含0.05 g(精確至0.000 1 g)單甲脒鹽酸鹽的試樣于100 mL容量瓶中，加入80 mL甲醇，超聲波振蕩5 min，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度并搖勻，用0.45 μm孔徑濾膜過濾，備用。

2.3.3 測定 在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針單甲脒的峰面積相對變化<1.2%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進行測定。

2.3.4 計算 將測得的2針試樣溶液以及試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中單甲脒峰面積分別進行平均。試樣中單甲脒鹽酸鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)按如下公式計算：

式中：

ω1——試樣中單甲脒鹽酸鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；

ω——標(biāo)樣中單甲脒鹽酸鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；

A1——標(biāo)樣溶液中單甲脒峰面積的平均值；

A2——試樣溶液中單甲脒峰面積的平均值；

m1——單甲脒鹽酸鹽標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2——試樣的質(zhì)量，g。

3 結(jié)果和討論

3.1 試驗條件的選擇 單甲脒的紫外光譜圖(圖1)，從圖中可以看到單甲脒的最大吸收波長約在215 nm和240 nm，綜合考慮靈敏度和干擾兩方面問題，最終將檢測波長確定為240 nm。

圖1 單甲脒的紫外光譜圖

色譜柱選擇常用的Kromasil C8反相柱。根據(jù)單甲脒鹽酸鹽的物理化學(xué)性質(zhì)和溶劑的紫外吸收波長，選擇甲醇作為溶劑溶解樣品，并以甲醇和乙酸銨水溶液作為流動相。分別用不同濃度的乙酸銨水溶液進行單甲脒鹽酸鹽分離試驗。結(jié)果表明：當(dāng)乙酸銨含量較低時，單甲脒色譜峰峰型不對稱，存在拖尾現(xiàn)象。在乙酸銨水溶液的濃度為0.2%時，色譜峰峰型對稱，待測組分與雜質(zhì)能得到有效地分離，具有良好的精密度和準(zhǔn)確度，峰純度符合要求，分析時間較短。(圖2、3)

圖2 單甲脒鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液液相色譜圖

圖3 80%單甲脒鹽酸鹽水分散粒劑液相色譜圖

3.2 精密度 按2.3.2試樣溶液的制備方法分別配制標(biāo)樣溶液和5個80%單甲脒鹽酸鹽水分散粒劑溶液，分別測定，結(jié)果(表1)。80%單甲脒鹽酸鹽水分散粒劑中單甲脒鹽酸鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定結(jié)果的平均值為80.57%，變異系數(shù)CV為0.34%。

表1 80%單甲脒鹽酸鹽水分散粒劑中單甲脒鹽酸鹽精密度試驗結(jié)果

3.3 準(zhǔn)確度 采取添加回收率測定方法來計算本方法的準(zhǔn)確度，分別稱取5 份已知單甲脒鹽酸鹽含量的80%單甲脒鹽酸鹽水分散粒劑試樣，加入單甲脒鹽酸鹽原藥，按2.3.2試樣溶液的制備方法配制溶液并在在上述2.2色譜條件下進行測定，測得80%單甲脒鹽酸鹽水分散粒劑中單甲脒鹽酸鹽的平均回收率為100.82%(表2)。

表2 80%單甲脒鹽酸鹽水分散粒劑回收率試驗結(jié)果

3.4 線性關(guān)系 按2.3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制方法配制5個不同濃度的有效成分線性相關(guān)溶液，在上述儀器條件下測定，按順序測定每個溶液中單甲脒的峰面積，取兩次測定的平均值。以單甲脒鹽酸鹽質(zhì)量濃度(mg/L)為橫坐標(biāo)，所測得的單甲脒峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果(表3、圖4)。單甲脒鹽酸鹽線性方程為：y=18.587x+54.619，線性相關(guān)系數(shù)R2為 0.999 5。

表3 單甲脒鹽酸鹽線性范圍的測定

圖4 單甲脒峰面積與單甲脒鹽酸鹽質(zhì)量濃度關(guān)系圖

3.5 方法特異性 為確證本方法的特異性，本試驗采用HPLC-DAD峰純度分析法來鑒別單甲脒鹽酸鹽。分別對單甲鹽酸鹽原藥和80%單甲脒鹽酸鹽水分散粒劑中的單甲脒峰純度進行檢測，結(jié)果(圖5、6)。由圖可知，單甲脒峰純度均>990，有效成分處無其它物質(zhì)干擾，符合定量分析要求。

圖5 單甲脒鹽酸鹽原藥HPLC-DAD峰純度色譜圖

圖6 80%單甲脒鹽酸鹽水分散粒劑HPLC-DAD峰純度色譜圖

3.6 方法各指標(biāo)結(jié)果判定 按照 NY/T 2887-2016《農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南》的要求[3]，判定上述所得精密度、準(zhǔn)確度、線性關(guān)系和峰純度檢測結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求。對于80%單甲脒鹽酸鹽水分散粒劑產(chǎn)品，單甲脒鹽酸鹽分析方法精密度要求變異系數(shù)<1.39%(計算公式：2(1-0.51ogC)×0.67，其中C為樣品中有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的平均值，以小數(shù)計)，實際變異系數(shù)為 0.34%，表明有效成分分析方法精密度的測定結(jié)果符合要求。添加回收率要求在98%～102%之間，而80%單甲脒鹽酸鹽水分散粒劑中單甲脒鹽酸鹽平均回收率為100.82%，具有良好的準(zhǔn)確度。單甲脒鹽酸鹽質(zhì)量濃度(mg/L)和單甲脒峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)0.999 5符合>0.99的要求。單甲鹽酸鹽標(biāo)樣及其制劑中單甲脒峰純度均>990，滿足方法特異性要求，且有效成分處無其它物質(zhì)干擾，符合定量分析要求。

4 結(jié)論

試驗結(jié)果表明，本方法的準(zhǔn)確度、精密度較高，線性關(guān)系和特異性良好，具有簡便、快速、準(zhǔn)確、分離效果好等特點，可用于單甲脒鹽酸鹽產(chǎn)品的生產(chǎn)質(zhì)控、市場監(jiān)督抽查。