成夢可，尹秀娥，曹仲杰，奚 望

(沈陽沈化院測試技術(shù)有限公司，遼寧 沈陽 110021)

1 前言

溴氰菊酯是一種低毒、高效的擬除蟲菊酯類殺蟲劑，由于具有用量小、對光穩(wěn)定、低殘留、廣譜性和高效性等特點得到廣泛應(yīng)用于農(nóng)林害蟲和衛(wèi)生殺蟲的防治中[1-2]?？蓡为毷褂?，也可與其他有效成分配制成復(fù)配制劑使用。

順式二溴菊酰氯是溴氰菊酯有效成分的相關(guān)雜質(zhì)，而農(nóng)藥產(chǎn)品中的相關(guān)雜質(zhì)是與有效成分相比，對人類和環(huán)境具有明顯毒害、或?qū)κ┯米魑锂a(chǎn)生藥害，或引起農(nóng)產(chǎn)品污染，或影響農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性，或引起其他不良影響，因此，農(nóng)藥中的相關(guān)雜質(zhì)一直是農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量的重要控制指標(biāo)[3-4]。

目前關(guān)于溴氰菊酯有效成分的分析方法有很多，主要有氣相色譜法[5]、正相液相色譜法[6]、反相高效液相色譜法[7]、超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[8]、近紅外光譜法[9]、紫外分光光度法[10]。但是針對順式二溴菊酰氯雜質(zhì)的分析方法研究較少，只檢索到一種一篇關(guān)于“溴氰菊酯乳油中順式二溴菊酰氯的高效液相色譜分析”[11]的相關(guān)文獻(xiàn)，該文獻(xiàn)中所述方法采用正相高效液相色譜法測定順式二溴菊酰氯，并且需要使用手性色譜柱，該方法適用范圍較窄，難于在復(fù)雜的制劑劑型和混配制劑中應(yīng)用，且使用手性色譜柱分析成本極高。基于此，本研究建立了一種反相高效液相色譜法對順式二溴菊酰氯進(jìn)行定量分析，該方法僅需使用極其常見的甲醇和磷酸水溶液流動相和普通的C18色譜柱即可對復(fù)雜制劑中的順式二溴菊酰氯進(jìn)行分離和定量檢測，大大降低了分析檢測成本、且具有簡單快捷、綠色環(huán)保的特點，為溴氰菊酯相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)制定提供了有力的技術(shù)支撐。

2 實驗部分

2.1 試劑和溶液 順式二溴菊酰氯標(biāo)樣：質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.2%；

12%氯蟲苯甲酰胺·溴氰菊酯懸浮劑：氯蟲苯甲酰胺含量為10%，溴氰菊酯含量為2%；

甲醇：色譜純；磷酸：色譜純；水：超純水；

0.1%磷酸水溶液：移取1.0 mL磷酸于盛有1 000 mL超純水的試劑瓶中，搖勻，超聲脫氣。

2.2 主要儀器 液相色譜儀：Thermo U3000型，具有二極管陣列檢測器；過濾器：濾膜孔徑約0.22 μm；

色譜柱：150 mm×4.6 mm (i.d.)不銹鋼柱，內(nèi)裝Eclipse XDB C18，5 μm填充物；

分析天平：XS205 DU型，梅特勒-托利多實驗室稱量科技有限公司，精確至0.000 01 g；

超聲波清洗器；移液器。

2.3 色譜操作條件 流動相為甲醇和0.1%磷酸水溶液，按照(表1)進(jìn)行梯度洗脫。

表1 流動相梯度

流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：220 nm；進(jìn)樣體積：5 μL；保留時間：11.5 min。

順式二溴菊酰氯標(biāo)樣溶液和12%氯蟲苯甲酰胺·溴氰菊酯懸浮劑試樣溶液的典型色譜圖(圖1、2)。

圖1 順式二溴菊酰氯標(biāo)樣溶液的高效液相色譜圖

圖2 12%氯蟲苯甲酰胺·溴氰菊酯懸浮劑試樣溶液的高效液相色譜圖

2.4 測定步驟

2.4.1 標(biāo)樣溶液的配制 稱取順式二溴菊酰氯標(biāo)樣0.01 g(精確至0.000 01 g)于50 mL容量瓶中，加入40 mL甲醇超聲振蕩3 min，取出后冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，室溫下衍生化反應(yīng)30 min，搖勻，此為標(biāo)樣母液。移取0.5 mL上述母液于50 mL容量瓶中，甲醇定容，搖勻，此為標(biāo)樣溶液。

2.4.2 試樣溶液的配制 稱取試樣約2 g(精確至0.000 1 g)于50 mL容量瓶中，加入40 mL甲醇超聲振蕩3 min，取出后冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，室溫下衍生化反應(yīng)30 min，搖勻，過濾。

2.5 測定 在上述條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針順式二溴菊酰氯衍生物的峰面積相對變化<5.0%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

2.6 計算 試樣中順式二溴菊酰氯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)按式(1)計算：

(1)

式中：

ω——試樣中順式二溴菊酰氯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；

A2——試樣溶液中順式二溴菊酰氯的峰面積的平均值；

m1——標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

p——標(biāo)樣中順式二溴菊酰氯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；

A1——標(biāo)樣溶液中順式二溴菊酰氯的峰面積的平均值；

m2——試樣的質(zhì)量，g；

100——標(biāo)樣溶液的稀釋倍數(shù)。

3 結(jié)果與討論

3.1 溶劑的選擇 本方法選用甲醇作為溶劑，同時作為順式二溴菊酰氯的衍生化試劑，順式二溴菊酰氯性質(zhì)活潑，在甲醇溶液中很快轉(zhuǎn)化為順式二溴菊酰氯衍生物，通過測定順式二溴菊酰氯衍生物峰面積來計算順式二溴菊酰氯的含量。

3.2 色譜條件的選擇 通過二極管陣列檢測器的光譜數(shù)據(jù)采集功能獲得順式二溴菊酰氯衍生物的紫外吸收光譜圖(圖3)。選擇順式二溴菊酰氯衍生物的最大吸收波長(220 nm)作為檢測波長，以甲醇和0.1%磷酸水溶液為流動相進(jìn)行梯度比例篩選。本研究最終確定的方法，空白溶劑和助劑在待測組分出峰位置不干擾檢測，待測組分峰純度值為99.9%，符合定量分析要求。

圖3 順式二溴菊酰氯標(biāo)樣溶液的紫外吸收光譜圖

3.3 分析方法的特異性試驗 稱取約2 g的試樣(試樣中不含順式二溴菊酰氯)，加入已知量的順式二溴菊酰氯標(biāo)樣，配制成一個含有已知順式二溴菊酰氯質(zhì)量的模擬試樣溶液。對該模擬試樣溶液用二極管陣列檢測器進(jìn)行光譜掃描，通過工作站軟件得到待測組分色譜峰純度為99.9%，表明分析方法的特異性符合要求(圖4)。

3.4 分析方法的線性關(guān)系試驗 配制一系列不同質(zhì)量濃度的標(biāo)樣溶液，按2.3方法進(jìn)行測定，以順式二溴菊酰氯質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，順式二溴菊酰氯衍生物峰面積為縱坐標(biāo)繪制線準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程為Y=8.394 1X+1.367 5，相關(guān)系數(shù)r=0.998 8。結(jié)果表明順式二溴菊酰氯在測試濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(表2)。

3.5 分析方法的檢出限和定量限 將順式二溴菊酰氯標(biāo)樣溶液按照一定的比例進(jìn)行稀釋，直到待測組分的信號值為基線噪音的10倍時作為定量限濃度，繼續(xù)將定量限濃度的順式二溴菊酰氯標(biāo)樣溶液進(jìn)行稀釋，直到待測組分的信號值為基線噪音的3倍時作為檢出限濃度。

順式二溴菊酰氯的定量限濃度為0.599 μg/mL，檢出限濃度為0.200 μg/mL，定量限和檢出限譜圖(圖5、6)。

圖5 順式二溴菊酰氯的定量限譜圖

3.6 分析方法的準(zhǔn)確度和精密度試驗 稱取試樣2 g，置于50 mL容量瓶中，再加入已知量的標(biāo)樣，按2.4.2方法配制成一個含有已知量順式二溴菊酰氯的模擬試樣溶液，按2.3的方法測定試樣溶液中順式二溴菊酰氯的質(zhì)量，將測得質(zhì)量與理論加入質(zhì)量進(jìn)行比較，計算添加回收率。順式二溴菊酰氯的回收率在98.6%～102.7%之間，平均回收率為99%(表3)。

表3 順式二溴菊酰氯回收率試驗結(jié)果

將上述測定結(jié)果以順式二溴菊酰氯占試樣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示，計算其標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.000 09%，變異系數(shù)為1.9%，<霍爾茲方程計算值6.0%，結(jié)果表明該方法的精密度可以滿足定量分析要求(表4)。

表4 順式二溴菊酰氯精密度試驗結(jié)果

4 結(jié)論

本文建立了高效液相色譜法測定12%氯蟲苯甲酰胺·溴氰菊酯懸浮劑中的順式二溴菊酰氯雜質(zhì)。實驗結(jié)果表明，該方法操作簡便，具有良好的線性關(guān)系、精密度和準(zhǔn)確度，且靈敏度高，適用于12%氯蟲苯甲酰胺·溴氰菊酯懸浮劑中順式二溴菊酰氯相關(guān)雜質(zhì)的質(zhì)量控制。本文建立的分析方法，也可作為其他農(nóng)藥產(chǎn)品中順式二溴菊酰氯檢測方法的開發(fā)依據(jù)。