李寧俠 董恒利 王海東 陳長生

中國是乙型肝炎高發(fā)的國家，且感染者約有9 300萬[1]。HBV的肝損傷并不是因為病毒本身，而是由于宿主針對表達(dá)病毒蛋白的肝細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答所致，慢性乙型肝炎患者約2 000萬，因乙肝相關(guān)肝病每年死亡人數(shù)約30萬例，死亡者和感染者數(shù)量在全球相應(yīng)病例中占比均為30%[2]。本病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，主要與機(jī)體細(xì)胞免疫失調(diào)有關(guān)，HBV的反復(fù)感染和復(fù)制成為治療效果不佳的主要因素。近年，HMGB1分子作為細(xì)胞因子，在感染性疾病研究中逐漸被重視，且有研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1與許多病毒感染性疾病的病因機(jī)制有關(guān)[3，4]，本研究主要明確乙肝患者中HMBG1、HBV-DNA及IL-17表達(dá)水平和三者間的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料隨機(jī)選取2016年6月～2017年1月在我院行PCR儀檢測HBV-DNA患者的信息，結(jié)合病史，嚴(yán)格按照2015年中華醫(yī)學(xué)會《慢性乙型肝炎防治指南》[5]診斷標(biāo)準(zhǔn)，并排除其他疾病，篩選126例為研究對象，其中男64例，女62例，年齡19～83歲，平均48歲。在本研究HBV-DNA載量分組中，HBV-DNA水平＜1.0E+3IU/ml為低水平組；HBV-DNA水平＜1.0E+7IU/ml且≥1.0E+3IU/ml為中水平組；HBV-DNA水平≥1.0E+7IU/ml為高水平組。

1.2 檢測方法使用達(dá)安基因股份有限公司乙型肝炎病毒核酸定量試劑盒及DA7600儀檢測HBVDNA水平，最低檢測下限1.0E+2IU/ml；使用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）和科華KHBST-360酶標(biāo)儀測定樣品中高遷移率族蛋白B1（HMGB1）和白細(xì)胞介素17（IL-17）的水平，試劑有效線性范圍分別為0.1～20ng/ml和0.5～100ng/L。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計量資料采用表示，使用非參數(shù)檢驗分析變量之間相關(guān)性，使用單因素ANOVA 分析組內(nèi)之間差異性。

2 結(jié)果

2.1 HMGB1檢測數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布極差14.40，中位數(shù) 0.00，均值（0.89±2.11）ng/ml，處在0.00值的頻數(shù)為87個，占比69.0%。

2.2 IL-17檢測數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布極差56.09，中位數(shù) 0.00，均值（2.44±7.75）ng/L，處在0.00值的頻數(shù)為93個，占比73.8%。

2.3 HMGB1水平、IL-17水平與HBV-DNA相關(guān)性HMGB1水平與IL-17之間有顯著相關(guān)性，且呈正相關(guān)；HMGB1、IL-17與HBV-DNA之間無相關(guān)性，見表1。不同水平HBV-DNA載量中HMGB1含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表1 HMGB1、IL-17與HBV-DNA相關(guān)性

表2 不同水平HBV-DNA載量組HMGB1水平比較

3 討論

高遷移率族蛋白1存在于真核細(xì)胞核內(nèi)染色體DNA上，作為非組蛋白，廣泛存在于哺乳動物的組織細(xì)胞中，在淋巴組織、胸腺、睪丸及新生兒的肝臟中高表達(dá)。1999年Wang等首次認(rèn)識到HMGB1作為一種炎癥因子具有的重要意義，HMGB1作為DAMPs家族成員之一與多種病毒性疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，HMGB1在DNA修復(fù)、復(fù)制、重組及基因轉(zhuǎn)錄中起重要作用，細(xì)胞外HMGB1與細(xì)胞分化、遷移、增殖、凋亡及介導(dǎo)炎癥反應(yīng)等密切相關(guān)，它可由壞死細(xì)胞被動釋放，也可由被激活的單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞主動分泌，在細(xì)胞外介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，HBV感染與炎癥因子的關(guān)系密切，且HMGB1在肝臟中高表達(dá)，而HMGB1在乙型肝炎發(fā)病過程中可能起重要作用，肝病病情輕重與其肝組織中HMGB1表達(dá)水平高低密切相關(guān)[6]。此外，研究顯示，HMGB1在新生兒窒息及小兒心腦損傷、成人慢阻肺、癲癇、牙周炎、原發(fā)性腎病綜合征、高血壓腦出血、HLH、血漿置換治療活動性血管炎性腎損傷等疾病中與其他細(xì)胞因子密切相關(guān)，聯(lián)合檢測對疾病早期診斷及預(yù)后判斷起到重要作用。在肺癌、宮頸腫瘤及甲狀腺乳頭狀癌中，參與了細(xì)胞自噬、細(xì)胞凋亡、腫瘤所處的炎性微環(huán)境及細(xì)胞外激酶的激活[7]，在腫瘤的出現(xiàn)和進(jìn)展過程中起到重要作用。此外還有研究顯示，通過檢測HMGB1的表達(dá)，判定甘氨酸對SAP肺組織具有一定的保護(hù)作用、甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑zebularine對人子宮內(nèi)膜癌ECC-1細(xì)胞系增殖、遷移有抑制作用，還可以證明HO-1的過表達(dá)對緩解急性肝衰竭、肝臟損傷有一定作用。通過阻斷高遷移率族蛋白-1誘導(dǎo)絲裂原活化蛋白激酶信號通路，減少炎癥反應(yīng)，為治療退行性腰椎間盤疾病提供了新的方向和思路[8]。在劉妍等[6]研究中，5例肝移植供肝肝組織和20例慢性輕度乙型肝炎肝組織均無HMGB1表達(dá)。20例慢性中度乙型肝炎肝組織有4例HMGB1陽性，與本研究126例慢性乙型肝炎（CHB）中處于陽性值占比31.0%的研究結(jié)果較相似，處于0.00值占比69.0%，均值（0.89±2.11）ng/ml，HMGB1在CHB中表達(dá)水平偏低。

IL-17是一種前炎癥細(xì)胞因子，它的家族包括6個成員的配體（IL-17A、B、C、D、E、F）和5個受體（IL-17RA、IL-17RB、IL-17RC、IL-17RD和SEF），其中發(fā)揮主要作用的為IL-17A，即IL-17。IL-17是T細(xì)胞誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)的最早啟動細(xì)胞因子，對白細(xì)胞有強(qiáng)大的化學(xué)趨化作用[9]。IL-17有多種來源，可以特異性產(chǎn)生IL-17的CD4+T細(xì)胞，即Th17細(xì)胞，但其不是唯一分泌IL-17的細(xì)胞，NK細(xì)胞、肥大細(xì)胞、iNKT及中性粒細(xì)胞等多種固有免疫細(xì)胞均可產(chǎn)生IL-17[10]。在慢性乙型肝炎中，HBV持續(xù)感染，肝組織損害的關(guān)鍵點在于宿主免疫功能紊亂，免疫異常與細(xì)胞因子及細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)有關(guān)，細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)是由致炎和抗炎因子組成，是肝組織中的致炎動力，兩者過度表達(dá)所致的炎性過程即是CHB的發(fā)生發(fā)展過程。IL-17則介導(dǎo)抗病毒反應(yīng)清除病毒，但會造成肝細(xì)胞嚴(yán)重受損，加重病情，原理是中性粒細(xì)胞趨化、參與炎癥反應(yīng)、放大炎癥反應(yīng)。有學(xué)者研究，在CHB輕、中、重度組血清IL-17的水平均高于健康對照組，且均依輕、中、重分型逐漸升高[10]，本研究中，只對總體IL-17分布和處于0.00值占比進(jìn)行統(tǒng)計，提示IL-17在CHB中有一定的表達(dá)。

HBV-DNA載量作為評估HBV復(fù)制狀態(tài)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，被認(rèn)為是HBV具有活動性和傳染性的重要標(biāo)志，HBV-DNA載量檢測有利于明確感染者所處的時期與狀態(tài)、是否進(jìn)行抗病毒治療及方案的選擇。本研究中HBV-DNA與血清中IL-17和HMGB1水平均無相關(guān)性，三組不同HBV-DNA載量與HMGB1水平之間也均無相關(guān)性，這表明兩個細(xì)胞因子水平變化與病毒復(fù)制無關(guān)，與齊育英等[11]研究類似，進(jìn)一步證明嗜肝DNA病毒并沒有直接導(dǎo)致感染細(xì)胞的病變，而是通過激發(fā)宿主免疫反應(yīng)及細(xì)胞因子共同作用于肝臟，IL-17和HMGB1有很好相關(guān)性，參與了類似Th1細(xì)胞免疫功能，有利于肝細(xì)胞內(nèi)的病毒被清除，但卻增強(qiáng)了肝組織的炎性反應(yīng)，使肝組織受損嚴(yán)重，在126例CHB中，IL-17和HMGB1水平都很低，也印證了乙肝慢性化，致使病毒長期存在，所以在CHB中除監(jiān)測HBV-DNA載量，還要關(guān)注IL-17和HMGB1水平，其增高提示疾病處在活動期，病情加重。綜上，在CHB中，HMGB1與IL-17之間有很好的相關(guān)性，HMGB1與HBV-DNA之間無相關(guān)性。