單 峰 喬海風(fēng) 劉曼華 周 峰 劉宏斌

江蘇省南通市第一人民醫(yī)院(226001)

作為一種常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，卵巢癌(OC)發(fā)病率呈逐年升高趨勢，其中以上皮性卵巢癌(EOC)的發(fā)病占多數(shù)[1]。由于上皮性卵巢癌臨床早期無典型癥狀，確診時患者多已處于晚期，晚期患者的5年生存率較低，早期發(fā)現(xiàn)可有效提高患者生存率。T-型鈣通道是鈣離子通道家族的一員[2]，包括Cav3.1、Cav3.2、Cav3.3 3種亞型，其中Cav3.1和Cav3.2目前研究較深入。聯(lián)合糖類抗原125(CA125)水平增高與腫瘤的分期密切相關(guān)，在上皮性卵巢癌中高表達。人附睪蛋白4 (HE4)作為腫瘤標(biāo)志物與CA125有著類似的敏感性，在惡性盆腔疾病的診斷中具有獨特的優(yōu)勢。T-型鈣離子通道、CA125及HE4三者聯(lián)合檢測在上皮性卵巢癌的研究較為少見。本課題擬探究檢測T-型鈣離子通道、CA125及HE4在上皮性卵巢癌的病變及預(yù)后的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性收集本院2011年1月—2012年12月經(jīng)病理檢查確診為上皮性卵巢癌38例(癌癥組)，確診為良性卵巢腫瘤患者38例(良性組)，選擇同期本院體檢的健康女性38例(對照組)?；颊吣挲g(39.2±3.9)歲(23～68歲)。均排除患有其他系統(tǒng)惡性腫瘤、神志不清、哺乳期或妊娠女性。在5年內(nèi)定期對患者回訪。本研究得到醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)，所有受試者均知情并同意本研究。

1.2 外周血CA125和HE4檢測

收集3組受試者空腹外周血，加入100mmol/L的枸櫞酸鈉0.2ml，離心取上清，應(yīng)用酶聯(lián)免疫方法檢測CA125(武漢默沙克生物科技有限公司)和HE4(上海酶聯(lián)生物科技有限公司)。

1.3 卵巢組織的Cav3.1與Cav3.2表達

取癌癥組和良性組患者卵巢組織行免疫組化分析。Cav3.1和Cav3.2位于細(xì)胞漿內(nèi)，胞漿和(或)胞核中出現(xiàn)棕黃色至深棕黃色[3]。每張切片在5個隨機的高倍視野中計數(shù)100 個細(xì)胞，染色強度按下列標(biāo)準(zhǔn)評分：無色為0分；染色弱(淺棕黃色)但明顯強于陰性對照為1分；染色清晰(棕黃色)為2分；染色強(棕褐色)為3分。陽性細(xì)胞率≤25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為2分，>75%為3分；陽性細(xì)胞率>10%視為異常表達。將以上兩項得分相加，0分判為“-”，1～2分判為“﹢”，3～4分判為“(﹢﹢)”，5～6分判為“(﹢﹢﹢)[6]。Cav3.1與Cav3.2抗體均購自美國Proteintech Group公司。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)使用SPSS18.0軟件進行分析，用χ2檢驗計數(shù)資料，用t檢測計量資料，P<0.05表明有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 各組外周血中CA125與HE4表達水平比較

外周血中的CA125與HE4水平對照組<良性組<癌癥組(P<0.05)，見表1。

表1 各組血中CA125與HE4水平比較

*與對照組比#與良性組比P<0.05

2.2 良性組與癌癥組卵巢組織中T-型鈣離子通道蛋白表達水平比較

T-型鈣離子通道Cav3.1、Cav3.2蛋白在癌癥組中的表達高于良性組 (P<0.05)，見圖1和表2。

圖1 良性組與癌癥組卵巢中Cav3.1、av3.2表達(200)

表2 兩組腫瘤患者卵巢中T-型鈣離子通道蛋白表達水平比較[例(%)]

2.3 各組受試者5年生存率的對比

患者5年生存率，良性組均高于癌癥組(P<0.05)，見表3。

表3 各組受試者5年生存率的對比(例)

*與良性組比 P<0.05

3 討論

惡性腫瘤的發(fā)生是多種因素、分步驟共同作用，且漫長而又復(fù)雜的過程[7]。雖然從分子生物學(xué)角度了解到癌癥發(fā)生的基因基礎(chǔ)，但具體過程中會產(chǎn)生哪些蛋白質(zhì)至今了解甚少。目前臨床卵巢癌通常處于晚期，即使經(jīng)過手術(shù)與放化療，患者的生存率仍相對較低[8]。檢測外周血中腫瘤標(biāo)志物，是判斷卵巢癌發(fā)生及分期的重要方法，尋找準(zhǔn)確有效的標(biāo)志物是當(dāng)前研究的熱點。目前有多種標(biāo)志物可以用來檢測上皮性卵巢癌的發(fā)生，本研究中選擇CA125、HE4與T-型鈣離子通道進行研究[9]。

CA125是目前臨床普遍應(yīng)用的一種腫瘤標(biāo)志物[10]。對卵巢癌的病情監(jiān)控作用得到臨床肯定，但在早期診斷中的作用仍存在一定爭議。CA125在卵巢癌早期患者中并不全部表現(xiàn)升高趨勢，且在一些良性盆腔疾病、其他系統(tǒng)惡性腫瘤中表達水平也有升高，單獨檢測CA1125進行判斷存在爭議[11]。在本研究中，對照組CA125水平顯著低于良性組和癌癥組。

HE4是一種新發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)志物，被認(rèn)為是附睪特異性的[12]。有研究表明[13]，HE4在上皮性卵巢癌中表達水平較健康人和良性盆腔疾病者高，對上皮性卵巢癌的診斷可能有一定作用。在本研究中，外周血中HE4水平癌癥組高于對照組和良性組，說明HE4水平的升高與卵巢癌的發(fā)生有關(guān)。借助基因芯片研究發(fā)現(xiàn)[14]，HE4除了在附睪中表達，在近端器官上皮與生殖道、唾液腺中有高表達，而在健康的卵巢組織中表達水平極低，但在卵巢惡性腫瘤中表達上調(diào)，在其他系統(tǒng)的惡性腫瘤中表達水平極低甚至不表達，因此HE4具有上皮性卵巢癌的腫瘤標(biāo)志物獨特優(yōu)勢。通過cDNA的微陣列分析[15]，HE4對卵巢癌檢測的敏感性與CA125相似，但特異性高于CA125，可作為卵巢癌腫瘤標(biāo)志物，而聯(lián)用CA125對卵巢癌診斷具有較好臨床意義。此外，也有研究表明[13]，單獨采用HE4檢測的敏感度與準(zhǔn)確性均高于CA125檢測，說明在上皮性卵巢癌的診斷中，應(yīng)用HE4具有很高的價值并能補充CA125的不足。

鈣離子參與了機體多種生理活動，也是細(xì)胞內(nèi)的第二信使[15]。以鈣離子作為第二信使的信號通路廣泛分布于機體內(nèi)，鈣通道表達變化直接或間接參與癌癥的發(fā)生[16]。T型鈣通道是鈣離子通道家族的一員，具有激活快、失活快、去活慢、低電壓激活的特性，憑借在細(xì)胞增殖中獨特作用成為藥物靶點研究的熱點。T型鈣通道在脊椎動物中有3種亞型，本研究選擇其中Cav3.1，Cav3.2進行研究，良性組中Cav3.1與Cav3.2蛋白表達均低于良性組和癌癥組。

綜上所述，本研究應(yīng)用3項指標(biāo)檢測評估上皮性卵巢癌診斷與愈后，為深入研究提供參考。由于標(biāo)志物在腫瘤細(xì)胞中表達模式及病理類型差異，為臨床診斷上皮性卵巢癌的預(yù)測、治療、預(yù)后評估將發(fā)揮重要作用。