郭亞男 張馨予 胥夢(mèng) 王繼華

（哈爾濱師范大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，哈爾濱 150025）

多環(huán)芳烴（Polycyclic aromatic hydrocarbons，PAHs）是一種具有兩個(gè)或多個(gè)苯環(huán)的有機(jī)污染物，在環(huán)境中廣泛存在［1］。主要來源于森林火災(zāi)、火山噴發(fā)或化石燃料的不完全燃燒［2-3］。由于PAHs具有低溶解度，高疏水性，高辛醇-水分配系數(shù)（KOW）和降解的頑固性等特性，使其在環(huán)境中積累到高水平，在我國(guó)東北污灌區(qū)、天津地區(qū)等部分地區(qū)土壤中均有檢出［4-6］。迄今已發(fā)現(xiàn)200多種PAHs，美國(guó)環(huán)境保護(hù)署列舉出16種優(yōu)先修復(fù)的PAHs，萘為其中一種，萘因具有揮發(fā)性使它更容易與受體接觸，導(dǎo)致患溶血性貧血、皮膚病、視網(wǎng)膜炎及細(xì)胞癌變等疾?。?-9］。土壤中的萘可被植物吸收，進(jìn)入食物鏈，對(duì)人類健康和生態(tài)系統(tǒng)構(gòu)成嚴(yán)重威脅［10］。微生物修復(fù)是一種治理環(huán)境污染的有效方法，與其他方法相比，經(jīng)濟(jì)、高效且無二次污染［11-13］。只要正確的利用微生物群體，它們便利用土壤中的萘作為碳源和能源進(jìn)行生長(zhǎng)，且細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)能夠?yàn)樯镄迯?fù)提供一種更快速、更均勻地降解萘的手段［14-16］。

根據(jù)文獻(xiàn)調(diào)研，PAHs污染北方較南方嚴(yán)重，冬季PAHs的排放量大約是夏季的1.6倍［17］。國(guó)內(nèi)城市土壤中的PAHs主要來源于高溫燃燒源和石油源所構(gòu)成的混合型污染［18］。我國(guó)北方年平均氣溫低于15℃，在此溫度下許多最佳生長(zhǎng)溫度在20℃及以上的萘降解菌無法發(fā)揮其降解能力，而在15℃或以下恰恰是低溫微生物的最適生長(zhǎng)溫度。因此，篩選對(duì)萘具有強(qiáng)降解能力的低溫微生物是十分必要的。而北方土壤內(nèi)的土著菌已長(zhǎng)期適應(yīng)了寒冷環(huán)境，因此篩選萘的低溫降解菌，選擇北方地區(qū)石油污染較嚴(yán)重的地區(qū)作為降解菌株的源土壤。大慶市，別稱油城，是一座以石油、石化為支柱產(chǎn)業(yè)的著名工業(yè)城市。但是在開采過程中無法避免石油泄漏問題，由此產(chǎn)生萘污染的環(huán)境問題日益嚴(yán)重。并且該區(qū)域的日平均氣溫低于15℃，持續(xù)6-9個(gè)月。因此，研究從黑龍江省大慶油田地區(qū)污染土壤篩選能以萘為唯一碳源和能源的降解菌，研究降解菌在萘-無機(jī)鹽培養(yǎng)基中對(duì)萘的降解情況；得到高效降解菌對(duì)其進(jìn)行鑒定；對(duì)高效降解菌的生長(zhǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化；同時(shí)分析降解階段其主控因素。旨為在低溫條件下利用微生物修復(fù)技術(shù)治理PAHs污染提供優(yōu)良菌株資源。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品采集 土樣取自黑龍江省大慶市紅崗區(qū)圖強(qiáng)西街油田石油污染土壤表層（0-10 cm），地理坐標(biāo)為：緯度46.522217，經(jīng)度124.945595。采用五點(diǎn)采樣法取樣后帶回實(shí)驗(yàn)室，過20 mm篩，保存于4℃冰箱。

1.1.2 主要培養(yǎng)基 LB液體培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，氯化鈉10 g，蒸餾水1 000 mL，pH 7.0，1×105Pa滅菌20 min。LB固體培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，氯化鈉10 g，瓊脂15-20 g，蒸餾水1 000 mL，pH 7.0，1×105Pa滅菌20 min。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，氯化鈉5 g，瓊脂15-20 g，蒸餾水1 000 mL，pH 7.0-7.2，1×105Pa滅菌20 min。檸檬酸鹽實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基：NH4H2PO41 g，K2HPO41 g，NaCl 5 g，MgSO40.2 g，檸檬酸鈉 2 g，瓊脂15-20 g，蒸餾水1 000 mL，1%溴香酚藍(lán)乙醇溶液，10 mL，1×105Pa滅菌20 min。無機(jī)鹽培養(yǎng)基：（NH4）2SO40.5 g，Na2HPO4·2H2O 3.5 g，MgCl2·6H2O 0.1 g，Ca（NO3）2·4H2O 0.05 g，KH2PO41 g，蒸餾水1 000 mL，1×105Pa滅菌20 min。萘-無機(jī)鹽培養(yǎng)基：將萘溶解于正己烷溶液，待正己烷完全揮發(fā)，萘晶體析出后，加入預(yù)先滅菌的無機(jī)鹽培養(yǎng)基均勻混合。

1.2 方法

1.2.1 低溫降解菌馴化、分離及篩選方法 微生物的馴化過程是通過人為措施使得微生物逐步適應(yīng)某種環(huán)境，最后獲得具有較高耐受力和活力的菌株。萘對(duì)菌體有一定的毒害作用，最大污染物濃度馴化法使得能夠適應(yīng)該污染物濃度的菌株存活下來，并隨著馴化的進(jìn)行漸漸適應(yīng)該環(huán)境而進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖。取5 g土樣裝入含有200 mL萘-無機(jī)鹽培養(yǎng)基（萘濃度200 mg/L）的錐形瓶中，10℃，120 r/min振蕩培養(yǎng)，7 d后觀察培養(yǎng)液變化。按體積10%的接種量轉(zhuǎn)接到新鮮萘-無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，萘濃度增加至400 mg/L，此后，萘的質(zhì)量濃度按600、800、1 000 mg/L逐步提升。吸取5代培養(yǎng)液采用稀釋涂布法分離純化，選擇菌落生長(zhǎng)較好的菌株在萘-無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基上劃線復(fù)篩，-80℃甘油保存。

1.2.2 萘降解率的測(cè)定

1.2.2.1 菌懸液的制備 將所得菌株接入LB液體培養(yǎng)基中，10℃、120 r/min振蕩培養(yǎng)，選擇對(duì)數(shù)期菌株離心收集細(xì)菌（10 000 r/min，6 min），用無菌水重復(fù)沖洗3次，用無機(jī)鹽培養(yǎng)基將菌懸液調(diào)節(jié)至所需菌濃度。

1.2.2.2 菌株對(duì)萘的降解 將所得菌株接入200 mL的萘-無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基（萘濃度為300 mg/L）中，在10℃、120 r/min下振蕩培養(yǎng)，3個(gè)重復(fù)，設(shè)立不接菌液為對(duì)照組。24 h取樣一次。取樣吸取5 mL樣品加入裝有2 g氯化鈉和5 mL正己烷溶液的離心管中，用旋渦混合器混勻2 min，離心（5 000 r/min，5 min），轉(zhuǎn)移上清液正己烷層至玻璃小瓶中。再用5 mL正己烷重復(fù)上述萃取過程后，合并上清液用無水Na2SO4脫水，30℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，氮吹1 mL以下，正己烷定容至1 mL，待測(cè)。

Agilent 7890/5975C-GC/MSD檢測(cè)程序設(shè)定：進(jìn)樣口溫度280℃，分流進(jìn)樣，載氣：氦氣（高純），流量 1 μL/min（恒流），進(jìn)樣量 ：1.0 μL，色譜柱DB5-MS（15 m×0.25 mm，0.1 μm），升溫程序：80℃，保持2 min；以20℃/min升至180℃，保持5 min；再以10℃/min速率升至240℃，保持5 min。質(zhì)譜條件：離子源溫度、離子化能量、接口溫度、四極桿溫度分別為230℃、70 eV、280℃和150℃，溶劑延遲5 min，離子檢測(cè)（SIM）模式。

1.2.2.3 萘的標(biāo)準(zhǔn)曲線 萘儲(chǔ)備液按照梯度稀釋，分別稀釋配制成濃度為20 mg/L、40 mg/L、60 mg/L、80 mg/L和100 mg/L的溶液。用氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定萘各濃度時(shí)對(duì)應(yīng)的峰面積，以萘各梯度標(biāo)準(zhǔn)液濃度為X，對(duì)應(yīng)的峰面積為Y，制作萘標(biāo)準(zhǔn)線Y=2613.9X-7146.4，標(biāo)準(zhǔn)曲線R2=0.999。

1.2.3 低溫降解菌的鑒定

1.2.3.1 形態(tài)學(xué)觀察及生理生化特征 所得菌株接種于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，10℃培養(yǎng)7 d，在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、菌體大小。生理生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果參照鑒定手冊(cè)［19］。

1.2.3.2 16S rDNA基因序列測(cè)定與系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系的分析 利用細(xì)菌基因組提取試劑盒（HaiGene，B0135）提取細(xì)菌DNA，并利用引物8F（5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′） 和 1492R（5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′）對(duì)細(xì)菌 16S rDNA基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增。50 μL擴(kuò)增體系為：DNA模板 2 μL，Super Taq DNA Polymerase 0.5 μL，10×Hi PCR Buffer 5.0 μL dNTP Mixture 4.0 μL，PCR Forward Primer（10 μmol/L） 和 PCR Reverse Primer（10 μmol/L）各 PCR Reverse Primer（10 μmol/L），ddH2O Up to 50 μL。PCR 擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃ 5 min；94℃30 s；51℃ 1 min 30 s，72℃ 2 min 30 s，30 個(gè)循環(huán) ；72℃ 10 min。經(jīng)篩選后的菌株送至哈爾濱瑞博興科生物技術(shù)有限公司完成16S rDNA測(cè)序工作。通過MEGA 7.0軟件Alignment中的CLUSTAL W對(duì)目的序列和參考序列進(jìn)行比對(duì)，根據(jù)比對(duì)結(jié)果選擇Bootstrap test of phylogeny并用Neighbor-joining構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.2.4 降解菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定 將所得菌株接入200 mL的LB液體培養(yǎng)基中，10℃、120 r/min振蕩培養(yǎng)，4 h取樣1次，3個(gè)重復(fù)，設(shè)立不接菌液為對(duì)照組（CK）。用UV759CRT紫外分光光度計(jì)測(cè)吸光值（OD600）表示菌株的生長(zhǎng)量。

1.2.5 降解菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化 萘-無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，對(duì)萘濃度、培養(yǎng)溫度、初始pH、培養(yǎng)轉(zhuǎn)數(shù)進(jìn)行單因素試驗(yàn)，測(cè)量菌液OD600。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，添加時(shí)間因素，按正交試驗(yàn)L18（35）五因素三水平共18組試驗(yàn)對(duì)菌株搖瓶培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，每組3個(gè)重復(fù)。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 利用 IBM SPSS Statistics 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 低溫萘降解菌的篩選

從黑龍江省大慶油田附近污染土壤中，采用污染物濃度馴化法進(jìn)行菌株的馴化。在馴化后期以萘為唯一碳源（1 000 mg/L）富集體系中初篩，富集過程初始溶液為無色，從2 d開始有顯色變化，變?yōu)槌壬伾饾u加深。富集體系結(jié)束后將富集液采用稀釋涂布法涂LB培養(yǎng)基平板，選擇菌落生長(zhǎng)較好的菌株在萘-無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基中復(fù)篩，最終得到5株以萘為唯一碳源生長(zhǎng)的低溫菌株。

2.2 低溫萘降解菌降解能力的結(jié)果與分析

對(duì)5株低溫萘降解菌在萘-無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基（萘濃度300 mg/L）中培養(yǎng)10 d，萘的降解情況測(cè)定如圖1所示。1號(hào)菌對(duì)萘污染物的毒性適應(yīng)能力較強(qiáng)，呈勻速上升趨勢(shì)，具有較好的降解能力。2號(hào)菌初期能較快降解萘，72 h之后降解速率下降，降解率增長(zhǎng)緩慢。3號(hào)和4號(hào)菌各階段降解趨勢(shì)基本保持一致，相對(duì)于其他菌株具有更強(qiáng)的降解能力，降解速度從培養(yǎng)初期即開始上升，第1天至3天上升得最快，3 d后上升的速度減緩。與培養(yǎng)初期相比，4 d內(nèi)在添加3號(hào)菌和4號(hào)菌的處理中，在對(duì)照組非生物因素影響基礎(chǔ)上，萘的降解率達(dá)94.43%和95.47%，在耐受能力和降解速度方面具明顯優(yōu)勢(shì)。5號(hào)菌相比較于其他菌株適應(yīng)能力較慢，但經(jīng)過一定時(shí)間后，降解率持續(xù)增加。根據(jù)不同菌株在低溫條件下對(duì)萘的適應(yīng)能力以及自身生長(zhǎng)狀況，最終選擇3號(hào)和4號(hào)菌作為下一步研究對(duì)象進(jìn)行研究。并將3號(hào)、4號(hào)菌命名為GN1和GN2。

圖1 不同低溫萘降解菌降解能力測(cè)定

2.3 低溫萘降解菌的鑒定

采用形態(tài)觀察及生理特性對(duì)GN1和GN2菌株初步鑒定，結(jié)果見表1。

菌株GN1和GN2系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果如圖2所示。根據(jù)16S rDNA序列同源性比對(duì)，GN1和GN2皆與假單胞菌屬（Pseudomonassp.）同源性最近，序列相似性均高達(dá)99%。綜合菌株的形態(tài)觀察、生理生化特性及16S rDNA序列比對(duì)分析，可確定GN1和GN2均屬于假單胞菌屬。GN1和GN2所測(cè)序列提交到GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得序列登錄號(hào)分別為MK208705和 MK208706。

2.4 低溫萘降解菌的生長(zhǎng)曲線

菌株GN1和GN2的生長(zhǎng)曲線見圖3，2株菌均適宜在LB液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，GN1、GN2從接種到第8小時(shí)細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢，延滯期較短；從8 h到60 h，細(xì)胞數(shù)量急劇增加，處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；60 h后，隨著培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的消耗，細(xì)菌細(xì)胞密度變化不大，細(xì)菌進(jìn)入穩(wěn)定期。其中GN1生物量略高于GN2。

表1 GN1和GN2降解菌的形態(tài)及生理生化特征

2.5 菌株GN1和GN2培養(yǎng)條件優(yōu)化

菌株GN1和GN2培養(yǎng)條件單因素優(yōu)化，結(jié)果見圖4。GN1和GN2最優(yōu)單因素培養(yǎng)條件均為：萘-無機(jī)鹽培養(yǎng)基（萘濃度300 mg/L），pH 7.0，培養(yǎng)溫度10℃，培養(yǎng)轉(zhuǎn)數(shù)120 r/min。

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，選擇合適的因素和水平（表2），按正交試驗(yàn)L18（35）對(duì)菌株GN1、GN2搖瓶培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 20.0進(jìn)行方差分析，菌株GN1結(jié)果見表3。各因素各水平之間差異顯著，說明各個(gè)因素之間具有交互作用，5個(gè)因素對(duì)菌株GN1生長(zhǎng)影響的強(qiáng)弱順序?yàn)椋号囵B(yǎng)時(shí)間＞培養(yǎng)轉(zhuǎn)數(shù)＞培養(yǎng)溫度＞初始pH＞萘濃度。水平之間差異顯著，進(jìn)行多重比較，結(jié)合單因素統(tǒng)計(jì)量表（未給出）可得，GN1的最佳搖瓶培養(yǎng)條件組合為A3B3C1D3E3，即萘濃度300 mg/L，培養(yǎng)溫度15℃，初始pH 6.0，培養(yǎng)轉(zhuǎn)數(shù)180 r/min，培養(yǎng)時(shí)間7 d，在此條件下萘的去除率達(dá)到99.1%。菌株GN2結(jié)果見表4，同理，5個(gè)因素對(duì)菌株GN2生長(zhǎng)影響的強(qiáng)弱順序?yàn)椋号囵B(yǎng)轉(zhuǎn)數(shù)＞培養(yǎng)溫度＞培養(yǎng)時(shí)間＞初始pH＞萘濃度，GN2的最佳搖瓶培養(yǎng)條件組合為A3B3C1D3E3，即萘濃度300 mg/L，培養(yǎng)溫度15℃，初始pH 6.0，培養(yǎng)轉(zhuǎn)數(shù)180 r/min，在此條件下，萘的去除率達(dá)到99.8%。

圖2 基于16S rDNA基因序列同源性的GN1和GN2系統(tǒng)發(fā)育樹

圖3 降解菌株生長(zhǎng)曲線

表2 正交試驗(yàn)環(huán)境因素和水平的設(shè)計(jì)

表3 GN1正交試驗(yàn)的方差分析

表4 GN2正交試驗(yàn)的方差分析

3 討論

微生物修復(fù)技術(shù)已成為人們選擇去除環(huán)境中萘的首要辦法和手段，篩選出能夠降解萘的菌株是該技術(shù)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)［20］。大量研究表明多個(gè)菌屬的細(xì)菌可對(duì)多數(shù)有機(jī)物進(jìn)行降解，尤其是假單胞菌屬，如孟建宇等［21］從烏梁素海水中篩選出一株假單胞菌，在10 d內(nèi)可降解質(zhì)量濃度為3.5 g/L的萘。但是目前研究多數(shù)萘的降解菌最適生長(zhǎng)溫度通常為25-37℃，低溫萘降解菌的研究卻鮮見報(bào)道。本研究對(duì)篩選出的低溫萘降解菌測(cè)定其降解效率時(shí)發(fā)現(xiàn)，在未加菌液的對(duì)照組中，萘的濃度也有所降低，在控制其他環(huán)境因素（萘濃度、溫度、pH和轉(zhuǎn)數(shù)）一致的情況下，可能是由于在降解過程中體系不是完全的密閉以及在取樣過程中的揮發(fā)所造成的；同時(shí)在降解過程中可能存在光化學(xué)降解，Bertilsson［22］對(duì)淡水中多環(huán)芳烴的光化學(xué)降解及其對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響-水化學(xué)的影響進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在實(shí)驗(yàn)期間，觀察到存在光化學(xué)誘導(dǎo)所致的萘消耗，因此萘可能會(huì)發(fā)生光降解，此實(shí)驗(yàn)萘的光降解速率實(shí)驗(yàn)結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)對(duì)照組中可能由于光降解產(chǎn)生的降解結(jié)果類似。綜合這兩方面，可能是本實(shí)驗(yàn)對(duì)照組降解率略高的原因。有關(guān)多環(huán)芳烴降解菌降解效率的研究，多數(shù)在實(shí)驗(yàn)中沒有加入空白組對(duì)照，這可能也是日后研究需要關(guān)注的地方。在低溫條件下GN1和GN2可以快速降解萘，在對(duì)照組非生物因素影響基礎(chǔ)上，萘（300 mg/L）的降解率在4 d內(nèi)達(dá)到94.43%和95.47%，在耐受能力和降解速度方面具明顯優(yōu)勢(shì)。為低溫條件下利用微生物修復(fù)技術(shù)治理PAHs污染提供了優(yōu)良菌株資源，同時(shí)降解動(dòng)態(tài)研究曲線也為菌株投入實(shí)際應(yīng)用提供了時(shí)間參比。

圖4 不同培養(yǎng)條件對(duì)菌株GN1、GN2生長(zhǎng)的影響

東北地區(qū)是我國(guó)重要的老工業(yè)基地之一，能源消耗較大，各類燃料的燃燒效率較低，且氣候寒冷，取暖期漫長(zhǎng)，常溫菌無法發(fā)揮降解作用，由此產(chǎn)生的萘污染以及自然過程和人為過程導(dǎo)致土壤酸化問題日益嚴(yán)重［23-25］。在過去的20年中國(guó)土壤pH平均下降0.5個(gè)單位［26］。污染和酸化已成為土壤生態(tài)系統(tǒng)的兩大威脅。本研究富集篩選出的菌株GN1、GN2能在低溫（0-15℃）、偏酸（pH 6.0）和萘質(zhì)量濃度為50-300 mg/L的條件中正常生長(zhǎng)。因此，GN1、GN2菌具有較好的研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用前景。

正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)（Orthogonal experimental design）是研究多因素多水平的一種設(shè)計(jì)方法。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)多用于培養(yǎng)條件的優(yōu)化，如Qingmiao等［27］采用正交試驗(yàn)對(duì)E2降解菌降解條件進(jìn)行優(yōu)化，針對(duì)低溫萘降解菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化，目前尚未見相關(guān)研究報(bào)道。本研究在低溫萘降解菌單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，利用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)萘-無機(jī)鹽培養(yǎng)基中萘濃度、培養(yǎng)溫度、初始pH、培養(yǎng)轉(zhuǎn)數(shù)、培養(yǎng)時(shí)間5個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化，所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 20.0進(jìn)行方差分析。正交試驗(yàn)結(jié)果與單因素試驗(yàn)結(jié)果存在差異，因各因素之間存在著交互作用，正交試驗(yàn)結(jié)果更具有說服力，利用正交設(shè)計(jì)篩選組合結(jié)果可靠，方法可行。同時(shí)降解菌株的生長(zhǎng)與五因素均有顯著關(guān)系，利用正交試驗(yàn)分析影響萘降解的主控因素，在實(shí)際土壤萘污染治理過程中，依據(jù)環(huán)境因素，合理選擇菌株并優(yōu)化調(diào)控手段實(shí)現(xiàn)土壤萘污染高效修復(fù)。

4 結(jié)論

（1）從黑龍江省大慶油田地區(qū)污染土壤篩選出2株在低溫條件下高效降解萘的菌株，編號(hào)為GN1和GN2。在對(duì)照組非生物因素影響基礎(chǔ)上，萘（300 mg/L）的降解率在4 d內(nèi)達(dá)到94.43%和95.47%，顯示出在低溫條件下較強(qiáng)降解萘的能力。（2）菌株GN1和GN2經(jīng)形態(tài)觀察、生理生化特性和16S rDNA基因序列鑒定皆屬于假單胞菌屬（Pseudomonas）。（3）菌株GN1和GN2的最佳培養(yǎng)條件均為：萘-無機(jī)鹽培養(yǎng)基（萘濃度300 mg/L），培養(yǎng)溫度15℃，初始pH 6.0，培養(yǎng)轉(zhuǎn)數(shù)180 r/min，培養(yǎng)時(shí)間7 d，去除率分別達(dá)到99.1%和99.8%。（4）菌株的生長(zhǎng)與五因素均有顯著關(guān)系。在實(shí)際土壤萘污染治理過程中，依據(jù)菌株降解最適條件，優(yōu)化調(diào)控手段實(shí)現(xiàn)土壤萘污染高效修復(fù)。