劉超 劉洪偉 汪步青 趙雯雅 王雅娜 張麗萍

（1. 河北工業(yè)大學(xué)，天津 300000；2. 河北省科學(xué)院生物研究所，石家莊 050081；3. 河北省主要農(nóng)作物病害微生物控制工程技術(shù)研究中心，石家莊 050081）

芽孢桿菌（Bacillus）由于能產(chǎn)生多種胞外生物活性物質(zhì)，在醫(yī)藥、食品、農(nóng)業(yè)及工業(yè)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景［1］。產(chǎn)生的胞外抑菌活性物質(zhì)可分為由核糖體途徑合成的抑菌物質(zhì)：細(xì)菌素、抗菌蛋白、幾丁質(zhì)酶、β-1，3-葡聚糖酶和由非核糖體途徑合成的抑菌物質(zhì)：表面活性素、伊枯草素、芬薺素、聚酮類化合物等［2］。其中，細(xì)菌素及表面活性素、伊枯草素、芬薺素及抗菌蛋白類物質(zhì)的研究較多［3］。從解淀粉芽孢桿菌FZB42中分離的環(huán)狀細(xì)菌素（Amylocyclicin）對(duì)革蘭氏陽性細(xì)菌有較好抑制作用［4］；解淀粉芽孢桿菌SP-1-13LM 產(chǎn)生的細(xì)菌素（PPB），能抑制李斯特氏菌、沙門氏菌和志賀氏桿菌。楊瑞先等［5］分離到兩株解淀粉芽孢桿菌Md31和Md33對(duì)牡丹病原菌有良好抑制效果，所產(chǎn)脂肽類粗提物也具有較強(qiáng)的體外抑菌活性。郭繼平等［6］篩選到的一株解淀粉芽孢桿菌生防菌能分泌多種抗菌蛋白并對(duì)葡萄霜霉病有抑制作用。關(guān)于解淀粉芽孢桿菌抗菌物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)、功能特性及應(yīng)用研究，集中在多種抑菌活性物質(zhì)，對(duì)單一物質(zhì)的研究缺乏。

解淀粉芽孢桿菌產(chǎn)生的不同抑菌活性物質(zhì)其抑菌作用機(jī)制不同。細(xì)菌素可影響細(xì)胞膜的滲透壓［7］，幾丁質(zhì)酶可降解真菌的細(xì)胞壁［7］，β-1，3-葡聚糖酶通過水解β-1，3-糖苷鍵破壞真菌細(xì)胞壁［8］。表面活性素能改變細(xì)胞膜通透性使細(xì)胞內(nèi)離子流出［9］，伊枯草素能使真菌菌絲分解和抑制孢子萌發(fā)［10］，芬薺素有良好的脂溶性能與細(xì)胞膜磷脂層反應(yīng)［11］等。潘虹余等［12］發(fā)現(xiàn)解淀粉芽孢桿菌 B15 產(chǎn)生的伊枯草素A和芬薺素以協(xié)同作用誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的形式來抑制灰葡萄孢菌絲的生長(zhǎng)。但不同抗菌物質(zhì)對(duì)灰葡萄孢的作用效果和作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

本實(shí)驗(yàn)室在前期篩選到一株解淀粉芽孢桿菌BA-26其代謝產(chǎn)物抑菌活性強(qiáng)，研究表明具有酸堿穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性和蛋白酶穩(wěn)定性［13］。本研究分離純化了菌株BA-26胞外抑菌物質(zhì)并將初步分離的粗提物及純化后的抗菌物質(zhì)對(duì)灰葡萄孢進(jìn)行抑菌作用研究。了解此菌株發(fā)酵液中抑菌物質(zhì)存在情況和抑菌作用機(jī)制，為其進(jìn)一步應(yīng)用尤其在防治植物病原真菌病害方面的應(yīng)用奠定研究基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株 解淀粉芽孢桿菌（B. amyloliquefaciens）BA-26、番茄灰霉病菌（B. cinerea）來自于河北省科學(xué)院生物研究所微生物研究室。

1.1.2 主要試劑和儀器 Amberlity XAD-7HP大孔樹脂，美國(guó)Sigma公司；乙腈、甲醇和三氟乙酸為美國(guó)Fisher Chemical色譜純?cè)噭?；LC-20A HPLC系統(tǒng)，日本Shimadzu公司。

1.2 方法

1.2.1 菌株BA-26胞外抗菌物質(zhì)的分離純化

1.2.1.1 硫酸銨鹽析 采用硫酸銨沉淀法制備抗菌粗提物。取菌株BA-26培養(yǎng)48 h的無菌發(fā)酵液2 L，加入硫酸銨固體使飽和度達(dá)到60%，4℃靜置12 h，然后8 000 r/min離心30 min，收集沉淀和上清液，取沉淀溶于5 mL無菌水，檢測(cè)抑菌效果。此沉淀即為抗菌粗提物（Antibacterial crude extract，A）。

1.2.1.2 大孔樹脂吸附法 取由2 L發(fā)酵液所得的抗菌粗提物，以 600 mL的無菌水溶解，加入20-60目大孔樹脂200 g，4℃下?lián)u勻12 h。樹脂經(jīng)過濾收集后，用蒸餾水洗滌3次，再分別用200 mL 10%、20%、30%……100%乙醇（V/V）依次洗滌［14］。收集各組分洗脫液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中42℃減壓蒸干。收集蒸干組分分別溶于5 mL無菌水于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.1.3 高效液相色譜法 采用SHIMADZU LC-20A高效液相色譜分析進(jìn)一步純化［15］。流動(dòng)相A為含0.1%（V/V）三氟乙酸的乙腈，流動(dòng)相B為含0.1%（V/V）三氟乙酸的超純水。將大孔樹脂分離樣品加載到WondaSil C18 4.6 mm×150 mm、粒徑5 μm色譜柱中，以10%-90%乙腈為線性梯度洗脫，流速為1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為214 nm。收集各保留時(shí)間所對(duì)應(yīng)的組分，經(jīng)氮吹濃縮，冷凍干燥后稱重，于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 抗菌物質(zhì)的抑菌活性測(cè)定

為了孕育你，數(shù)月忍受膽汁俱下的嘔吐之苦；為了你的降臨，忍受人間最慘烈的裂骨之痛；你的一個(gè)小翻身，她都會(huì)醒來呵護(hù)，數(shù)年沒睡過一晚安穩(wěn)覺；你第一次抬頭，第一次爬行，坐起站立學(xué)步，甚至怎樣拿筷子……點(diǎn)滴成長(zhǎng)都伴隨著她的心血……你總認(rèn)為你現(xiàn)在是最難的。其實(shí)，世上最難的職業(yè)，叫做媽媽。

1.2.2.1 對(duì)病原真菌活性測(cè)定 采用平板對(duì)峙法，將50 mL病原真菌孢子懸液（1×106CFU/mL）與300 mL 融化的PDA培養(yǎng)基混合均勻后，倒入培養(yǎng)皿中，待凝固后，均勻打孔直徑為8 mm。每孔加100 μL待測(cè)物質(zhì)，于26± 1℃下培養(yǎng)2-4 d，觀察是否有抑菌圈產(chǎn)生并測(cè)量抑菌圈直徑大小。每個(gè)處理重復(fù)3次。

1.2.2.2 對(duì)細(xì)菌活性測(cè)定 于平板上挑取細(xì)菌單菌落，接種至裝有30 mL LB培養(yǎng)基的100 mL錐形瓶中，37℃，180 r/min培養(yǎng)14 h。采用平板傾注法［16］，將細(xì)菌菌液與LB固體培養(yǎng)基混合均勻，在含菌平板上均勻打孔直徑為8 mm。每孔加100 μL待測(cè)物質(zhì)，37℃培養(yǎng)20 h，測(cè)量抑菌圈直徑大小。每個(gè)處理重復(fù)3次。

1.2.3 BA-26活性組分對(duì)灰葡萄孢菌絲的影響 挑取灰葡萄孢菌絲于載玻片上，用無菌生理鹽水沖洗后，用超純水溶解濃度為1 mg/mL的活性組分處理灰葡萄孢菌絲6 h，無菌生理鹽水沖洗后用0.04%臺(tái)盼藍(lán)染色30 min，置于顯微鏡下觀察。以未經(jīng)處理的菌絲為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次。

1.2.4 BA-26活性組分對(duì)灰葡萄孢孢子萌發(fā)的影響 采用凹玻片懸滴法制片觀察。分別取少量BA-26活性組分，用超純水溶解制成1 mg/mL的溶液。各取50 μL無菌活性組分溶液與50 μL液體PDA 培養(yǎng)基混合，再與100 μL灰霉孢子懸液（1×106CFU/mL）混合后于無菌凹玻片上26 ± 1℃培養(yǎng)，每6 h后使用顯微鏡觀察孢子萌發(fā)情況。以未經(jīng)處理的孢子為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次。

1.2.5 BA-26活性組分的最小抑菌濃度測(cè)定 采用二倍稀釋法［17］配制濃度為 3.91、7.81、15.63、31.25、62.50、125.00、250.00、500.00和 1000.00μg/mL的抗菌物質(zhì)組分，各取100 μL加入瓊脂孔中。置于26 ± 1℃培養(yǎng)2 d后，分別測(cè)量抑制區(qū)半徑來確定對(duì)菌絲體的抑制效果。以70%的乙腈水溶液為對(duì)照，每處理組分重復(fù)3次。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，經(jīng)Duncan氏新復(fù)極差法檢驗(yàn)，不同小寫字母表示在P＜0.05水平差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 菌株BA-26抗菌物質(zhì)分離純化及抗菌粗提物的抑菌譜

2.1.1 硫酸銨鹽析 對(duì)菌株BA-26無菌發(fā)酵液，進(jìn)行硫酸銨鹽析。以番茄灰霉病菌為指示菌，硫酸銨鹽析后上清液和無菌水為對(duì)照，檢測(cè)抑菌活性。研究結(jié)果（圖1）表明，不同飽和度的硫酸銨鹽析時(shí)，沉淀和上清液的抑菌活性不同，在硫酸銨飽和度為60%時(shí)獲得沉淀抗真菌活性最強(qiáng)，并且上清液沒有抑菌活性。為達(dá)到將盡可能多的活性物質(zhì)沉淀的效果，選擇飽和度為60%作為制備抗菌粗提物的最佳硫酸銨濃度。

2.1.2 菌株BA-26抗菌粗提物的抑菌譜 飽和度為60%硫酸銨沉淀獲得抗菌粗提物檢測(cè)結(jié)果（表1）顯示：菌株BA-26抗菌粗提物對(duì)所試12種真菌都有十分明顯的抑制作用，抑菌圈直徑均在15.7 mm以上。其中接骨木鐮刀菌、番茄早疫病菌、立枯絲核菌、番茄灰霉病菌、蘋果輪紋病菌、三七病原菌、米曲霉菌的抑制作用很強(qiáng)，抑菌圈直徑分別達(dá)到34.7、36.3、40.0、30.3、30.7、39.3和30.4 mm；而對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌沒有抑菌作用。菌株BA-26抗菌粗提物中的抑菌物質(zhì)主要為抗真菌物質(zhì)，該抑菌物質(zhì)抑菌譜廣。

圖1 解淀粉芽孢桿菌BA-26抗菌粗提物活性檢測(cè)

2.1.3 大孔樹脂分離結(jié)果分析 硫酸銨沉淀獲得的抗菌粗提物經(jīng)大孔樹脂吸附分離，除未吸附的組分外，共得到了10個(gè)組分，即A1-A10。由表2可知，不同分離組分表現(xiàn)出不同的抑菌活性，經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為60%乙醇水溶液洗滌后的組分A6的抗真菌效果最好。比較每一級(jí)組分抑菌活性大小，發(fā)現(xiàn)抑菌物質(zhì)集中出現(xiàn)在中間這些級(jí)分，說明存在的抑菌活性物質(zhì)可能兼有親水性和親脂性的特點(diǎn)。選擇抑菌活性最強(qiáng)的A6組分進(jìn)一步分離純化。

2.1.4 反相高效液相色譜法分離純化結(jié)果分析 采用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）進(jìn)一步純化結(jié)果見圖2。活性物質(zhì)A6 組分在不同波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)，在214 nm 處有較大吸收峰，所以選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為214 nm。菌株BA-26活性組分A6中至少有34類組分，即A6-1-A6-34。它們中大部分都不是單一峰，表明它們不是單一物質(zhì)。這與芽孢桿菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)中可能存在很多結(jié)構(gòu)相似的異構(gòu)體和同系物，很難分離到單一物質(zhì)的特征相符。將這34類組分冷凍干燥后用70%乙腈水溶液溶解進(jìn)行抑菌活性追蹤。檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)應(yīng)保留時(shí)間為29 min時(shí)的A6-15組分和保留時(shí)間為34-43min時(shí)的A6-19-A6-28各組分具有抗真菌活性。

表1 解淀粉芽孢桿菌BA-26抗菌粗提物對(duì)不同病原真菌的抑菌直徑

表2 解淀粉芽孢桿菌BA-26抗菌粗提物分離組分對(duì)番茄灰霉病菌的抑菌圈直徑

圖2 菌株BA-26抗菌粗提物分離組分A6的反相高效液相色譜圖及活性峰檢測(cè)

2.1.5 活性組分對(duì)灰葡萄孢的抑菌作用 將經(jīng)RPHPLC分離的活性組分，配制成濃度為1 mg/mL的溶液并檢測(cè)抑菌活性。由圖3可知，不同組分的抗菌物質(zhì)對(duì)灰葡萄孢抑菌作用不同，其中A6-19組分抑制效果最好，抑菌圈直徑達(dá)27.4 mm，A6-20組分的抑菌圈直徑為27.1 mm與之相比無顯著差異；A6-21組分抑菌圈直徑為24.8 mm強(qiáng)于A6-22、A6-27和A6-28這些相互之間抑菌效果無差異組分；A6-22、A6-23、A6-24、A6-25組分的抑菌效果無顯著差異，它們的抑菌圈直徑分別為23.3、23.2、22.8和22.7 mm；A6-26組分抑菌效果相對(duì)較弱抑菌圈直徑為21.0 mm；A6-15組分抑菌效果低于所有組分抑菌圈直徑為17.9 mm。說明菌株BA-26的主要抗菌物質(zhì)存在于A6-19-A6-28這些組分。

2.2 菌株BA-26胞外活性物質(zhì)對(duì)灰葡萄孢抑菌作用研究

2.2.1 活性組分對(duì)灰葡萄孢菌絲形態(tài)的影響 如圖4中所見，經(jīng)抗菌物質(zhì)處理培養(yǎng)6 h后觀察，未經(jīng)抗菌物質(zhì)處理的灰葡萄孢菌絲形態(tài)飽滿，表面光滑，正常生長(zhǎng)并向四周擴(kuò)展，在分生孢子梗末端觀察到孢子的產(chǎn)生（圖4-A）。A6-15組分處理的菌絲，菌絲形態(tài)變化不明顯，與對(duì)照相比菌絲結(jié)構(gòu)完整，僅能觀察到菌絲明顯彎曲，未出現(xiàn)膨大變粗，也未觀察到菌絲內(nèi)容物外流（圖4-B）。而A6-19-A6-28這些組分在其抗菌物質(zhì)的作用下菌絲形態(tài)變化明顯，表現(xiàn)出相似的特征，菌絲細(xì)胞畸形，菌絲體彎曲變粗，中部腫脹，頂端膨大，分枝菌絲生長(zhǎng)受阻（圖 4-C，4-D）。

2.2.2 活性組分處理灰葡萄孢菌絲后臺(tái)盼藍(lán)染色臺(tái)盼藍(lán)染色結(jié)果顯示：未經(jīng)處理的菌絲形態(tài)正常未被染色（圖5-A）；A6-15組分處理的灰葡萄孢菌絲未被染色（圖5-B）；A6-19-A6-28這些組分處理的灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)受阻，有明顯的膨大，部分菌絲出現(xiàn)較大的囊泡部分，經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色后，鏡檢時(shí)發(fā)現(xiàn)菌絲呈現(xiàn)藍(lán)色（圖5-C）。說明A6-19-A6-28這些組分抗菌物質(zhì)的作用機(jī)制可能與破壞灰葡萄孢菌絲的細(xì)胞膜有關(guān)。

圖4 菌株BA-26抗菌粗提物RP-HPLC分離活性組分對(duì)灰葡萄孢菌絲形態(tài)的影響

圖5 菌株BA-26抗菌粗提物RP-HPLC分離活性組分處理灰葡萄孢菌絲臺(tái)盼藍(lán)染色

2.2.3 活性組分的最小抑菌濃度 測(cè)定A6-15和A6-19-A6-28各組分對(duì)灰葡萄孢的MIC，結(jié)果如表3所示。A6-19-A6-28這些組分對(duì)灰葡萄孢的抗菌作用高于A6-15組分。其中，A6-19和A6-20組分對(duì)灰葡萄孢的抗菌活性最強(qiáng)，最小抑菌濃度為7.81 μg/mL。

表3 菌株BA-26抗菌粗提物RP-HPLC分離活性組分對(duì)灰葡萄孢的MIC值

2.2.4 活性組分對(duì)灰葡萄孢孢子萌發(fā)的影響 經(jīng)活性物質(zhì)處理的灰葡萄孢孢子培養(yǎng)36 h后觀察其萌發(fā)抑制情況。由圖6可知，未經(jīng)處理的孢子萌發(fā)明顯，長(zhǎng)出相當(dāng)于孢子徑6-10倍的菌絲（圖6-A）；A6-15組分對(duì)灰葡萄孢孢子萌發(fā)的抑制作用最強(qiáng)，從培養(yǎng)開始至36 h時(shí)，均未萌發(fā)，但未觀察到有孢子破裂（圖6-B）；A6-19-A6-28這些組分對(duì)灰葡萄孢孢子萌發(fā)的抑制作用仍相對(duì)較強(qiáng)，培養(yǎng)至12 h時(shí)有少量孢子萌發(fā)，36 h時(shí)萌發(fā)菌絲長(zhǎng)度僅相當(dāng)于孢子徑的2-4倍，已萌發(fā)的菌絲膨大變粗（圖6-C）。

圖6 菌株BA-26抗菌粗提物RP-HPLC分離活性組分對(duì)灰葡萄孢孢子萌發(fā)抑制情況

3 討論

解淀粉芽孢桿菌是革蘭氏陽性需氧型桿菌，產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)豐富。Ashokkumar等［18］從紅樹林生態(tài)系統(tǒng)中分離出解淀粉芽孢桿菌VCRC B483通過80%硫酸銨沉淀獲得的粗提物顯示對(duì)鐮刀菌屬和新月彎孢霉屬的抗菌活性；盧彩鴿等［19］從漠河多年永凍土層中分離的拮抗菌解淀粉芽孢桿菌MH71，對(duì)多種植物病原真菌和細(xì)菌具有較強(qiáng)的拮抗作用，發(fā)酵液對(duì)番茄灰霉病的防效為92.8%。本研究中BA-26菌株的抗菌粗提物顯示出強(qiáng)的抗不同真菌活性，對(duì)立枯絲核菌的抑菌活性最強(qiáng)，抑菌圈為40.0 mm。菌株BA-26的次級(jí)代謝產(chǎn)物對(duì)大部分病原真菌有顯著抑菌效果，具有開發(fā)為新型生防制劑的潛力。

關(guān)于芽孢桿菌抗菌物質(zhì)的抑菌作用研究，通常是通過制備無菌發(fā)酵液或抗菌粗提物進(jìn)行。潘虹余等［12］探究了解淀粉芽孢桿菌B15發(fā)酵液對(duì)葡萄病原菌灰葡萄孢的抑菌機(jī)理，然而由于抗菌物質(zhì)種類較多，對(duì)于某一種物質(zhì)的抑菌作用并不清楚。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)解淀粉芽孢桿菌BA-26發(fā)酵液中產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)對(duì)灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)發(fā)育的影響，主要表現(xiàn)在菌絲畸形膨大變粗、分支菌絲生長(zhǎng)受阻、細(xì)胞膜被破壞通透性增加。此外，最強(qiáng)抗真菌活性物質(zhì)的最小抑菌濃度為7.81 μg/mL，對(duì)灰葡萄孢孢子萌發(fā)抑制效果明顯。

顯微鏡觀察結(jié)果顯示，經(jīng)A6-15組分處理的菌絲，菌絲形態(tài)變化不明顯，未出現(xiàn)膨大變粗，也未觀察到菌絲內(nèi)容物外流。但A6-19-A6-28這些組分在其抗菌物質(zhì)的作用下菌絲形態(tài)變化明顯，表現(xiàn)出明顯的抑制作用，菌絲細(xì)胞畸形，菌絲體彎曲變粗，中部腫脹，頂端膨大，分枝菌絲生長(zhǎng)受阻。本實(shí)驗(yàn)中11種活性組分的濃度均為1 mg/mL，已達(dá)到其最小抑菌濃度。此實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能是由于A6-15組分中抗菌物質(zhì)的最小抑菌濃度比A6-19-A6-28這些組分明顯高造成的，A6-15組分中的抗菌物質(zhì)能否使真菌菌絲形態(tài)發(fā)生相似的改變，還需在不同濃度下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。而在活性組分對(duì)孢子萌發(fā)影響的實(shí)驗(yàn)中，觀察到相反結(jié)果，雖然A6-15組分中抗菌物質(zhì)的最小抑菌濃度比A6-19-A6-28這些組分明顯高，但A6-15組分中抗菌物質(zhì)對(duì)孢子萌發(fā)抑制作用更強(qiáng)。不同抗菌物質(zhì)之間是否存在協(xié)同抑菌作用，不同濃度下對(duì)真菌菌絲和孢子萌發(fā)的抑制作用有無差異，還有它們都有哪些作用機(jī)制。這些問題都將是未來的研究方向。

從解淀粉芽孢桿菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物中分離抗菌物質(zhì)的報(bào)道，朱弘元［20］在對(duì)解淀粉芽孢桿菌B15有效抑菌成分研究時(shí)發(fā)現(xiàn)了親水性和親脂性的脂肽類物質(zhì)，包括iturin A及其同系物、fengycin和surfactin類物質(zhì)，穩(wěn)定性研究表明酸堿、溫度和酶處理對(duì)抑菌活性沒有太大影響。本研究通過硫酸銨沉淀、大孔樹脂吸附及反相高效液相色譜技術(shù)，從解淀粉芽孢桿菌BA-26的發(fā)酵液中分離純化到11類抗真菌物質(zhì)，液相分析峰圖顯示它們不是單一物質(zhì)，這與芽孢桿菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)中可能存在很多結(jié)構(gòu)相似的異構(gòu)體和同系物的特征相符。這些抗菌物質(zhì)易溶于水和極性有機(jī)溶劑的混合物，具有一定的親水性和親脂性。下一步，擬通過質(zhì)譜、紅外光譜、核磁共振等現(xiàn)代波譜技術(shù)對(duì)液相色譜分離各組分活性物質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。

4 結(jié)論

從解淀粉芽孢桿菌BA-26發(fā)酵液中分離純化到11個(gè)具有抑制真菌作用的活性組分。該菌株抗真菌譜廣，對(duì)立枯絲核菌等多種植物病原真菌有強(qiáng)抑制作用，高效液相色譜純化活性組分中對(duì)灰葡萄孢抑菌活性最強(qiáng)的最小抑菌濃度為7.81 μg/mL。菌株BA-26產(chǎn)生的抗真菌活性物質(zhì)能使灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)受阻、膨大變粗、細(xì)胞膜破壞并能抑制其孢子萌發(fā)。