石國(guó)西

(南陽(yáng)市第一人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科，河南 南陽(yáng) 473000)

環(huán)境污染、工業(yè)氣體及汽車尾氣排放等導(dǎo)致不孕不育發(fā)生率呈逐年攀升趨勢(shì)，據(jù)統(tǒng)計(jì)，不孕不育在國(guó)外發(fā)生率為10%～15%，我國(guó)發(fā)生率約為12.5%，患者總數(shù)已超過4000萬，如何有效防治不孕不育已成為臨床研究的重點(diǎn)[1]。不孕不育與多種因素有關(guān)，尤其是染色體疾病，人體細(xì)胞含46條染色體，約含100萬基因，一旦出現(xiàn)染色體形態(tài)異?；驍?shù)目增減，遺傳物質(zhì)便會(huì)失衡[2]，從而引起不孕不育、胚胎停止發(fā)育、畸胎等一系列不良后果。本研究選取202對(duì)不孕不育夫婦，旨在分析外周血染色體異常核型，為臨床防治不孕不育提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年12月至2018年12月于南陽(yáng)市第一人民醫(yī)院就診的202對(duì)不孕不育夫婦作為研究對(duì)象，年齡20～35歲，平均(27.51±3.03)歲；不孕時(shí)間5個(gè)月～10年，平均(5.54±1.35)年。均表現(xiàn)為不孕不育、不良妊娠史，患者及家屬知曉并簽訂同意書。排除精神疾病、肝、腎等臟器功能不全、近期參與類似研究、依從性差，無法配合研究者。本研究征得醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過。

1.2 檢測(cè)方法

1)外周血細(xì)胞培養(yǎng)。抽取4 mL外周靜脈血，肝素抗凝后，放于1640培養(yǎng)基，37 ℃恒溫靜止培養(yǎng)68 h。

2)外周血細(xì)胞染色體制備。滴加秋水仙素，終濃度為0.1 μg·mL-1，4 h后進(jìn)行離心處理，棄上清，滴加8 mL(視細(xì)胞量多少而定)0.075 mmol·L-1氯化鉀溶液，放于37 ℃水浴進(jìn)行低滲20 min，滴加1 mL固定液(甲醇：冰醋酸=3：1)，混勻預(yù)固定后進(jìn)行離心處理，棄上清，滴加8 mL固定液，10 min后再次離心，重復(fù)固定2次，棄上清，滴加適量固定液，配成懸液，冰玻片滴片，放入烤箱1.5 h，G顯帶。

3)外周血細(xì)胞染色體核型分析。每例計(jì)數(shù)20個(gè)核分裂相，于Karyo 3.1分析系統(tǒng)下進(jìn)行分析，嵌合體及異常核型加倍計(jì)數(shù)，核型描述以人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制(ISCN)為根據(jù)。

1.3 異常染色體評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)

小Y染色體評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：同一核型中Y染色體長(zhǎng)度<21號(hào)染色體長(zhǎng)度；大Y染色體評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：同一核型中Y染色體長(zhǎng)度≥18號(hào)染色體長(zhǎng)度。

2 結(jié)果

202對(duì)不孕不育夫婦中，32例伴有染色體核型異常(均為夫婦一方)，異常率為7.92%(32/404)，其中16例常染色體異常，占50.00%；6例羅賓遜易位，占18.75%；10例性染色體異常，占31.25%。詳見表1。

表1 32例外周血染色體異常核類型及臨床表現(xiàn)

3 討論

不育癥是指受孕成功，但無法獲得存活嬰兒。不孕癥是指育齡夫婦同居1年及以上，有正常性生活，未采取任何避孕措施情況下，仍未成功懷孕。我國(guó)不孕不育發(fā)生率已由20年前3%升高至12%，接近發(fā)達(dá)國(guó)家水平[2]。因此，給予不孕不育患者早期診斷，制定可靠預(yù)防及治療措施，對(duì)提升生育率意義重大。

既往有研究[3]指出，正常人群中，染色體異常發(fā)生率為0.47%～0.84%，不孕不育患者中，染色體異常發(fā)生率為0.8%～12.5%，為正常人群15倍左右。本研究202對(duì)不孕不育夫婦中，32例伴有染色體核型異常，異常率為7.92%，與上述研究染色體異常率相近，說明染色體異常與不孕不育存在一定關(guān)聯(lián)性。不孕不育患者中，以染色體結(jié)構(gòu)異常較常見，特別是染色體易位，平衡易位患者與正常人結(jié)婚所生子女可能從親代患者接受1條易位衍生染色體，致使某個(gè)易位節(jié)段多余或缺失，進(jìn)而破壞基因平衡，導(dǎo)致胎兒畸形發(fā)育[4]；羅賓遜易位是常見染色體畸變，包含非同源和同源2種類型，非同源羅賓遜易位攜帶者可形成6種不同配子，1種平衡易位，1種正常，4種不平衡配子，而同源性羅賓遜易位攜帶者可形成2種配子，與正常配子結(jié)合后會(huì)形成單體或三體型合子，進(jìn)而引起胚胎停育、早期流產(chǎn)[5]。本研究共檢出6例羅賓遜易位，分別表現(xiàn)為胚胎停育、反復(fù)流產(chǎn)等，說明易位患者雖無嚴(yán)重先天畸形，但子代極易導(dǎo)致自發(fā)流產(chǎn)。因此，對(duì)于同源羅賓遜易位攜帶者，臨床醫(yī)師可推薦借精、借卵等輔助生育技術(shù)來獲得正常后代。

哺乳動(dòng)物性別取決于性腺性別分化及發(fā)育、受精時(shí)染色體性別，導(dǎo)致內(nèi)外生殖器發(fā)育，性激素作用下形成表型特征。本研究共檢出2例46,XY核型，即性反轉(zhuǎn)，主要特征為染色體性別與性腺性別不一致，經(jīng)檢測(cè)其中1例符合不完全型雄激素不敏感綜合征，表現(xiàn)為陰莖陰囊型尿管下裂，1例符合完全型雄激素不敏感綜合征，此類患者乳腺稍發(fā)育，B超下可見始基子宮，卵巢體積較小，大小陰唇及外陰發(fā)育較差。同時(shí)發(fā)現(xiàn)2例47,XXX核型，表現(xiàn)為不良生育史，其發(fā)生原因與母親染色體未分離有關(guān)，主要錯(cuò)誤發(fā)生階段為第1次減數(shù)分裂時(shí)期。本研究檢出5例47 XXY核型，即克氏綜合征，主要特征為表現(xiàn)為體征女性化、睪丸小、睪酮低、四肢修長(zhǎng)，分析原因在于，患者雙親中有1個(gè)親代在生殖細(xì)胞形成期間發(fā)生性染色體不分離，從而導(dǎo)致疾病發(fā)生[6]。另外，克氏綜合征患者不孕，故無法將其多余性染色體傳至后代，能有效避免出生缺陷發(fā)生[7]。本研究檢出1例47,XYY核型，醫(yī)學(xué)稱為超雄綜合征，超雄綜合征患者較正常男性多1條染色體，分析原因在于，患者父親生殖細(xì)胞第2次減數(shù)分裂時(shí)，YY并未分離，形成YY精子，進(jìn)而誘發(fā)超雄綜合征[8-9]。此類患者因睪丸發(fā)育不完全，生精過程出現(xiàn)障礙，生育力降低，表現(xiàn)為少弱精。

鑒于上述分析，筆者提出以下建議：1)若患者伴有外生殖器畸形、性腺異常，需及時(shí)進(jìn)行染色體核型分析，明確診斷，采取相關(guān)防治措施；2)確定不孕不育后，需鼓勵(lì)夫婦共同診治，利于緩解負(fù)性情緒，使其精神得到安慰，或指導(dǎo)其采取聽音樂、外出旅游等手段轉(zhuǎn)移對(duì)疾病注意力，穩(wěn)定自身情緒，或介紹既往科室中成功分娩案例，必要時(shí)邀請(qǐng)成功分娩案例現(xiàn)身說法，幫助其樹立分娩信心，以積極樂觀心態(tài)面對(duì)生活與疾病；同時(shí)需保護(hù)患者隱私，贏得患者充分信任，利于更好開展診療工作。

總之，染色體異常是導(dǎo)致不孕不育危險(xiǎn)因素，外周血染色體核型檢測(cè)對(duì)預(yù)防出生缺陷發(fā)生，提高人口素質(zhì)意義重大。