趙志新，潘 苗，王 通

（商洛學(xué)院生物醫(yī)藥與食品工程學(xué)院，陜西商洛726000）

桔梗（Platycodon grandiflorum（Jacq.）A.DC.）為常用大宗藥材，被2015年版《中國藥典》收錄，主要以根入藥，很多地方作為食品使用[1]。桔梗在我國大部分地區(qū)均有分布，常見于河南、安徽、吉林、山東、四川、陜西等地，在河南省商洛地區(qū)廣泛種植，被譽為“五大商藥”之一[2]。桔梗具有開宣肺氣、祛痰排膿之功效，其主要成分為三萜皂苷類化合物（Triter penoid saponins），目前發(fā)現(xiàn)有70余種皂苷類成分，主要以桔梗皂苷為主；桔梗具有鎮(zhèn)咳祛痰、抗腫瘤、抗氧化、增強免疫力、抗炎、防治心腦血管疾病等作用[3-5]；除了主要成分三萜皂苷類化合物外，桔梗多糖具有抗衰老、降血糖、抗凝血等保健作用[6-8]。

商洛種植的桔梗種源大多為就地所取，同時桔梗的生長受生境條件（氣候、土壤條件及重金屬等）影響巨大[9-11]，而目前對商洛種植桔梗特別是根部不同部位中桔梗皂苷積累缺乏相關(guān)的研究。

本研究采集5—11月份商洛學(xué)院藥園基地所種植的桔梗，通過高效液相色譜法（HPLC）測定桔梗主根韌皮部、木質(zhì)部及須根中桔梗皂苷D的含量，以期對不同生長期及桔梗根不同部位藥材品質(zhì)進行評價，為確定商洛桔梗采收期以及為桔梗質(zhì)量控制、規(guī)范化種植提供借鑒。

1 材料和方法

1.1 材料

桔梗種植于商洛學(xué)院GAP中心藥材基地，在2018年5—11月每月采集一次2年生的桔梗樣品（5，6，7，8，9，10，11 月采集的樣品分別編號為 101、102、103、104、105、106、107），以采集時間及部位（須根（A）、木質(zhì)部（B）和韌皮部（C））分組，即材料101A為5月份所采集的桔梗須根。

1.2 儀器與試劑

液相色譜儀（日本島津LC-20A型），超聲波清洗器（KQ-250型）、粉碎機、電子天平（FA1104）等；桔梗皂苷D對照品（購自中國食品藥品檢定研究院），色譜級乙腈（購自德國Merck公司），分析純磷酸、甲醇等（購自天津福晨化學(xué)試劑有限公司），超純水，試驗中其他試劑均為分析純。

1.3 試驗方法

1.3.1 色譜條件 檢測波長為210 nm；色譜柱使用Hypersil C18ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）柱（大連依利特分析儀器有限公司）；柱溫為30℃；流速設(shè)置為1.0 mL/min；流動相A為0.05%磷酸水溶液，B為純色譜乙腈。梯度洗脫程序為：0～20 min，96%～85%A；20～35min，85%～77%A；35～40min，77%～72%A；40～55 min，72%A；55～ 65 min，72%～60%A；65～80 min，60% ～10%A；80 min 以后，10%A，記錄時間90 min。

1.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取桔梗皂苷D對照品，以甲醇為溶劑，制成1 mg/mL質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以直徑為0.45 μm的微孔濾膜過濾。

1.3.3 供試品溶液的制備 每種桔梗藥材樣品取2.0 g，粉碎后過0.25 mm篩，加入50 mL50%的甲醇溶解，然后超聲提取30 min。提取結(jié)束后置于室溫，稱質(zhì)量，以甲醇補足損失的量，搖勻，過濾，以直徑為0.45 μm的微孔濾膜過濾，取濾液。

1.3.4 測定方法 分別精密吸取對照品及供試品溶液20μL，記錄90min的色譜圖。對照品溶液顯示在54 min出現(xiàn)桔梗皂苷D峰（圖l）；供試品107A溶液顯示在54 min出現(xiàn)桔梗皂苷D峰（圖2）。

1.3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線 取對照品溶液分別稀釋至10，100，200，500，800，1 000 μg/mL 的質(zhì)量濃度，取20 μL進行測定，按上述條件測定峰面積。以進樣量X（μg）對峰面積Y進行回歸，得回歸方程為Y＝45 697X－29 257（R2＝0.983 7），進樣量在 10～800 μg/mL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

1.4 方法學(xué)考察

1.4.1 穩(wěn)定性考察 取供試品溶液（106C）20 μL，連續(xù)進樣 5 次，進樣時間分別為 0，2，4，6，8 h，按已確定的色譜條件測定，獲得桔梗皂苷D峰面積并計算RSD（表1），峰面積RSD為4.481%，小于5%，說明供試品溶液在8 h內(nèi)比較穩(wěn)定，符合本試驗測定要求。

表1 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

1.4.2 精密度考察 取標(biāo)準(zhǔn)品溶液20 μL，連續(xù)進樣5次，檢測桔梗皂苷D的色譜峰面積并計算RSD，結(jié)果列于表2，峰面積的RSD為0.561%，小于3%，表明儀器精密度符合本試驗要求。

表2 精密度試驗結(jié)果

1.4.3 重復(fù)性考察 取待測樣品106A溶液5份， 平行操作5次，獲得桔梗皂苷D的色譜峰面積并計算RSD（表3），峰面積的RSD為3.344%，小于5%，說明樣品制備方法重復(fù)性好，符合本試驗要求。

表3 重復(fù)性試驗結(jié)果

2 結(jié)果與分析

2.1 不同月份桔梗須根中桔梗皂苷D含量分析

從圖3可以看出，5月桔梗須根中桔梗皂苷D含量最低（0.190%），6—8月逐漸增長，9月達到最高值 （0.549%），10，11月有所降低 （0.497%和0.479%）。數(shù)據(jù)顯示，須根中桔梗皂苷D含量均較高，均值高達0.410%。

2.2 不同月份桔梗根木質(zhì)部中桔梗皂苷D含量分析

從圖4可以看出，5，6月桔梗根木質(zhì)部中桔梗皂苷D含量較低（0.016%和0.018%）；之后逐漸增加，11月份達到最高值（0.067%）。研究顯示，桔梗根木質(zhì)部中桔梗皂苷D含量都較低，均值僅為0.039%。

2.3 不同月份桔梗根韌皮部中桔梗皂苷D的含量分析

從圖5可以看出，桔梗根韌皮部中桔梗皂苷D含量比較穩(wěn)定（主要變化范圍為0.170%～0.175%），10月份含量最高，為0.217%。根韌皮部中桔梗皂苷D含量高于木質(zhì)部而低于須根，均值為0.182%。

3 結(jié)論與討論

本試驗使用HPLC法，測定商洛地區(qū)種植的不同月份（5—11月）的2年生桔梗根不同部位（須根、木質(zhì)部和韌皮部）中桔梗皂苷D的含量。結(jié)果顯示，桔梗皂苷D的含量在須根和木質(zhì)部中穩(wěn)步增加，二者分別在9月份、11月份達到最大值；而韌皮部中桔梗皂苷D含量除了10月份出現(xiàn)最大值（0.217%）外，其余月份則變化不大。不同部位桔梗皂苷D平均含量由高到低依次為：須根（0.410%）＞韌皮部（0.182%）＞木質(zhì)部（0.0390%）。申茹等[7]研究表明，山東不同區(qū)域桔梗根中桔梗皂苷D的含量范圍為0.16%～0.38%，這與本研究測定結(jié)果基本一致。說明桔梗藥材品質(zhì)受所種植區(qū)域環(huán)境影響很大；同時，氮水平和形態(tài)對桔梗生長及氮磷吸收有很大影響[13]，而不同播期[14]、產(chǎn)地及生長年限[15]對桔梗品質(zhì)影響也很大。因此，應(yīng)加大桔梗的道地性研究。

建議商洛地區(qū)所種植桔梗采收期在10—11月，此時主要有效成分積累趨于穩(wěn)定，同時采收時須根要充分收集，因為須根中桔梗皂苷D含量最高。研究結(jié)果可為確定商洛桔梗采收期以及為桔梗質(zhì)量控制、規(guī)范化種植提供借鑒。