陳萍，譚書明，黃穎，陳小敏，宋長(zhǎng)軍

（1.貴州大學(xué)釀酒與食品工程學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴州省農(nóng)畜產(chǎn)品貯藏與加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550025；3.貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025）

常見降血脂的功效成分主要有膳食纖維[1]、黃酮類[2]、多糖類[3]、多酚類[4]、生物堿[5]及皂苷[6]等，刺梨（Rose roxbunghii）又名刺莓果、茨梨、木梨子，別名送春歸、刺菠蘿，是一種貴州特有的水果，富含多種活性成分，其VC含量比獼猴桃高9 倍[7]。鮮果中的黃酮具有降血脂作用，胡文堯等給動(dòng)脈粥樣硬化模型大白兔灌胃刺梨汁，表明刺梨可能通過降低血脂質(zhì)化氧化損傷防止動(dòng)脈內(nèi)膜粥樣化斑塊的形式[8]。簡(jiǎn)崇東等研究發(fā)現(xiàn)腦梗死患者口服刺梨汁能有效改善患者的動(dòng)脈粥樣硬化癥狀，降低患者的復(fù)發(fā)率，具有良好的臨床效[9]。Zhang C 等研究了刺梨汁對(duì)低密度脂蛋白（low-density lipoprotein，LDL-C）的體外氧化修飾和低密度脂蛋白誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞膽固醇酯（cholesteryl ester，CE）積累的影響[10]，發(fā)現(xiàn)刺梨汁可抑制 LDL 的氧化修飾和抑制泡沫細(xì)胞形成的能力。王勁紅等[11]用刺梨根等自擬五味降脂散，對(duì)高脂血癥有較好療效。崔俊英等[12]對(duì)刺梨原汁對(duì)不同時(shí)期的高脂血癥小鼠的影響進(jìn)行了研究，證實(shí)刺梨原汁有較好的降血脂作用，不同時(shí)期的降血脂效果存在差異。山楂又稱山里紅、紅果果，屬于薔薇科山楂屬的一類植物[13]。山楂果實(shí)含有豐富的鈣、鐵、果膠及黃酮類物質(zhì)，含量遠(yuǎn)超其它鮮果[14]，其降血脂活性成分主要是黃酮類化合物[15]及山楂多糖類[16]，主要起降血脂作用的是黃酮類化合物。王玲等[17]發(fā)現(xiàn)山楂通過提高膽固醇7α-羥化酶的表達(dá)水平，抑制3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A 還原酶、?；o酶A 以及膽固醇?；D(zhuǎn)移酶的活性，增加低密度脂蛋白受體水平及通過調(diào)控多種脂肪代謝酶的機(jī)制調(diào)節(jié)血脂。綠豆是一種經(jīng)濟(jì)作物，其中生物堿黃酮及蒽醌對(duì)高血脂癥有一定的抑制效果[18]。研究結(jié)果表明，煮沸和發(fā)芽改善了綠豆的可溶性纖維含量和降膽固醇潛力，可飲食調(diào)節(jié)（p＜0.05）由高膽固醇飲食引起的血清非高密度脂蛋白膽固醇濃度的增加和高密度脂蛋白膽固醇濃度的降低[19]。Keong 等研究發(fā)現(xiàn)發(fā)酵的綠豆降低高膽固醇血癥小鼠的血清脂質(zhì)和肝酶譜[20]。

據(jù)中國(guó)衛(wèi)生部、科技部和統(tǒng)計(jì)局于2016 年10 月聯(lián)合發(fā)布的《中國(guó)居民營(yíng)養(yǎng)與健康現(xiàn)狀》稱，我國(guó)血脂異?；疾÷蕿?8.6%，即估計(jì)全國(guó)血脂異?，F(xiàn)患人數(shù)約1.6 億。不同類型的血脂異?；疾÷史謩e為高膽固醇血癥2.9%，高甘油三酯癥11.9%，低密度脂蛋白血癥7.4%。另有3.9%的人群膽固醇升高[21]。2012 年，慢性病引起的死亡占總死亡的79.4%[22]，而高血脂癥是是冠心病等心腦血管疾病重要的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一[23]。本研究旨在利用天然食品資源經(jīng)科學(xué)配方研發(fā)安全有效的降血脂飲料，同時(shí)，進(jìn)一步發(fā)掘刺梨資源的綜合效應(yīng)，提高刺梨產(chǎn)品的附加值，促進(jìn)我省的刺梨產(chǎn)業(yè)良性發(fā)展，為食品企業(yè)刺梨加工產(chǎn)品提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

刺梨汁：貴州宏財(cái)聚農(nóng)投資有限公司；山楂干、綠豆、豬油：貴州合力超市；膽固醇（食品級(jí)）：河南青羊生物科技有限公司；膽酸鹽（食品級(jí)）：河北格貝達(dá)生物科技有限公司；蛋黃粉（食品級(jí)）：亳州市紅日蛋制品有限責(zé)任公司；總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白（high-density lipoprotein，HDL-C）測(cè)定試劑盒：南京建成科技有限公司。

SPF 級(jí) 22 g～24 g 的 KM 小鼠（合格證號(hào)：SCXK（遼）2015-0001）60 只，由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司提供。小鼠飼料：騰鑫科技有限公司；其余試劑均為分析純級(jí)。

1.2 儀器與設(shè)備

電熱恒溫水浴鍋（HH-S6 型）：北京科偉永興儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（R-201 型）：上海申勝生物技術(shù)有限公司；電子分析天平（FA22048 型）：奧豪斯儀器（上海）有限公司；紫外可見光分光光度計(jì)（UV-7502PC）：北京譜析通儀器有限責(zé)任公司；高壓萬能粉碎機(jī)（LD-Y300A 型）：上海頂帥電器有限公司；高壓均質(zhì)機(jī)（GJJ-0.06/60 型）：上海諾尼輕工機(jī)械有限公司；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（TGL20M 型）：長(zhǎng)沙邁佳森儀器設(shè)備有限公司；循環(huán)水式多用真空泵（SHB-Ⅲ型）：鄭州世紀(jì)雙科實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 山楂、綠豆提取液的制備

取適量山楂干在80 ℃～90 ℃水浴提取30 min，4層紗布過濾得濾液為山楂提取液；將綠豆浸泡12 h后，煎煮20 min（不要煮開花），4 層紗布過濾得濾液即為綠豆提取液。

1.3.2 高脂飼料的配方

77.8%基礎(chǔ)飼料（玉米、小麥、碎米60%，魚粉、雞肉粉、豆粕33%，魚油、葵花籽油3%，維生素、礦物質(zhì)4%），10%豬油，10%蛋黃粉，1%膽固醇，0.02%膽酸鹽[24]（均為質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。

突出云南特色，積極推動(dòng)跨境人民幣業(yè)務(wù)創(chuàng)新是云南省沿金綜改的一大亮點(diǎn)。截至6月末，全省跨境人民幣結(jié)算業(yè)務(wù)覆蓋境外82個(gè)國(guó)家和地區(qū)，得益于相對(duì)穩(wěn)定的邊貿(mào)結(jié)算，在邊境八省中位居第三位，在全國(guó)位居第十五位，人民幣在全省本外幣跨境收支中的占比36．34%，較上年同期提高3．1個(gè)百分點(diǎn)，人民幣繼續(xù)保持我省僅次于美元的第二大涉外交易貨幣和對(duì)東盟的第一大跨境結(jié)算貨幣。

1.3.3 建立小鼠高脂模型

KM 雄性小鼠 60 只，22 g～24 g 適應(yīng)性喂養(yǎng) 1 周后按體重分組，隨機(jī)選擇一組作為空白組，其余組均喂養(yǎng)高脂飼料，均飲自來水，不限飲食。喂養(yǎng)1 個(gè)月可造成高血脂癥模型，按體重隨機(jī)分為3 組，分別為高脂模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、刺梨山楂綠豆組，空白組及高脂模型組灌胃生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃辛伐他汀溶液（4 mg/kg），刺梨山楂綠豆組給予相應(yīng)的飲料。每周稱重1 次，紀(jì)錄每天小鼠的采食量。給藥28 d 后摘眼球取血，檢測(cè)小鼠血清及肝臟TC、TG、HDL-C 水平評(píng)價(jià)其降血脂功效。

1.4 測(cè)定指標(biāo)

1.4.1 小鼠體重和采食量測(cè)定

造模成功的小鼠重新分組后，紀(jì)錄各組小鼠每天的采食量，每周測(cè)1 次各組小鼠的體重，計(jì)算每周各組小鼠的飼料效率及體重增加量。

1.4.2 血清及肝臟總膽固醇（TC）、總甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）

總膽固醇、總甘油三酯是衡量機(jī)體內(nèi)膽固醇代謝的重要指標(biāo)。高密度脂蛋白是將肝臟外組織的膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)回肝臟的主要形式，小鼠灌胃第28 d 禁食不禁水，12 h 后摘眼球取血，靜置2 h 后于4 ℃，3 000 r/min離心10 min 取上清液存放在-20 ℃待分析；脫頸處死后剖取小鼠肝臟清洗稱重，后取相同部位肝臟制備10%肝臟勻漿。使用TC、TG、HDL-C 測(cè)定試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，具體操作見說明書，其下降率計(jì)算見下式。

式中：TC1、TG1、HDL-C1分別為高脂模型組 TC、TG、HDL-C 含量，mmol/L；TC2、TG2、HDL-C2分別為給藥組的 TC、TG、HDL-C 含量，mmol/L。

1.4.3 小鼠臟器指數(shù)的計(jì)算

小鼠灌胃28 d 后禁食不禁水，12 h 后稱取記錄小鼠體重，摘眼球取血后脫頸處死，剖取出小鼠的心臟、肝臟等部位，將肝臟經(jīng)生理鹽水清洗后擦干稱重并記錄，臟器指數(shù)反映了小鼠器官的健康狀況，按下列公式計(jì)算臟器指數(shù)。

式中：w1為小鼠臟器總質(zhì)量，g；w2為小鼠體質(zhì)量，g。

1.4.4 小鼠盲腸內(nèi)容物質(zhì)量和盲腸壁表面積的測(cè)定

盲腸內(nèi)容物質(zhì)量=m1-m2

式中：m1為小鼠盲腸總質(zhì)量，g；m2為小鼠盲腸壁質(zhì)量，g。

小鼠灌胃28 d 后禁食不禁水，12 h 后稱取記錄小鼠體重，摘眼球取血后脫頸處死，剖取出小鼠的盲腸部位，稱重記錄，取出盲腸內(nèi)容物后稱量盲腸壁的質(zhì)量，將盲腸壁用生理鹽水洗凈后鋪展在坐標(biāo)紙上，勾畫出盲腸壁的輪廓，干燥后將盲腸壁輪廓剪下來用千分之一的分析天平稱重（m1，g），1 cm2的打印紙稱重（m2，g）按下列公式進(jìn)行計(jì)算[25]。

式中：m1為盲腸壁輪廓紙重，g；m2為 1 cm2打印紙重，g。

2 結(jié)果與分析

2.1 刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠體重增量、小鼠采食量、飼料效率的影響

小鼠喂養(yǎng)期間體重變化見圖1。刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠體重增量、采食量、飼料效率的影響見表1。

在高脂小鼠飼養(yǎng)過程中，小鼠無異常死亡情況。高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠與空白對(duì)照組小鼠相比，毛色暗淡，有掉毛現(xiàn)象。從表1及圖1可看出第1 周各組小鼠之間的體重?zé)o顯著性差異（p＞0.05），4 周后空白組小鼠的體重與其他各組出現(xiàn)了顯著性差異（p＜0.05），空白組小鼠的體重增量及采食量與高脂模型組存在顯著性差異（p＜0.05），說明喂養(yǎng)高脂飼料4 周后高血脂模型建立成功，第5 周開始給藥后小鼠體重波動(dòng)幅度較大，逐漸趨于穩(wěn)定，增長(zhǎng)緩慢。各組之間的飼料效率差異均不顯著（p＞0.05）。

2.2 刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響

刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響見表2。

圖1 小鼠喂養(yǎng)期間體重變化Fig.1 Body weight change during feeding

表1 刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠體重增量、采食量、飼料效率的影響Table 1 Effects of Rose roxbunghii，hawthorn and mung bean beverage on body weight gain，feed intake and feed efficiency in mice

表2 刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響Table 2 Effect of Rose roxbunghii，hawthorn and mung bean beverage on liver index of mice

從表2可看出喂養(yǎng)普通飼料的小鼠肝臟總重顯著小于高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠，說明高脂飼料會(huì)對(duì)小鼠肝臟產(chǎn)生一定的負(fù)擔(dān)，而陽(yáng)性對(duì)照組及刺梨山楂率組對(duì)小鼠肝臟均有一定的減重作用，但未達(dá)到顯著性水平（p＞0.05），各組間的肝臟指數(shù)和心臟指數(shù)均無顯著性差異（p＞0.05），說明刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠肝臟健康無影響。

2.3 刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠血清中TC、TG、HDL-C的影響

刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠血清中TC、TG、HDL-C的影響見表3。

表3 刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠血清中TC、TG、HDL-C 的影響Table 3 Effects of Rose roxbunghii，hawthorn and mung bean beverage on serum TC，TG and HDL-C in mice

從表3中可看出高脂模型組的TC、TG、HDL-C 水平均顯著（p＜0.05）高于空白組，表明高脂模型成功建立。刺梨山楂綠豆飲料可顯著性（p＜0.05）降低小鼠的TC、TG 水平，較高脂模型組分別降低了42.28%，24.12%，刺梨山楂綠豆飲料組的HDL-C 水平較高脂模型組升高了21.96%。

2.4 刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠肝臟中TC、TG、HDL-C的影響

刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠肝臟中TC、TG、HDL-C的影響見表4。

表4 刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠肝臟中TC、TG、HDL-C 的影響Table 4 Effects of Rose roxbunghii，hawthorn and mung bean beverage on TC，TG and HDL-C in mice liver

從表4可看出刺梨山楂綠豆飲料對(duì)高血脂小鼠的TC 水平無顯著性影響（p＞0.05），對(duì)小鼠的 TG 水平有顯著性的降低（p＜0.05）較高脂模型組降低了46.35%。刺梨山楂綠豆組的HDL-C 水平較高脂模型組顯著性（p＜0.05）上升了77%。

2.5 刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠盲腸組織的影響

刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠盲腸組織的影響見表5。

表5 刺梨山楂綠豆飲料對(duì)小鼠盲腸的影響Table 5 Effects of Rose roxbunghii，hawthorn and mung bean beverage on mice cecal

從表5中可看出刺梨山楂綠豆組的盲腸總重和盲腸內(nèi)容物重顯著性（p＜0.05）高于空白組，喂養(yǎng)高脂飼料的小鼠盲腸總重及盲腸內(nèi)容物重普遍高于喂養(yǎng)普通飼料的空白組，各組間的盲腸壁重及盲腸壁表面積沒有顯著性差異（p＞0.05）說明刺梨山楂綠豆飲料對(duì)盲腸組織的影響不大。

3 結(jié)論

本研究通過將刺梨、山楂、綠豆3 種常見的藥食同源具有降血脂功效的原料復(fù)合以期達(dá)到較為顯著的降血脂效果。喂養(yǎng)高脂飼料誘導(dǎo)小鼠建立高血脂癥模型，通過灌胃刺梨山楂綠豆飲料28 d 后，取出小鼠血清及肝臟測(cè)定其中的TC、TG、HDL-C 水平評(píng)價(jià)刺梨山楂綠豆飲料的降血脂效果。研究發(fā)現(xiàn)刺梨山楂綠豆飲料可通過顯著性（p＜0.05）降低小鼠血清的 TC、TG，分別降低了 42.28%，24.12%，顯著性（p＜0.05）升高血清及肝臟中的HDL-C 水平，分別升高了21.96%、77%，表明刺梨山楂綠豆飲料可通過調(diào)節(jié)血脂平衡達(dá)到良好的降血脂效果。