張冬杰，劉 洋，汪 亮，李忠秋，劉 娣,*

（1.黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所，黑龍江哈爾濱 150086；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種養(yǎng)結(jié)合重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱 150086；3.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150030）

胰島素樣生長(zhǎng)因子2（Insulin-like Growth Factor-2，IGF2）是20 世紀(jì)70 年代發(fā)現(xiàn)的一種促生長(zhǎng)因子，在胎兒生長(zhǎng)發(fā)育、肌肉生長(zhǎng)以及基因印跡等方面具有重要的調(diào)控作用[1]。2003 年，van Laere 等[2]研究發(fā)現(xiàn)，豬IGF2 基因內(nèi)含子3 中的單堿基突變（G3072A）會(huì)導(dǎo)致骨骼肌中IGF2 表達(dá)量上調(diào)3 倍、瘦肉率升高、皮下脂肪減少。究其原因是單堿基突變（G3072A）破壞了轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子鋅指蛋白ZBED6（Zinc Finger BED-Type Containing 6，ZBED6）的結(jié)合位點(diǎn)，使其無(wú)法正常結(jié)合到IGF2 基因上，至此，ZBED6 基因作為IGF2 的轉(zhuǎn)錄抑制因子進(jìn)入人們的視線。

ZBED6 是鋅指蛋白家族的一員，在胎盤(pán)哺乳動(dòng)物中極其保守。ZBED6 基因無(wú)內(nèi)含子，是從一個(gè)馴化的DNA 轉(zhuǎn)座子進(jìn)化而來(lái)，位于ZC3H11A（Zinc Finger CCCH-Type Containing 11A）基因的第1 個(gè)內(nèi)含子中，其編碼蛋白包含2 個(gè)BED 結(jié)構(gòu)域和1 個(gè)hATC 二聚體功能域。如果在小鼠的C2C12 成肌細(xì)胞中沉默ZBED6，IGF2 的表達(dá)水平會(huì)顯著上升、細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)、傷口愈合進(jìn)程加快。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，ZBED6 在C2C12 細(xì)胞基因組上的結(jié)合位點(diǎn)超過(guò)2 000 個(gè)，其中包括很多與發(fā)育和轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)的基因[3]。ZBED6 除了通過(guò)IGF2 參與調(diào)控骨骼肌生長(zhǎng)外[4]，還會(huì)抑制胰島素的產(chǎn)生、細(xì)胞聚合以及神經(jīng)元的分化[5]；在同一物種內(nèi)的表達(dá)也具有明顯的時(shí)空特異性[6]。由此可知，ZBED6基因的生物學(xué)功能非常復(fù)雜，需要不斷探索。

為了深入研究豬ZBED6 基因的生物學(xué)功能，本研究通過(guò)構(gòu)建系列缺失載體、利用重疊PCR 以及雙熒光素酶檢測(cè)技術(shù)開(kāi)展了民豬ZBED6 基因自身轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究，以期獲得調(diào)控ZBED6 轉(zhuǎn)錄的分子元件，為后續(xù)該基因的生物學(xué)功能研究以及基因編輯等提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 民豬基因組DNA，為本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.2 民豬ZBED6 基因啟動(dòng)子區(qū)的克隆 在NCBI 中檢索豬的ZBED6 基因（GenBank：XR_001304140.2）的5'側(cè)翼序列信息。利用Primer5.0 軟件分別設(shè)計(jì)上、下游引物A 和R1，預(yù)期擴(kuò)增長(zhǎng)度為2 032 bp，位置為-2 053～-21 bp（以翻譯起始密碼子“A”為+1），兩端分別引入酶切位點(diǎn)Kpn Ⅰ和Hind Ⅲ。引物序列（下劃線為內(nèi)切酶識(shí)別序列）：A：5′-GGTACCGCATTCCTTGGAA AGGCAGGG-3′，R1：5′-AAGCTTTCGTAGCAGAAT CTGTTAGTGGGTT-3′。

以民豬基因組DNA 為模板擴(kuò)增ZBED6 基因啟動(dòng)子區(qū)域。PCR 反應(yīng)體系20 μL：DNA 1 μL，2×Taq Master Mix 10 μL，上、下 游 引 物（10 μmol/L）各0.5 μL，ddH2O 補(bǔ)齊；PCR 反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min；95℃變性30 s，58.3℃退火30 s，72℃延伸120 s，共計(jì)30 個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10 min。擴(kuò)增結(jié)束后，使用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR 產(chǎn)物，觀測(cè)到目的條帶后，使用膠回收試劑盒回收目的條帶。將回收后的目的片段連入pMD18-T 載體構(gòu)建克隆質(zhì)粒pMD18-ZBED6，反應(yīng)體系10 μL：Solution Ⅰ5 μL，pMD18-T 0.5 μL，膠回收產(chǎn)物4.5 μL；反應(yīng)條件：16℃過(guò)夜連接。連接結(jié)束后將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α 感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂于LB 固體培養(yǎng)基，37℃倒置過(guò)夜培養(yǎng)，培養(yǎng)結(jié)束后挑取陽(yáng)性克隆菌落，PCR 鑒定，將陽(yáng)性克隆送交吉林省庫(kù)美生物科技有限公司測(cè)序。將序列正確的克隆菌株加入LB 液體培養(yǎng)基內(nèi)，重新?lián)u菌擴(kuò)繁后，小規(guī)模提取質(zhì)粒，用于后續(xù)載體的構(gòu)建。

1.3 報(bào)告基因質(zhì)粒pGL3-Basic-ZBED6 的構(gòu)建 將pGL3-Basic 空載體和pMD18-ZBED6 質(zhì)粒分別經(jīng)Kpn I 和HindⅢ雙酶切后，使用T4 連接酶過(guò)夜連接，酶切體系10 μL：Hind Ⅲ 0.5 μL；Kpn I 0.5 μL；10×M Buffer 1.0 μL；質(zhì)粒1.0 μL；ddH2O 7.0 μL。反應(yīng)條件：37℃水浴10 min。連接體系25 μL：10×T4 DNA 連接Buffer 2.5 μL，DNA片段5 μL，載體1 μL，T4 DNA 連接酶1 μL，ddH2O 15.5 μL，反應(yīng)條件：14℃過(guò)夜連接。連接結(jié)束后將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5α 感受態(tài)細(xì)胞中，篩選陽(yáng)性重組質(zhì)粒，經(jīng)菌液PCR 驗(yàn)證后，嚴(yán)格按照無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，提取無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒，使用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行純度的檢測(cè)，檢測(cè)合格后，置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 民豬ZBED6 基因啟動(dòng)子區(qū)系列缺失載體的構(gòu)建以引物A 和R1 所擴(kuò)增的片段為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)7 對(duì)系列缺失引物，引物信息見(jiàn)表1，其中R1 為通用下游引物，以重組質(zhì)粒pMD18-ZBED6 為模板擴(kuò)增系列截短型片段，反應(yīng)體系及反應(yīng)條件同上，退火溫度均為55℃。反應(yīng)結(jié)束后各系列片段按照1.2.2 方法分別連入pGL3-Basic 載體內(nèi)。第1 輪構(gòu)建了5 個(gè)截短型質(zhì)粒，分別命名為pB（-1897/-21）-ZBED6、pC（-1863/-21）-ZBED6、pD（-1808/-21）-ZBED6、pG（-1777/-21）-ZBED6 和pH（-1462/-21）-ZBED6。第2 輪構(gòu)建了2 個(gè)截短型質(zhì)粒，分 別 命 名 為pE（-1800/-21）-ZBED6 和pF（-1787/-21）-ZBED6。

表1 擴(kuò)增ZBED6 基因截短型啟動(dòng)子所用引物

1.5 豬腎源PK15 細(xì)胞的體外培養(yǎng) 按照Lipofectamine ? 2000 Transfection Reagent 嚴(yán)格進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前1 d 將細(xì)胞以4×105～8×105個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種于DMEM 培養(yǎng)基中（24 孔板），第2 天轉(zhuǎn)染時(shí)的細(xì)胞要達(dá)到80%～90%匯合，按照脂質(zhì)體∶報(bào)告基因質(zhì)?！胮RLTK 為2 μL∶0.5 μg∶0.00125 μg 的比例共轉(zhuǎn)染于豬PK15細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染4～6 h 后換成含有血清的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，24 h 后收集細(xì)胞，進(jìn)行熒光素酶活性檢測(cè)。以上實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3 次。

1.6 熒光素酶活性檢測(cè) 嚴(yán)格按照普洛麥格公司生產(chǎn)的雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)（Dual-Luciferase Reporter Assay）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)操作：取出24 孔板，棄掉原有細(xì)胞培養(yǎng)液，PBS 洗滌細(xì)胞1 次，每孔加入100 μL 細(xì)胞裂解液，37℃烘箱中放置15 min 后，收集細(xì)胞裂解液，離心5 min，取50 μL 上層細(xì)胞裂解液加入熒光測(cè)定管中，加入30 μL 檢測(cè)試劑（Firefly Luciferase，LAR Ⅱ），輕輕混勻后測(cè)定發(fā)光值，再加入30 μL Stop&GLo，測(cè)定Renila 熒光素酶發(fā)光值，二者的比值即為熒光素酶相對(duì)活性（RLA），RLA 的數(shù)值為3 次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。

1.7 民豬ZBED6 基因啟動(dòng)子區(qū)調(diào)控元件的預(yù)測(cè) 根據(jù)3 個(gè)轉(zhuǎn)錄因子預(yù)測(cè)網(wǎng)站（http://www.gene-regulation.com/pub/programs/alibaba2/index.html、http://alggen.lsi.upc.es/cgi-bin/promo_v3/promo/promoinit.cgi?dirDB=TF_8.3、http://jaspar.genereg.net）對(duì)ZBED6 基因的啟動(dòng)子區(qū)進(jìn)行預(yù)測(cè)分析。根據(jù)預(yù)測(cè)結(jié)果，探討該基因啟動(dòng)子區(qū)可能存在的調(diào)控元件。

1.8 民豬ZBED6 基因啟動(dòng)子區(qū)調(diào)控元件的篩選與驗(yàn)證根據(jù)在線軟件的預(yù)測(cè)結(jié)果，設(shè)計(jì)并合成用于ZBED6 基因啟動(dòng)子區(qū)各轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)缺失的引物，引物序列見(jiàn)表2。利用重疊延伸PCR 法獲得定點(diǎn)突變片段，重疊延伸PCR 主要通過(guò)3 個(gè)PCR 反應(yīng)完成：①以Adf-1調(diào)控元件的突變?yōu)槔?，首先以pMD18-ZBED6 質(zhì)粒為模板，用正向側(cè)引物A 和突變引物Del- Adf-1-R 進(jìn)行PCR1 擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物含有突變位點(diǎn)及其上游片段；②以pMD18-ZBED6 質(zhì)粒為模板，用反向側(cè)引物RS 和突變引物Del-Adf-1-F 進(jìn)行PCR2 擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物含有突變位點(diǎn)及其下游片段；③分別膠回收PCR1 和PCR2 擴(kuò)增產(chǎn)物，等比例混合后，以此為模板，使用正反向引物A 和RS 進(jìn)行PCR3 擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物即為引入目的突變的靶序列，然后按照上述方法連入pGL3-basic 載體。其他調(diào)控元件缺失載體的構(gòu)建均按照此方法進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 民豬ZBED6 基因啟動(dòng)子區(qū)的克隆測(cè)序 以豬耳組織樣DNA 為模板，以特異性引物A 和R1 進(jìn)行ZBED6基因5′側(cè)翼區(qū)擴(kuò)增，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后在2 000 bp 左右發(fā)現(xiàn)單一、明亮的條帶，與預(yù)期的2 032 bp相符。將目的片段純化、克隆測(cè)序后與NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)中豬的ZBED6 基因（登錄號(hào)為XR_001304140.2）序列相比，相似度為99.26%，說(shuō)明序列擴(kuò)增正確。

2.2 報(bào)告基因質(zhì)粒pGL3-Basic-ZBED6 的構(gòu)建 從圖1可見(jiàn)，雙酶切后，有一條長(zhǎng)約2 000 bp 的片段從質(zhì)粒中成功切下，與連入的ZBED6 基因片段大小相符，說(shuō)明目的片段已成功連入pGL3-Basic 載體。

圖1 pA（-2053/-21）-ZBED6 質(zhì)粒酶切鑒定圖譜

圖2 pA（-2053/-21）-ZBED6 雙熒光素酶活性分析

表2 ZBED6 基因啟動(dòng)子區(qū)調(diào)控元件缺失突變所用引物

2.3 熒光素酶活性檢測(cè) 如圖2 所示，與空白對(duì)照相比，pA（-2053/-21）-ZBED6 具有明顯的啟動(dòng)子活性，表明-2 053～-21 bp 片段內(nèi)含有調(diào)控民豬ZBED6 基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控元件。2.4 第1 輪系列長(zhǎng)度缺失載體的構(gòu)建 如圖3 所示，第6 泳道是最長(zhǎng)的原始片段pA（-2053/-21），長(zhǎng)度為2 032 bp，從右至左，依次截短，至第1 泳道為最短的pH 片段，長(zhǎng)度為1 441 bp。

圖3 民豬ZBED6 基因啟動(dòng)子截短型報(bào)告基因質(zhì)粒酶切鑒定圖譜

2.5 第1 輪系列載體的雙熒光素酶活性分析 如圖4 所示，重組質(zhì)粒pB（-1897/-21）-ZBED6 和pC（-1863/-21）-ZBED6（P＜0.05）、pC（-1863/-21）-ZBED6（P＜0.05）和pD（-1808/-21）-ZBED6（P＜0.05）、pD（-1777/-21）-ZBED6 和pG（-1808/-21）-ZBED6（P＜0.01）之間的雙熒光素酶活性存在顯著差異，預(yù)測(cè)-1 897～-1 863 bp、-1 863～-1 808 bp 以 及-1 808～-1 777 bp 存 在 調(diào) 控ZBED6 基因轉(zhuǎn)錄的增強(qiáng)子，其中-1 808～-1 777 bp 片段距離“ATG”起始密碼子最近，而且該片段的缺失造成了啟動(dòng)子活性的極顯著降低，因此后續(xù)研究主要以該片段為主。

圖4 截短型啟動(dòng)子熒光素酶活性分析

2.6 第2 輪系列長(zhǎng)度缺失載體的構(gòu)建及雙熒光素酶活性的測(cè)定 根據(jù)第1 輪重組質(zhì)粒的雙熒光素酶活性測(cè)定結(jié)果，推測(cè)在-1 808～-1 777 bp 存在1 個(gè)正調(diào)控元件，據(jù)此構(gòu)建第2 輪系列長(zhǎng)度缺失載體。如圖5 所示，pD 截短至pE 后啟動(dòng)子活性降低（P＜0.01）；pE 截短至pF后啟子活性降低（P＜0.05）；pF 截短至pG 后啟動(dòng)子活性降低（P＜0.05）。根據(jù)熒光信號(hào)的強(qiáng)弱，推測(cè)pD 和pG 之間即-1 808～-1 777 bp 存在重要的轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子，尤其是-1 808～-1 800 bp。

圖5 截短型啟動(dòng)子熒光素酶活性分析

2.7 核心區(qū)域的調(diào)控元件預(yù)測(cè) 根據(jù)上述檢測(cè)結(jié)果，利用在線生物學(xué)軟件對(duì)-1 808～-1 777 bp 區(qū)間潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行了預(yù)測(cè)。綜合3 個(gè)網(wǎng)站的預(yù)測(cè)結(jié)果，初步選定結(jié)合位點(diǎn)為-1 805～-1 798 bp 的Adf-1、-1 814～-1 803 bp 的HINFP 和-1 787～-1 774 bp 的CREB3 作為潛在的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件開(kāi)展下一步研究。

2.8 潛在的轉(zhuǎn)錄元件缺失突變分析 以pA（-2053/-21）-ZBED6 質(zhì)粒為模板，以重疊延伸PCR 中第3 輪擴(kuò)增用的A 和RS 為引物，擴(kuò)增片段，連入pGL3-Basic 載體，構(gòu)建陽(yáng)性對(duì)照重組質(zhì)粒（-2053/-1565）-pGL3，以pGL3-Basic 空載體為陰性對(duì)照，同時(shí)檢測(cè)陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和各轉(zhuǎn)錄元件缺失報(bào)告基因載體的雙熒光素酶活性。如圖6 所示，缺失CREB3、Adf-1 和HINFP 轉(zhuǎn)錄元件后，雙熒光素酶活性均顯著降低（P＜0.05）。

圖6 不同元件缺失對(duì)ZBED6 基因啟動(dòng)子活性的影響

3 討 論

真核生物的啟動(dòng)子包括核心啟動(dòng)子區(qū)和上游序列區(qū)，核心啟動(dòng)子區(qū)位于結(jié)構(gòu)基因的5'端上游，能活化RNA 聚合酶，使之與模板DNA 準(zhǔn)確地結(jié)合并具有轉(zhuǎn)錄起始的特異性，在該區(qū)內(nèi)還存在許多短的核苷酸序列，為轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)[7]。轉(zhuǎn)錄因子是基因表達(dá)調(diào)控過(guò)程中的重要調(diào)節(jié)因子，它與RNA 聚合酶Ⅱ形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合體，共同參與轉(zhuǎn)錄起始過(guò)程。轉(zhuǎn)錄因子主要分為2種，一種是非特異性轉(zhuǎn)錄因子，非選擇性的調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄；另一種是特性轉(zhuǎn)錄因子，它們能夠選擇性地調(diào)控某種或某些基因的轉(zhuǎn)錄。同時(shí)，不同的轉(zhuǎn)錄因子之間還可以通過(guò)多種方式相互結(jié)合，為這一調(diào)控過(guò)程提供了更多的可能[8]。

大約在2 億年前，一個(gè)DNA 轉(zhuǎn)座子整合到一種原始哺乳動(dòng)物的基因組中，數(shù)百萬(wàn)年后，它在所有胎盤(pán)哺乳動(dòng)物的共同祖先中進(jìn)化出一種基本的功能[9]，這個(gè)轉(zhuǎn)座子現(xiàn)被命名為ZBED6，在多個(gè)組織內(nèi)廣泛表達(dá)，是非特異性轉(zhuǎn)錄因子。Huang 等[10]發(fā)現(xiàn)，黃牛的ZBED6基因的啟動(dòng)子核心區(qū)位于-866 bp～-556 bp，其-826G＞A的突變會(huì)造成轉(zhuǎn)錄因子PLZF 結(jié)合位點(diǎn)的改變，野生型M-826G-pGL3 的啟動(dòng)子活性顯著高于突變型。ZBED6最早是在豬的肌肉組織中發(fā)現(xiàn)的，為了全面深入了解該轉(zhuǎn)錄因子的遺傳學(xué)特性，本研究采用系列截短的方式，篩選民豬ZBED6 基因的核心啟動(dòng)子區(qū)。

最初，根據(jù)傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)構(gòu)建了一段長(zhǎng)約1 000 bp 的ZBED6 基因5'端上游序列的報(bào)告載體，但經(jīng)雙熒光素酶檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，此片段無(wú)啟動(dòng)子活性。隨后，將片段延伸至上游2 000 bp，再次檢測(cè)發(fā)現(xiàn)此片段具有明顯的啟動(dòng)子活性，說(shuō)明轉(zhuǎn)錄因子在ZBED6 啟動(dòng)子區(qū)上的識(shí)別位點(diǎn)距離編碼區(qū)較遠(yuǎn)。通過(guò)構(gòu)建一系列缺失片段的報(bào)告載體，最終發(fā)現(xiàn)該基因上游啟動(dòng)子區(qū)從-1 808 bp 至-1 777 bp 的片段具有明顯的啟動(dòng)子活性，推測(cè)調(diào)控ZBED6基因轉(zhuǎn)錄的反式作用因子位于-1 808～-1 777 bp。利用在線軟件預(yù)測(cè)及雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，定點(diǎn)缺失掉Adf-1、HINFP 和CREB3 轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)后，ZBED6 基因的啟動(dòng)子活性均發(fā)生顯著降低，尤其是Adf-1 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的缺失，啟動(dòng)子活性下降最為顯著，預(yù)測(cè)結(jié)果與驗(yàn)證結(jié)果基本一致。

轉(zhuǎn)錄因子HINFP 是一個(gè)具有2 種不同功能的轉(zhuǎn)錄因子，根據(jù)細(xì)胞環(huán)境不同，可以激活或抑制靶基因的轉(zhuǎn)錄，但其通常需與其他物質(zhì)形成復(fù)合體后才能發(fā)揮作用。如在細(xì)胞周期由G1 期向S 期轉(zhuǎn)變的過(guò)程中，HINFP 需與NPAT（Nuclear Protein Ataxia-Telangiectasia）蛋白形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合體后才會(huì)作用于組蛋白H4 的啟動(dòng)子[11]。轉(zhuǎn)錄因子Adf-1 是Myb 基因家族的一員，Myb 基因家族是一類重要的轉(zhuǎn)錄因子家族，廣泛分布在動(dòng)物、植物、真菌和原生生物中，是植物中最大的一類轉(zhuǎn)錄因子，參與植物發(fā)育和代謝的網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)等生命過(guò)程。Adf-1 可通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附和mRNA 轉(zhuǎn)運(yùn)2 個(gè)關(guān)鍵過(guò)程控制果蠅大腦內(nèi)樹(shù)突的發(fā)育[12]。轉(zhuǎn)錄因子CREB3 是ATF（激活轉(zhuǎn)錄因子）/CREB（cAMP 反應(yīng)元件結(jié)合蛋白）家族中重要的一員，是真核生物中廣泛存在的一類基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄因子，該家族共同的結(jié)構(gòu)特征是堿性亮氨酸拉鏈（bZIP）模體。該家族蛋白涉及到細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、胞外刺激和應(yīng)激反應(yīng)等細(xì)胞生命過(guò)程[13]。

4 結(jié) 論

民豬ZBED6 基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制較為復(fù)雜，其啟動(dòng)子區(qū)存在HINFP、Adf-1 和CREB 3 等多個(gè)調(diào)控元件的結(jié)合位點(diǎn)。