高麗新，王丕明

(山西藥科職業(yè)學(xué)院，山西 太原 030031)

白芷川芎鼻腔給藥制劑是以都梁丸[1]為原方，由白芷和川芎兩味中藥經(jīng)制劑工藝加工而成，用于風(fēng)寒瘀血阻滯脈絡(luò)所致的頭痛。白芷主要化學(xué)成分為香豆素類成分，具有廣泛的生理和藥理作用[2]，香豆素類成分主要為歐前胡素、異歐前胡素。筆者根據(jù)處方中白芷的化學(xué)成分特點(diǎn)，研究制定了白芷的定性鑒別方法及歐前胡素、異歐前胡素的含量測(cè)定方法，以便更好地控制制劑的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

電子天平(沈陽(yáng)龍騰電子稱量?jī)x器有限公司)；AB204-N型精密分析天平(METTLER TOLEDO上海衡器有限公司)；101A-2 干燥箱(上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠)；TDE5-WS 多管架自動(dòng)平衡離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；939 薄層制板儀(重慶南岸貝爾德儀器技術(shù)廠)；CAMAG TLC SCANNER 3 薄層色譜掃描儀(卡瑪公司)；Agilent 1100型高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司)。

1.2 試藥

歐前胡素(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110826-201013)；異歐前胡素(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110827-201008)；白芷對(duì)照藥材(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：120984-200602)；白芷、川芎(安徽省亳州市中信中藥飲片廠)；白芷川芎鼻腔給藥制劑(自制)；硅膠G(青島海洋化工廠)；含量測(cè)定所用試劑均為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 白芷的薄層色譜鑒別[3]

2.1.1 供試品溶液制備 取白芷川芎鼻腔給藥制劑2.5 mL，水浴揮干，殘?jiān)? mL甲醇溶解，作為供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取歐前胡素對(duì)照品4.98 mg、異歐前胡素對(duì)照品4.67 mg置10 mL容量瓶中，加適量甲醇溶解，用甲醇定容到10 mL，即得混合對(duì)照品溶液。另取混合對(duì)照品溶液1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

2.1.3 對(duì)照藥材溶液制備 稱取白芷對(duì)照藥材0.5 g，加乙醚10 mL，加熱回流1 h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。

2.1.4 陰性對(duì)照溶液制備 除白芷外，按處方比例稱取藥材適量，按照白芷川芎鼻腔給藥制劑的制備方法制備缺白芷陰性對(duì)照樣品。取2.5 mL缺白芷的陰性對(duì)照樣品，水浴揮干，殘?jiān)? mL甲醇溶解，即得缺白芷的陰性對(duì)照溶液。

2.1.5 薄層鑒別 按照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各20 μL，對(duì)照品溶液、對(duì)照藥材溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠 G 薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)-乙醚(3∶2)為展開劑，在25 ℃下展開，取出，晾干，置紫外燈366 nm下檢視。結(jié)果：供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。結(jié)果見圖1。

1.缺白芷陰性對(duì)照品；2.歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品；

2.2 歐前胡素、異歐前胡素含量測(cè)定[4]

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18(5 μm，4.6 mm×250 mm)；填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相為甲醇-水(70∶30)；流速為1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm；柱溫25 ℃；樣品進(jìn)樣量為10 μL；理論塔板數(shù)按歐前胡素計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2.2 溶液制備 歐前胡素對(duì)照品溶液制備：取歐前胡素對(duì)照品5 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，用甲醇定容至刻度，搖勻，得到儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液1 mL置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得歐前胡素對(duì)照品溶液。異歐前胡素對(duì)照品溶液制備：取異歐前胡素對(duì)照品5 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，用甲醇定容至刻度，搖勻，得到儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液1 mL置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得異歐前胡素對(duì)照品溶液。供試品溶液制備：精密量取2.5 mL白芷川芎鼻腔給藥制劑(相當(dāng)于原藥材1 g)，水浴揮至盡干，殘?jiān)眉状忌倭慷啻无D(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，超聲30 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。

2.2.3 方法學(xué)考察 陰性樣品干擾試驗(yàn)：取缺白芷的鼻腔給藥制劑2.5 mL，水浴揮至盡干，殘?jiān)眉状忌倭慷啻无D(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，超聲30 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得缺白芷陰性樣品溶液。取歐前胡素對(duì)照品溶液、異歐前胡素對(duì)照品溶液、供試品溶液、缺白芷陰性樣品溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣分析，結(jié)果在該色譜條件下，缺白芷陰性樣品溶液對(duì)歐前胡素、異歐前胡素含量的測(cè)定無(wú)干擾，色譜見圖2、圖3、圖4、圖5。

圖2 歐前胡素色譜

圖3 異歐前胡素色譜

圖4 供試品色譜

圖5 缺白芷陰性對(duì)照色譜

線性關(guān)系：①分別精密量取歐前胡素對(duì)照品儲(chǔ)備液(0.498 mg/mL)0.3 mL、0.6 mL、0.9 mL、1.2 mL、1.5 mL、1.8 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻。按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積。以對(duì)照品溶液濃度(C)為橫坐標(biāo)X，峰面積(A)為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=33 178X+2.676 4，R2=0.999 9。結(jié)果見表1、圖6。

表1 歐前胡素線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果

圖6 歐前胡素標(biāo)準(zhǔn)曲線

結(jié)果表明歐前胡素在0.0059～0.0358 mg/mL濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

②分別精密量取異歐前胡素對(duì)照品儲(chǔ)備液(0.467 mg/mL)0.3 mL、0.6 mL、0.9 mL、1.2 mL、1.5 mL、1.8 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻。按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積。以對(duì)照品溶液濃度(C)為橫坐標(biāo)X，峰面積(A)為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=249 21X+0.666 7，R2=0.999 8。結(jié)果見表2、圖7。

表2 異歐前胡素線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果

圖7 異歐前胡素標(biāo)準(zhǔn)曲線

結(jié)果表明異歐前胡素在0.005 6～0.033 6 mg/mL濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：分別取歐前胡素對(duì)照品溶液、異歐前胡素對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，結(jié)果表明精密度良好。見表3。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液在室溫下放置，分別在0、4、8、12、16、24 h后按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。見表4。

表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批白芷川鼻腔給藥制劑按供試品溶液制備方法制備5份供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，記錄峰面積，結(jié)果表明重復(fù)性良好。見表5。

表5 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 (mg/mL)

回收率試驗(yàn)：精密量取同批已知含量的白芷川芎鼻腔給藥制劑(歐前胡素含量為0.248 mg/mL，異歐前胡素為0.152 mg/mL)6份，每份4 mL，分別精密加入歐前胡素對(duì)照品儲(chǔ)備液(0.498 mg/mL)2 mL、異歐前胡素對(duì)照品儲(chǔ)備液(0.467 mg/mL)1 mL，混勻。按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表6、表7。

表6 歐前胡素回收率試驗(yàn)結(jié)果

表7 異歐前胡素回收率試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，本方法歐前胡素的回收率范圍為97.99%～101.00%，其平均回收率為99.46%，RSD為1.05%；異歐前胡素的回收率范圍為97.86%～101.07%，其平均回收率為99.43%，RSD為1.14%，表明本方法回收率良好。

2.2.4 白芷川芎鼻腔給藥制劑樣品測(cè)定 取三批樣品分別按含量測(cè)定方法進(jìn)行含量測(cè)定，記錄峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算歐前胡素、異歐前胡素的含量。結(jié)果見表8。

表8 三批樣品測(cè)定結(jié)果 (mg/mL，n=3)

3 討論

本研究根據(jù)白芷藥材中有效成分的性質(zhì)，采用TLC和HPLC分別制定了白芷川芎鼻腔給藥制劑的定性鑒別和含量測(cè)定的方法，可更好地控制制劑的質(zhì)量。