明 明，武 爽，楊立國(guó)，2，代那音臺(tái)，2，蘇都那布其，扎拉嘎白乙拉，2*

(1.內(nèi)蒙古蒙醫(yī)藥工程技術(shù)研究院，內(nèi)蒙古 通遼 028000；2.內(nèi)蒙古民族大學(xué) 蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000；3.庫(kù)倫旗蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

棘豆止咳散為內(nèi)蒙古通遼市庫(kù)倫旗蒙醫(yī)醫(yī)院的醫(yī)院制劑，是由甘草、川貝母、多葉棘豆、石膏等4味藥組成，對(duì)于多種咳嗽均具有明顯療效，且價(jià)格低廉，無(wú)毒副作用，老人和兒童均可使用[1]。多葉棘豆作為其中一味重要組成藥物，為豆科植物多葉棘豆Oxytropismyriophylla的干燥全草[2]，但由于此藥材受產(chǎn)地、氣候等條件影響，不同批次藥材所含化學(xué)成分差異較大。為了有效控制各批次多葉棘豆藥材的質(zhì)量，考慮到多葉棘豆中主要化學(xué)成分為黃酮類(lèi)[3-10]，本研究利用紫外分光光度法對(duì)其總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定，并進(jìn)行方法學(xué)考察，報(bào)道如下。

1 儀器與材料

FW-177高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)；752-PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；HW-526數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海恒科學(xué)儀器有限公司)；BS224 S分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；亞硝酸鈉(天津市永大化學(xué)有限公司)；硝酸鋁(天津市大茂化學(xué)試劑廠)；氫氧化鈉(天津市大茂化學(xué)試劑廠)；95%乙醇(天津市永大化學(xué)有限公司)；其他試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)用多葉棘豆藥材由赤峰榮興堂藥業(yè)有限責(zé)任公司蒙中藥飲片廠提供(批號(hào)：1710013)；蘆丁對(duì)照品購(gòu)于上海詩(shī)丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)股份有限公司(批號(hào)：5718)。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

取粉碎過(guò)40目篩的多葉棘豆藥材粉末約5 g，共6份，各加入50 mL 65%乙醇浸泡，稱(chēng)定重量，隨后加熱回流2 h，取下放冷，再次稱(chēng)定重量，用65%乙醇補(bǔ)足減失的重量，過(guò)濾，殘?jiān)?0 mL 65%乙醇，再次稱(chēng)定重量，繼續(xù)加熱回流2 h，取下放冷，稱(chēng)定重量，用65%乙醇補(bǔ)足減失的重量，過(guò)濾。合并兩次濾液，搖勻即得供試品溶液。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)定10.08 mg蘆丁對(duì)照品，置于50 mL量瓶中，加入65%乙醇溶解，并稀釋至刻度，配置成0.2 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品，冷藏備用[11]。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

從不同濃度(0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL、0.08 mg/mL、0.1 mg/mL、0.12 mg/mL)配制的標(biāo)準(zhǔn)品溶液中精密量取1 mL，分別置于10 mL量瓶中，加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，靜置6 min后，再加入10%硝酸鋁0.3 mL，靜置6 min，最后加入4%氫氧化鈉試液4 mL，加入65%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min。采用紫外分光光度法，以65%乙醇為參照，在510 nm處測(cè)得吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(X)為橫坐標(biāo)，吸光度(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程：Y=11.49X+0.0179，r=0.9995。結(jié)果表明，蘆丁對(duì)照品在0.01～0.08 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，如圖1所示。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 精密度試驗(yàn) 精確吸取上述供述品溶液1 mL，參照“2.3”項(xiàng)的制備方法顯色及測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定6次，RSD為0.36%，結(jié)果表明，此方法精密度良好。

2.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 在室溫條件下，精確吸取上述供試品溶液1 mL，并參照“2.3”項(xiàng)的制備方法顯色后，放置0、5、10、15、20、25 min時(shí)測(cè)定其吸光度，計(jì)算RSD為2.29%。結(jié)果表明供試品溶液在25 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批多葉棘豆藥材，按照供試品溶液的制備方法制得6份供試品溶液，各取1 mL，并參照“2.3”項(xiàng)的制備方法顯色及測(cè)定吸光度，計(jì)算所得總黃酮的平均含量為0.332 mg/g，RSD為2.54%。表明此方法重復(fù)性良好，見(jiàn)表1。

表1 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4.4 加樣回收率試驗(yàn) 精確吸取已知含量的多葉棘豆供試品溶液0.5 mL，共6份，分別添加0.2 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5 mL，并參照“2.3”項(xiàng)的制備方法顯色及測(cè)定吸光度，并計(jì)算回收率。平均回收率為94.66%，RSD為2.46%。說(shuō)明此方法具有良好的回收率，見(jiàn)表2。

表2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5 多葉棘豆總黃酮含量測(cè)定

分別稱(chēng)取5.000 8 g、 4.999 1 g、 5.001 2 g、 4.999 6 g、5.000 9 g、5.001 7 g，共6份多葉棘豆樣品，按照前述方法測(cè)定多葉棘豆中總黃酮含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，多葉棘豆供試品溶液6次測(cè)定的總黃酮平均含量為0.332 8 mg/g。見(jiàn)表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

目前，內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)中并未對(duì)多葉棘豆總黃酮含量的測(cè)定方法進(jìn)行收錄，本研究建立了多葉棘豆總黃酮含量的測(cè)定方法，可用于多葉棘豆藥材質(zhì)量控制。

本研究對(duì)同一批次產(chǎn)自?xún)?nèi)蒙古地區(qū)的多葉棘豆進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果表明多葉棘豆中總黃酮平均含量為0.332 8 mg/g。在方法學(xué)考察中，加樣回收率的平均回收率為94.66%，RSD為2.46%，重復(fù)性RSD為2.54%。綜上所述，紫外分光光度法在多葉棘豆總黃酮含量測(cè)定中結(jié)果穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，可以用于棘豆止咳散中多葉棘豆的質(zhì)量控制。