廖勇，吳峰，侯東林，吳艷玲，陶歡，李成濤，萬華靖

（1.四川基因格司法鑒定所，四川 成都 610041；2.司法鑒定科學(xué)研究院 上海市法醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 上海市司法鑒定專業(yè)技術(shù)服務(wù)平臺(tái)，上海 200063）

同胞關(guān)系鑒定是法醫(yī)物證學(xué)親緣關(guān)系鑒定中的難點(diǎn)，特別是在全同胞鑒定案例中，在當(dāng)事人隱瞞等原因造成存在半同胞關(guān)系而鑒定人不知情的情況下，會(huì)干擾甚至造成錯(cuò)誤鑒定意見，讓鑒定機(jī)構(gòu)和鑒定人承擔(dān)較高風(fēng)險(xiǎn)。

目前，同胞關(guān)系鑒定使用的遺傳標(biāo)記包括常染色體短串聯(lián)重復(fù)（short tandem repeat，STR）序列基因座、性染色體STR基因座和線粒體DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）高變區(qū)（hypervariable region，HVR）序列，判別方法主要包括基于常染色體STR基因座分型結(jié)果的狀態(tài)一致性評(píng)分法（identity by state，IBS）[1]、ITO法、判別函數(shù)法[2-3]及家系重建[4]等。2014年，我國司法部司法鑒定管理局針對(duì)全同胞關(guān)系鑒定頒布了《生物學(xué)全同胞關(guān)系鑒定實(shí)施規(guī)范》（以下簡(jiǎn)稱《規(guī)范》）[1]，按照《規(guī)范》，全同胞鑒定采用的標(biāo)準(zhǔn)遺傳標(biāo)記是常染色體STR基因座（必要時(shí)補(bǔ)充性染色體STR基因座、mtDNA高變區(qū)序列分析），判別方法為IBS評(píng)分法，該方法簡(jiǎn)單、直觀、準(zhǔn)確率較高并容易掌握，但該《規(guī)范》使用的適用范圍是甄別全同胞與無關(guān)個(gè)體關(guān)系。在實(shí)際檢案中，由于當(dāng)事人隱瞞、不知情等原因造成誤將半同胞關(guān)系當(dāng)作全同胞關(guān)系來鑒定，會(huì)造成較高鑒定風(fēng)險(xiǎn)。

筆者在實(shí)際工作中受理了一起存疑全同胞鑒定案例，綜合應(yīng)用了多種遺傳標(biāo)記（常染色體STR基因座、性染色體STR基因座以及mtDNA HVR序列）、多種判斷標(biāo)準(zhǔn)（基于常染色體STR的IBS法、ITO法、判別函數(shù)法及家系重建），最終獲得了可靠的鑒定意見，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

據(jù)委托方自訴，張氏四兄妹是同父同母全同胞兄妹，父母去世，現(xiàn)需要上戶口，特委托四川基因格司法鑒定所對(duì)張氏四兄妹之間是否存在全同胞關(guān)系進(jìn)行檢驗(yàn)和鑒定。

張氏四兄妹：張1（男）、張2（男）、張3（女）、張4（女），四人指尖血血痕（載體為濾紙片）。

1.2 方法

按照《法庭科學(xué)DNA實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)范》[5]提取上述檢材的DNA，常染色體STR基因座分型采用EX20試劑盒（無錫中德美聯(lián)生物技術(shù)有限公司），X染色體STR（X-STR）基因座分型采用X19試劑盒（無錫中德美聯(lián)生物技術(shù)有限公司），Y染色體STR（Y-STR）基因座分型采用Data Y24試劑盒（無錫中德美聯(lián)生物技術(shù)有限公司）。對(duì)上述PCR產(chǎn)物，用Applied BiosystemsTM3730xl基因分析儀（美國Thermo Fisher Scientific公司）進(jìn)行毛細(xì)管電泳和基因型分析。IBS評(píng)分及同胞關(guān)系判定依據(jù)《規(guī)范》[1]進(jìn)行，19個(gè)必檢基因座同胞關(guān)系判定標(biāo)準(zhǔn)：（1）IBS≥22，傾向性認(rèn)為全同胞；（2）22＞IBS＞13，無法給出傾向性意見；（3）IBS≤13，傾向性認(rèn)為無關(guān)個(gè)體。

全同胞指數(shù)（full sibling index，F(xiàn)SI）、半同胞指數(shù)（half sibling index，HSI）及同胞關(guān)系判定參照文獻(xiàn)[2-3]采用ITO法計(jì)算，15個(gè)基因座同胞關(guān)系判定標(biāo)準(zhǔn)：（1）FSI和 HSI均＜1為無關(guān)個(gè)體；（2）FSI∶HSI≥1為全同胞關(guān)系；（3）FSI∶HSI＜1為半同胞關(guān)系。

判別函數(shù)法計(jì)算及同胞關(guān)系判定參照文獻(xiàn)[3]進(jìn)行，將15個(gè)基因座上等位基因全不同的基因座數(shù)、全相同的基因座數(shù)，代入全同胞-半同胞鑒別函數(shù)公式，得到全同胞D值（DFS4）、半同胞D值（DHS4），按以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定：（1）DFS4＞DHS4為全同胞關(guān)系；（2）DFS4＜DHS4為半同胞關(guān)系。

mtDNA提取及HVR-Ⅰ、HVR-Ⅱ序列分析按照《法庭科學(xué)DNA實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)范》[5]進(jìn)行，PCR引物設(shè)計(jì)和擴(kuò)增體系參照文獻(xiàn)[6]，PCR產(chǎn)物測(cè)序由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。

2 結(jié) 果

2.1 常染色體STR基因座分型結(jié)果分析

張氏四兄妹血痕的D3S1358等19個(gè)常染色體STR基因分型結(jié)果見表1。

表1 張氏四兄妹常染色體STR基因座分型結(jié)果

依據(jù)以上常染色體STR分型結(jié)果，參照《規(guī)范》[1]，對(duì)張氏四兄妹樣本兩兩之間進(jìn)行IBS評(píng)分，獲得累積IBS值（表2）：張2、張3、張4之間傾向性認(rèn)為是全同胞關(guān)系，張1與張2、張3、張4之間全同胞關(guān)系無法給出傾向性意見。

表2 張氏四兄妹IBS評(píng)分

為進(jìn)一步驗(yàn)證和明確張氏四兄妹之間的同胞關(guān)系，同樣依據(jù)常染色體STR分型結(jié)果，得到張氏四兄妹之間在D3S1358等15個(gè)基因座上的FSI、HSI值及FSI∶HSI值。結(jié)果（表3）提示：張2、張3、張4兩兩之間存在全同胞關(guān)系，這與IBS結(jié)果相一致；張1與張2、張3、張4之間可能存在半同胞關(guān)系，但是需要進(jìn)一步佐證。

為了驗(yàn)證張1與張2、張3、張4之間半同胞關(guān)系，采用判別函數(shù)法得到張氏四兄妹之間在D3S1358等15個(gè)基因座上DFS4、DHS4：張2、張3、張4兩兩之間存在全同胞關(guān)系，這一結(jié)果再次得到支持；張1分別與張2、張3、張4之間存在半同胞關(guān)系，這一結(jié)果和ITO法相一致（表4）。

表3 張氏四兄妹FSI∶HSI比值

表4 張氏四兄妹DFS4、DHS4值

表5 張氏四兄妹X染色體STR基因座分型結(jié)果

2.2 性染色體STR基因座分型結(jié)果及mtDNA HVR測(cè)序分析

為支持張1與張2、張3、張4之間半同胞關(guān)系，并進(jìn)一步分析是同母異父還是同父異母關(guān)系，對(duì)張氏四兄妹樣本進(jìn)行X-STR和Y-STR基因分型以及mtDNA HVR-Ⅰ和HVR-Ⅱ測(cè)序分析。

X-STR基因分型結(jié)果（表5）顯示：張3、張4在每個(gè)基因座上均能找到一個(gè)相同的分型（來自相同生父），結(jié)合張2基因型（來自相同生母），可推斷出全同胞張2、張3、張4的生父母基因型（表6），并且張1基因型均能從推斷的生母基因型中找到來源（表6），由此提示張氏四兄妹來自同一生母。

表6 張2、張3、張4生父母X染色體STR基因型推斷及與張1比對(duì)

mtDNA HVR-Ⅰ和HVR-Ⅱ測(cè)序結(jié)果顯示，張1、張2、張3、張4 mtDNA與標(biāo)準(zhǔn)序列（Anderson序列）相比，在HV-Ⅰ（16024～16415nt）、HV-Ⅱ（73～340nt）堿基片段發(fā)生變異的序列一致（16129SG-A，16183SAC，16189ST-C，16193IC，16217ST-C，16234SC-T，263SA-G，306ICCC，315IC）。mtDNA屬于母系遺傳標(biāo)記，可用來進(jìn)行母系親緣認(rèn)定，根據(jù)遺傳學(xué)原理和遺傳規(guī)律，同一母系個(gè)體的mtDNA來自相同的母系祖先，結(jié)合X-STR分型結(jié)果，支持張1、張2、張3、張4來自同一生母。

Y-STR基因分型結(jié)果顯示，張1與張2在DYS3891、DYS389Ⅱ、DYS439、DYS456、DYS458、DYS437、DYS635、DYS448、DYS527a/b、DYS447、DYS19、DYS392、DYS522、DYS393、DYS390、DYS385a/b共18個(gè)Y染色體STR基因座上分型不一致。Y染色體為男性所特有，Y染色體STR是父系遺傳標(biāo)記之一，可用來進(jìn)行父系親緣認(rèn)定，根據(jù)遺傳規(guī)律，同一父系的男性Y染色體來自相同的父系祖先，因此排除張1與張2來自同一生父。

至此，多種遺傳標(biāo)記（常染色體STR、性染色體STR、線粒體DNA）檢測(cè)結(jié)果相互驗(yàn)證和補(bǔ)充，綜合分析后，支持以下鑒定意見：（1）支持張2、張3、張4兩兩之間存在全同胞關(guān)系；（2）支持張1分別與張2、張3、張4之間為同母異父半同胞關(guān)系。

根據(jù)此鑒定意見，通過常染色體STR結(jié)果推斷張2、張3、張4父母基因型，并與張1比對(duì)驗(yàn)證。結(jié)果顯示，推斷的張2、張3、張4父母基因型均符合遺傳規(guī)律（單個(gè)基因座不超過4個(gè)基因型）；從推斷的父母基因型中，在D3S1358等16個(gè)基因座，張1基因型能找到來源，但在D13S317、D8S1179、D5S818基因座只能找到一個(gè)等位基因來源，不符合同父同母遺傳規(guī)律，支持張1與張2、張3、張4半同胞關(guān)系。

3 討 論

同胞關(guān)系鑒定是親權(quán)關(guān)系鑒定中檢案量?jī)H次于親子鑒定的項(xiàng)目，但由于技術(shù)手段的有限性及實(shí)際工作的復(fù)雜性，一直是司法鑒定中的難點(diǎn)和研究熱點(diǎn)。

《規(guī)范》中的IBS法是通過計(jì)算兩個(gè)個(gè)體間常染色體STR共有等位基因數(shù)來判斷全同胞關(guān)系，與ITO、判別函數(shù)法相比，無需使用等位基因頻率數(shù)據(jù)，計(jì)算簡(jiǎn)單、直觀、有效，準(zhǔn)確率在99%以上[7]，已廣泛用于全同胞關(guān)系鑒定[8]，但在使用時(shí)要注意兩點(diǎn)：（1）適用范圍。適用于在雙親皆無情形下甄別生物學(xué)全同胞與無關(guān)個(gè)體關(guān)系，若兩名被鑒定人之間存在其他親緣關(guān)系（如半同胞、堂表親等），則本《規(guī)范》不適用。（2）系統(tǒng)效能。檢測(cè)19、29、39個(gè)STR基因座時(shí)，系統(tǒng)效能分別約為75%、85%、95%；增加STR基因座雖然能提高系統(tǒng)效能，但是要求增加的STR基因座個(gè)體識(shí)別率（discrimination power，DP）值要大于0.9。筆者在實(shí)際鑒定工作中（包括本案例）遇到多起由于當(dāng)事人隱瞞等原因，誤將半同胞作為全同胞鑒定的案例，在客觀上違背了《規(guī)范》使用前提。根據(jù)筆者經(jīng)驗(yàn)，在增加STR基因座檢測(cè)時(shí)，若選擇的試劑盒基因座大部分DP值小于0.9則可能會(huì)造成誤判，同時(shí)由于目前市面上很少有DP值均大于0.9的商品化試劑盒可用，因此，本案例使用必檢的19個(gè)基因座（準(zhǔn)確率依然大于99%），雖然系統(tǒng)效能相對(duì)較低，出現(xiàn)對(duì)張1與張2、張3、張4是否存在全同胞關(guān)系無法給出傾向性意見情況，但錯(cuò)判率極低[9]。因此，在使用《規(guī)范》時(shí)鑒定人要注意甄別和核實(shí)委托方實(shí)際情況，注意適用范圍及系統(tǒng)效能，并建議同時(shí)使用其他方法和增加遺傳標(biāo)記加以相互驗(yàn)證和甄別，以免不當(dāng)使用試劑盒和方法干擾鑒定意見、甚至錯(cuò)誤鑒定。

ITO法是計(jì)算個(gè)體間某種血緣關(guān)系的經(jīng)典方法，與IBS法相比，可用于全同胞、半同胞、無關(guān)個(gè)體關(guān)系鑒定，適用范圍更廣，但是需要等位基因頻率數(shù)據(jù)、計(jì)算較為復(fù)雜，鑒定人較難掌握。陸惠玲等[3]利用日常鑒定累積的1050個(gè)樣本，通過15個(gè)常染色體STR基因分型結(jié)果在ITO法基礎(chǔ)上建立了一套價(jià)值較高的鑒定全同胞、半同胞的方法，指出FSI∶HSI≥1與FSI∶HSI＜1可分別作為全同胞與半同胞的判別標(biāo)準(zhǔn)，交互準(zhǔn)確率為87.5%；同時(shí)在此基礎(chǔ)上建立了全同胞-半同胞等4組判別函數(shù)，進(jìn)一步簡(jiǎn)化了計(jì)算，只需根據(jù)分型結(jié)果統(tǒng)計(jì)等位基因匹配情況，帶入相應(yīng)公式求出D值，比較D值高低即可作出判斷，準(zhǔn)確率在84.4%～97.7%。本案中，IBS法無法對(duì)張1與張2、張3、張4間全同胞關(guān)系給出傾向性意見，使用ITO及判別函數(shù)法計(jì)算后，提示張1與張2、張3、張4間存在半同胞關(guān)系，初步甄別出本案中隱藏的半同胞關(guān)系，但是由于準(zhǔn)確率較低，還需其他遺傳標(biāo)記支持。

由于父系及母系遺傳特點(diǎn)，性染色體STR以及mtDNA高變區(qū)序列多態(tài)性檢測(cè)在同胞鑒定中可作為重要的支持和補(bǔ)充證據(jù)。X-STR可作為同父女性間鑒定的遺傳標(biāo)記，若參與鑒定的個(gè)體足夠多，還可用于家系重建并為同母關(guān)系鑒定提供依據(jù)[7]；無論性別，mtDNA高變區(qū)序列多態(tài)性可作為同母關(guān)系鑒定的重要參考遺傳標(biāo)記；Y-STR是同父男性間鑒定的可靠遺傳標(biāo)記。本案中，由于參與鑒定人較多，結(jié)合性別，綜合使用了X和Y染色體STR及mtDNA檢測(cè)，結(jié)合常染色體STR分型結(jié)果，支持張2、張3、張4之間存在全同胞關(guān)系，支持張1與張2、張3、張4存在同母異父半同胞關(guān)系。

基于常染色體STR分型結(jié)果的家系重建，在隔代親緣鑒定中具有重要的參考價(jià)值[4]。本案例由于參與鑒定的全同胞個(gè)體較多，根據(jù)常染色體STR分型結(jié)果可推斷出父母基因型，根據(jù)孟德爾遺傳規(guī)律，在每一個(gè)父母基因座可推斷出≤4種基因型，其他存疑的全同胞或半同胞個(gè)體可在推斷出的每一個(gè)基因座找到兩個(gè)均相同或至少一個(gè)相同基因型，比對(duì)結(jié)果可支持最終的鑒定意見。

隨著社會(huì)發(fā)展，親權(quán)鑒定工作不斷增多，案情的復(fù)雜性和風(fēng)險(xiǎn)性隨之增高，在疑難、復(fù)雜、存疑的鑒定案例中要注意甄別和核實(shí)，而多種遺傳標(biāo)記的綜合應(yīng)用是鑒定機(jī)構(gòu)和鑒定人降低鑒定風(fēng)險(xiǎn)、獲得可靠鑒定意見的有效手段[7]。法醫(yī)物證學(xué)鑒定機(jī)構(gòu)和鑒定人要在實(shí)際工作中不斷積累經(jīng)驗(yàn)，正確運(yùn)用各種遺傳標(biāo)記和計(jì)算方法以相互驗(yàn)證、支持，以得到可靠的鑒定意見，提高鑒定意見準(zhǔn)確性和鑒定工作質(zhì)量。