王蘭朋，武麗蕊，王超

廊坊市人民醫(yī)院1胸外科3實驗室，河北 廊坊065000

2河北中石油中心醫(yī)院婦科，河北 廊坊0650000

胸腺上皮瘤是臨床中常見的縱隔腫瘤，在縱隔腫瘤中所占的比例為15%～20%，其主要病理表現(xiàn)為腫瘤細胞內(nèi)存在非腫瘤細胞的浸潤。胸腺上皮瘤患者多存在免疫系統(tǒng)失衡的現(xiàn)象，因此會引發(fā)重癥肌無力等多種免疫性疾病，對患者的生活質(zhì)量造成了嚴重的影響[1-2]。目前臨床上對于胸腺上皮瘤的發(fā)病機制尚未完全明確。有研究顯示，胸腺上皮瘤的發(fā)生與相關(guān)細胞因子的表達異常密切相關(guān)[3]。胰島素樣生長因子-1受體（insulin-like growth factor-1 receptor，IGF-1R）是酪氨酸蛋白激酶家族的成員，是一種糖蛋白跨膜受體，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有密切的關(guān)系[4]。表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）是一種跨膜糖蛋白受體，能夠促進腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移[5]。p53基因是一種抑癌基因，是細胞生長、增殖的負調(diào)節(jié)因子，在多種惡性腫瘤中均有表達，且與腫瘤的預(yù)后及生物學(xué)特性具有相關(guān)性，對細胞周期及細胞凋亡的調(diào)控起關(guān)鍵作用[6]。目前，關(guān)于IGF-1R、EGFR、p53蛋白表達與胸腺上皮瘤關(guān)系的相關(guān)報道較少，因此，本研究對IGF-1R、EGFR、p53蛋白在胸腺上皮瘤組織中的表達情況及臨床意義進行了探討，旨在為臨床醫(yī)師診治胸腺上皮瘤提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2013年3月至2015年2月廊坊市人民醫(yī)院收治的胸腺上皮瘤患者的胸腺上皮瘤組織存檔石蠟標本。胸腺上皮瘤患者的納入標準：①經(jīng)過病理組織學(xué)檢查確診為胸腺上皮瘤；②未接受過放化療治療；③臨床資料完整。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②合并先天性免疫系統(tǒng)疾?。虎鄄溉槠诨蛉焉锲趮D女。根據(jù)納入、排除標準，本研究共納入82例胸腺上皮瘤患者的胸腺上皮瘤組織標本。82例胸腺上皮瘤患者中，男45例，女37例；年齡為41～76歲，平均年齡為（62.14±3.27）歲；合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例，合并重癥肌無力43例；Masaoka分期：Ⅰ～Ⅱ期34例，Ⅲ～Ⅳ期48例。另選取同期胸腺濾泡性增生患者的胸腺濾泡性增生組織存檔石蠟標本為對照，納入標準：①確診為胸腺濾泡性增生；②臨床資料完整。排除標準：①惡性腫瘤患者；②哺乳期或妊娠期婦女；③合并先天性免疫系統(tǒng)疾病。根據(jù)納入、排除標準，本研究共納入60例胸腺濾泡性增生患者，其中，男32例，女28例；年齡為31～74歲，平均年齡為（59.87±3.81）歲。兩組患者的性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 儀器與試劑

電子顯微鏡購于深圳超眼科技有限公司，鼠抗人IGF-1R單克隆抗體購于美國NeoMarkers公司，鼠抗人EGFR單克隆抗體購于美國Sigma公司，鼠抗人p53單克隆抗體購于丹麥Dako公司；IGF-1R、EGFR、p53檢測試劑盒均購于上海酶聯(lián)生物科技有限公司。免疫組織化學(xué)染色試劑盒和二氨基聯(lián)苯胺顯色試劑盒均購于徠卡顯微系統(tǒng)（上海）貿(mào)易有限公司。

1.3 免疫組織化學(xué)染色法

采用免疫組織化學(xué)染色法檢測胸腺上皮瘤組織和胸腺濾泡性增生組織中IGF-1R、EGFR、p53蛋白的表達情況。具體方法：取石蠟包埋組織進行切片，切片厚度為4 μm。采用免疫組織化學(xué)EnVision二步法進行染色：將組織切片置于65℃下烘烤12 h，然后脫蠟、水化切片，應(yīng)用3%的過氧化氫對內(nèi)源性過氧化物酶進行滅活，采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗標本2次，依次加入鼠抗人IGF-1R單克隆抗體、鼠抗人EGFR單克隆抗體、鼠抗人p53單克隆抗體，再應(yīng)用PBS沖洗標本2次，然后加入鏈霉素工作液（經(jīng)辣根過氧化物酶標記），置于溫度為37℃的恒溫培養(yǎng)箱中孵育25 min，完成后應(yīng)用PBS沖洗，二氨基聯(lián)苯胺染色，蘇木素復(fù)染，應(yīng)用中性樹膠進行封固。

1.4 染色結(jié)果判斷標準

染色結(jié)果由兩名高資歷病理科醫(yī)師進行觀察，以胸腺上皮瘤組織和胸腺濾泡性增生組織中上皮細胞的細胞質(zhì)或者細胞膜呈棕褐色或黃色顆粒判定為IGF-1R陽性染色，以上皮細胞的細胞膜呈棕褐色或黃色顆粒判定為EGFR陽性染色，以腫瘤上皮細胞的細胞核呈棕褐色、棕黃色或黃色顆粒判定為p53陽性染色。每個切片選擇10個高倍鏡視野進行觀察，于每個視野下觀察100個細胞的著色情況。①染色強度評分標準：棕褐色計3分，棕黃色計2分，淡黃色計1分，基本無著色計0分。陽性細胞所占百分比評分標準：陽性細胞所占百分比≤5%計0分，陽性細胞所占百分比為6%～25%計1分，陽性細胞所占百分比為26%～50%計2分，陽性細胞所占百分比≥51%計3分。染色強度和陽性細胞所占百分比的乘積為0～2分判定為IGF-1R、EGFR、p53陰性表達，染色強度和陽性細胞所占百分比的乘積為3～9分判定為IGF-1R、EGFR、p53陽性表達。

1.5 觀察指標及隨訪

比較胸腺上皮瘤組織和胸腺濾泡性增生組織中IGF-1R、EGFR、p53蛋白的陽性表達情況，并分析IGF-1R、EGFR、p53蛋白在胸腺上皮瘤組織中的陽性表達情況與胸腺上皮瘤患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。以電話隨訪的方式對全部患者進行隨訪，隨訪截止時間為2016年3月，統(tǒng)計胸腺上皮瘤患者的生存與死亡例數(shù)，并對生存與死亡的胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤組織中IGF-1R、EGFR、p53蛋白的陽性表達情況進行比較。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IGF- 1 R、EGFR、 p53蛋白在胸腺上皮瘤組織和胸腺濾泡性增生組織中陽性表達情況的比較

IGF-1R、EGFR、p53蛋白在胸腺上皮瘤組織中的陽性表達率均明顯高于胸腺濾泡性增生組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 胸腺上皮瘤組織與胸腺濾泡性增生組織中IGF- 1 R、EGFR、 p53蛋白陽性表達情況的比較[ n（%）]

2.2 IGF- 1 R、EGFR、 p53蛋白陽性表達情況與胸腺上皮瘤患者臨床特征的關(guān)系

不同性別、年齡、世界衛(wèi)生組織（WHO）分型、腫瘤直徑胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤組織中IGF-1R、EGFR、p53蛋白的陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。Masaoka分期為Ⅲ～Ⅳ期胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤組織中的IGF-1R、EGFR、p53蛋白的陽性表達率均高于Masaoka分期為Ⅰ～Ⅱ期的胸腺上皮瘤患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.251、6.037、7.212，P＜0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤組織中的IGF-1R、EGFR、p53蛋白的陽性表達率均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胸腺上皮瘤患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=10.070、5.398、16.943，P＜0.05）。（表2）

2.3 IGF- 1 R、EGFR、 p53蛋白陽性表達情況與胸腺上皮瘤患者預(yù)后的關(guān)系

截至2016年3月，共失訪6例，獲得隨訪76例，其中，43例胸腺上皮瘤患者生存。將76例胸腺上皮瘤患者分為生存組與死亡組，死亡組胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤組織中IGF-1R、EGFR、p53蛋白的陽性表達率均明顯高于生存組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（表3）

表2 不同臨床特征胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤組織中IGF- 1 R、EGFR、 p53蛋白的陽性表達情況（ n=82）

表3 兩組胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤組織中IGF- 1 R、EGFR、 p53蛋白的陽性表達情況[ n（%）]

2.4 IGF- 1 R、EGFR、 p53蛋白在胸腺上皮瘤組織中表達的相關(guān)性

經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，EGFR與IGF-1R的陽性表達呈正相關(guān)（r=0.270，P=0.032），EGFR與p53的陽性表達呈正相關(guān)（r=0.443，P=0.014），IGF-1R與p53的陽性表達無相關(guān)性（r=-0.121，P=0.918）。

3 討論

胸腺上皮瘤可發(fā)生于各年齡段的人群，中年人為該腫瘤的高發(fā)人群。在發(fā)病早期，胸腺上皮瘤患者的腫瘤體積較小，無明顯的臨床癥狀，臨床檢查的漏診率較高；當腫瘤體積增大至一定程度時，周圍組織器官會受到壓迫，進而患者會表現(xiàn)出胸悶、胸痛、發(fā)熱、咳嗽、體重減輕等癥狀，一旦確診患者已經(jīng)發(fā)展至中晚期，臨床治療效果及預(yù)后均較差。因此，尋找能夠輔助診斷惡性腫瘤及評估腫瘤惡性程度及預(yù)后的分子標志物成為臨床研究的熱點[7-9]。

IGF-1R廣泛存在于人細胞質(zhì)區(qū)、胞外區(qū)及跨膜區(qū)，是一種糖蛋白跨膜受體。據(jù)相關(guān)研究結(jié)果顯示，IGF-1R在乳腺癌、卵巢癌等多種惡性腫瘤組織中均異常表達，且能夠促進腫瘤細胞的增殖，抑制腫瘤細胞的凋亡，與腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移和浸潤密切相關(guān)[10-11]。EGFR是一種細胞膜表面的糖蛋白受體，是由原癌基因c-erbB-1編碼，在多種惡性腫瘤中的表達水平均較高，且被認為是對惡性腫瘤患者生存情況影響最大的分子標志物。有研究指出，EGFR的過表達與惡性腫瘤細胞的增殖、活動性、浸潤性、細胞凋亡抑制、黏連性及新生血管的形成均具有密切的關(guān)系[12-14]。p53基因是機體內(nèi)重要的抑癌基因，也是調(diào)節(jié)細胞增殖、分化和凋亡的重要因子，在正常細胞中能夠有效地抑制腫瘤的增殖，并對細胞的分化具有促進作用，進而抑制腫瘤的發(fā)生，但突變的p53基因則可參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，IGF-1R、EGFR、p53蛋白在胸腺上皮瘤組織中的陽性表達率均明顯高于胸腺濾泡性增生組織（P＜0.01），Masaoka分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤組織中的IGF-1R、EGFR、p53蛋白的陽性表達率均高于Masaoka分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，且死亡組胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤組織中IGF-1R、EGFR、p53蛋白的陽性表達率均明顯高于生存組（P＜0.01），說明IGF-1R、EGFR、p53蛋白在胸腺上皮瘤組織中的表達水平較高，且可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，IGF-1R、EGFR、p53蛋白陽性表達率高的胸腺上皮瘤患者，其生存率較低。分析其原因主要包括以下3個方面：①IGF-1R的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)能夠使細胞的黏附性發(fā)生變化，導(dǎo)致細胞向惡性方向發(fā)展，進而導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生；②EGFR異常表達會對細胞核的正常轉(zhuǎn)錄造成干擾，誘導(dǎo)腫瘤細胞分化、增殖，并促進腫瘤細胞侵襲、轉(zhuǎn)移及血管生成，抑制腫瘤細胞的凋亡，進而對腫瘤的發(fā)展發(fā)揮促進作用；③p53基因在突變后可發(fā)揮致癌基因的作用，其高表達可有效促進胸腺上皮瘤的發(fā)生以及浸潤和轉(zhuǎn)移。宋楠等[15]研究發(fā)現(xiàn)，p53與胸腺上皮瘤的分型具有一定的關(guān)系，其陽性表達率隨著腫瘤細胞異型程度的增加而升高。然而，本研究結(jié)果顯示，p53陽性表達可能與WHO分型無關(guān)，分析其原因可能與樣本的選擇和樣本數(shù)量的不同有關(guān)。通過對IGF-1R、EGFR、p53蛋白在胸腺上皮瘤組織中表達的相關(guān)性進行分析發(fā)現(xiàn)，EGFR與IGF-1R、p53蛋白的陽性表達均呈正相關(guān)，IGF-1R與p53的陽性表達無相關(guān)性，說明EGFR、IGF-1R、p53蛋白共同參與了胸腺上皮瘤的發(fā)生與發(fā)展。EGFR與IGF-1R的陽性表達呈正相關(guān)的機制可能是因為IGF-1R的異常表達能夠促進血管內(nèi)皮生長因子的合成與釋放，促進腫瘤新生血管的生成，進而使EGFR的表達水平也隨之升高，共同促進了腫瘤的發(fā)展；EGFR與p53的陽性表達呈正相關(guān)的機制主要是因為EGFR通過結(jié)合其配體，使自身酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化，引起細胞過度增殖，而p53基因是細胞生長的監(jiān)控器，其阻礙了因EGFR磷酸化作用而引發(fā)的細胞過度增殖，但是突變的p53基因失去了該功能，導(dǎo)致EGFR磷酸化作用加強，引發(fā)細胞過度增殖，進而共同促進腫瘤的進展。綜上所述，IGF-1R、EGFR、p53蛋白在胸腺上皮瘤組織中的表達水平較高，共同參與了胸腺上皮瘤的發(fā)生、浸潤及轉(zhuǎn)移，對胸腺上皮瘤患者的生存情況也造成了一定的影響，在一定程度上可以作為評估胸腺上皮瘤惡性程度及預(yù)后的有效指標。本研究的不足之處在于樣本例數(shù)較少，研究結(jié)果還需在今后的研究中進一步證實。