郭俊杰，李鎖嚴(yán)，董麗艷，于偉杰，劉翠萍，韓明玥#

赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院1乳腺外科，2病理科，內(nèi)蒙古 赤峰 0240000

浸潤性乳腺癌是威脅女性健康的一種惡性腫瘤，其發(fā)病率較高，據(jù)統(tǒng)計(jì)中國浸潤性乳腺癌的發(fā)病率低于歐美國家，發(fā)病年齡小于歐美國家，但病死率呈逐年增加趨勢[1-2]。隨著診斷和治療技術(shù)的不斷發(fā)展，浸潤性乳腺癌患者的生存率有所提升，但情況仍不容樂觀。RNA結(jié)合基序蛋白3（RNA binding motif protein 3，RBM3）是一種冷休克蛋白，可以通過調(diào)節(jié)DNA的完整性和DNA修復(fù)參與細(xì)胞凋亡，且在多種腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)[3-4]。相關(guān)研究證實(shí)，RBM3在卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌和結(jié)腸癌等多種腫瘤中高表達(dá)，且與患者預(yù)后良好密切相關(guān)[5-8]。目前，關(guān)于RBM3在浸潤性乳腺癌中的作用機(jī)制尚未闡明，而且其與浸潤性乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系也未明確。因此，本研究對RBM3與浸潤性乳腺癌患者臨床特征和預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行探討，以期為浸潤性乳腺癌的預(yù)后評估提供幫助，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年2月至2016年8月赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院收治的浸潤性乳腺癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理證實(shí)為浸潤性乳腺癌；②接受手術(shù)治療，并留有完整的腫瘤組織和對應(yīng)癌旁組織；③年齡為18～65歲；④女性。排除標(biāo)準(zhǔn)：①曾接受放療、化療等治療；②合并其他部位腫瘤；③隨訪時(shí)間短于3個(gè)月。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入136例浸潤性乳腺癌患者。其中，年齡≤50歲87例，年齡＞50歲的49例；絕經(jīng)前87例，絕經(jīng)后49例；腫瘤直徑＜2 cm 54例，腫瘤直徑為2～5 cm 51例，腫瘤直徑＞5 cm 31例；浸潤性導(dǎo)管癌117例，浸潤性小葉癌10例，黏液腺癌5例，伴有化生的癌4例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目為1～3個(gè)46例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目＞3個(gè)35例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移55例。收集患者的乳腺癌組織和癌旁組織。

1.2 資料收集

收集患者的病理診斷結(jié)果、TNM分期、組織學(xué)分期、月經(jīng)狀況、腫瘤直徑等資料。

1.3 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法檢測RBM 3 mRNA在浸潤性乳腺癌組織中的表達(dá)

無菌環(huán)境下將乳腺癌組織和癌旁組織剪碎放入液氮中研磨，離心，提取上層清液。采用總RNA提取試劑盒[賽默飛世爾科技（中國）有限公司]提取總RNA，然后采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法進(jìn)行基因擴(kuò)增，95℃預(yù)變性30 s，60℃變性20 s，72℃退火20 s，循環(huán)40次。以β-action為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算RBM3mRNA的相對表達(dá)量。

1.4 預(yù)后隨訪

采用復(fù)診及電話隨訪等方式對所有患者進(jìn)行隨訪，隨訪截止日期為2019年1月30日，記錄浸潤性乳腺癌患者的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡等情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。服從正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用配對樣本t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評價(jià)RBM3mRNA對浸潤性乳腺癌患者預(yù)后的診斷價(jià)值。采用Kaplan-Meier法和Cox回歸分析對浸潤性乳腺癌患者無瘤生存預(yù)后的影響因素進(jìn)行分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RBM 3 mRNA相對表達(dá)量的比較

浸潤性乳腺癌組織中RBM3mRNA的相對表達(dá)量為（3.64±0.83），明顯高于癌旁組織中的（1.15±0.36），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=60.514，P＜0.01）。

2.2 RBM 3 mRNA表達(dá)與浸潤性乳腺癌患者臨床特征的關(guān)系

以浸潤性乳腺癌患者乳腺癌組織中RBM3mRNA相對表達(dá)量的平均值（3.64）為界，將患者分為RBM3mRNA高表達(dá)組（RBM3mRNA＞3.64）61例和RBM3mRNA低表達(dá)組（RBM3 mRNA≤3.64）75例。RBM3mRNA高表達(dá)組乳腺癌患者的TNM分期、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、ER表達(dá)情況、PR表達(dá)情況、HER2表達(dá)情況與RBM3mRNA低表達(dá)組患者比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；RBM3mRNA高表達(dá)組和RBM3mRNA低表達(dá)組患者的年齡、腫瘤直徑比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表1）

表1 RBM 3 mRNA高表達(dá)組和RBM 3 mRNA低表達(dá)組乳腺癌患者臨床特征的比較

2.3 預(yù)后情況的比較

截至隨訪結(jié)束，患者的隨訪時(shí)間為4～60個(gè)月，無瘤生存率為31.62%（43/136）。RBM3mRNA高表達(dá)組浸潤性乳腺癌患者的中位無瘤生存時(shí)間為45個(gè)月（95%CI：26～58），RBM3mRNA低表達(dá)組浸潤性乳腺癌患者的中位無瘤生存時(shí)間為10個(gè)月（95%CI：9～25）。RBM3mRNA高表達(dá)組浸潤性乳腺癌患者的無瘤生存情況優(yōu)于RBM3mRNA低表達(dá)組乳腺癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.616，P=0.003）。（圖1）

圖1 RBM 3 mRNA高表達(dá)組（ n=61）和RBM 3 mRNA低表達(dá)組（ n=75）浸潤性乳腺癌患者的無瘤生存曲線

2.4 RBM 3 mRNA診斷浸潤性乳腺癌患者預(yù)后的價(jià)值

截至隨訪結(jié)束，RBM3mRNA診斷浸潤性乳腺癌患者4～60個(gè)月無瘤生存預(yù)后的AUC為0.822（95%CI：0.747～0.882），最大約登指數(shù)為 0.572，其所對應(yīng)的最佳截?cái)帱c(diǎn)、靈敏度、特異度分別為4.29、96.77%和60.47%。（圖2）

圖2 RBM 3 mRNA診斷浸潤性乳腺癌患者預(yù)后的ROC曲線

2.5 浸潤性乳腺癌患者預(yù)后影響因素的因素分析

將可能與浸潤性乳腺癌患者無瘤生存時(shí)間有關(guān)的因素納入Cox單因素分析，結(jié)果顯示：TNM分期、組織學(xué)分級、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER表達(dá)情況、PR表達(dá)情況和RBM3mRNA表達(dá)情況為浸潤性乳腺癌患者無瘤生存時(shí)間的影響因素。進(jìn)一步將TNM分期、組織學(xué)分級、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER表達(dá)情況、PR表達(dá)情況和RBM3mRNA表達(dá)情況納入Cox多因素分析，結(jié)果顯示：TNM分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和RBM3mRNA表達(dá)情況是浸潤性乳腺癌患者無瘤生存時(shí)間的獨(dú)立影響因素（P＜0.05）。（表2）

表2 浸潤性乳腺癌患者無瘤生存時(shí)間影響因素的因素分析

3 討論

RBM3是一種冷休克蛋白，然而關(guān)于其作用機(jī)制的研究鮮有報(bào)道[9]。有研究顯示，RBM3可能參與DNA的完整性和DNA修復(fù)過程，且在其中發(fā)揮重要作用[10]。Kang等[11]研究表明，RBM3在低分化細(xì)胞中表達(dá)水平較低，且與Ki-67的表達(dá)有關(guān)。Ki-67是公認(rèn)的細(xì)胞增殖標(biāo)志物，因此，RBM3可能與細(xì)胞增殖有關(guān)。體外研究證實(shí)，RBM3參與細(xì)胞凋亡和腫瘤細(xì)胞增殖過程[12-13]。此外，在缺氧條件下，RBM3參與血管內(nèi)皮生長因子調(diào)節(jié)和血管生成[14]。RBM3在正常組織中表達(dá)水平較低，但在多數(shù)腫瘤組織中高表達(dá)[15-17]。已有研究發(fā)現(xiàn)，RBM3表達(dá)上調(diào)與卵巢癌[18]、前列腺癌[16]、膀胱癌[17]和結(jié)直腸癌[19]患者的預(yù)后有關(guān)。但關(guān)于RBM3在乳腺癌組織中的表達(dá)及其與患者預(yù)后的關(guān)系尚未見報(bào)道。

本研究通過實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法檢測浸潤性乳腺癌患者乳腺癌組織和癌旁組織中RBM3mRNA的表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)浸潤性乳腺癌組織中RBM3mRNA的相對表達(dá)量明顯高于癌旁組織（P＜0.01），表明RBM3mRNA與浸潤性乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。本研究對RBM3mRNA與浸潤性乳腺癌患者臨床特征的關(guān)系進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)RBM3mRNA表達(dá)可能與浸潤性乳腺癌患者的TNM分期、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、ER、PR和HER2有關(guān)，但與患者的年齡和腫瘤直徑無關(guān)，進(jìn)一步驗(yàn)證了RBM3mRNA參與浸潤性乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展。本研究通過分析RBM3mRNA與浸潤性乳腺癌患者無瘤生存的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)RBM3mRNA高表達(dá)組浸潤性乳腺癌患者的無瘤生存情況優(yōu)于RBM3mRNA低表達(dá)組，提示RBM3mRNA表達(dá)水平可能與浸潤性乳腺癌患者的預(yù)后有關(guān)。為此，本研究采用Cox單因素及多因素分析RBM3mRNA與浸潤性乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)TNM分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和RBM3mRNA表達(dá)情況是浸潤性乳腺癌患者無瘤生存時(shí)間的獨(dú)立影響因素，與劉堯等[20]結(jié)果一致。RBM3mRNA高表達(dá)的浸潤性乳腺癌患者預(yù)后較好，不僅為浸潤性乳腺癌的預(yù)后評估提供了參考，同時(shí)，也為靶向藥物研制提供了方向。

本研究仍存在以下不足之處：①樣本量偏小，結(jié)論說服力有限；②單中心研究；③僅探討了RBM3mRNA在浸潤性乳腺癌組織中的表達(dá)。下一步將進(jìn)行大樣本、多中心研究，檢測乳腺癌患者血清中RBM3mRNA的表達(dá)水平，以驗(yàn)證其是否與乳腺癌組織中RBM3mRNA同樣具有評估患者預(yù)后的價(jià)值。

綜上所述，高表達(dá)RBM3mRNA的浸潤性乳腺癌患者的預(yù)后較好，檢測浸潤性乳腺癌患者組織中RBM3mRNA相對表達(dá)量，可以評估患者預(yù)后。