王蕊

【摘要】目的： 探討新型精胺氧化酶（spermine oxidase，SMO）小分子抑制劑SI-4650對人神經膠質瘤U87MG細胞的影響。方法：采用MMT法對U87MG細胞的增殖情況進行分析，對U87MG細胞的自噬作用采用激光共聚焦顯微鏡（LSCM）進行分析。結果： 采用SI-4650對U87MG細胞進行處理2.4、48、72h后，實施MTT法進行分析表明，SI-4650對U87MG細胞增殖具有抑制作用。經處理后，采用LSCM對U87MG細胞進行檢測，觀察到未經SI-4650處理的U87MG細胞中GEP-LC3分布均勻，而經SI-4650處理的U87MG細胞中GEP-LC3呈點狀聚集。結論： SI-4650能夠抑制人神經膠質瘤U87MG細胞的增殖，其作用機制可能與誘導細胞自噬有關。

【關鍵詞】SMO抑制劑;神經膠質瘤細胞;細胞增殖;自噬

【中圖分類號】R174+.6

【文獻標識碼】A

【文章編號】2095-6851（2019）10-251-01

天然多胺（poly amine，PA）主要包含腐胺（Put）、精脒（Spd）等，為一種在真核細胞中廣泛存在且攜帶正電荷的小分子有機物[1]，可借助靜電作用與細胞中的遺傳物質等攜帶負電荷的大分子物質相作用，在細胞的增殖、分化等重要的生理過程中具有重要的作用[2～3]。有研究表明，若細胞內的多胺含量增加，能夠促進惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，但降低細胞中的多胺含量則能夠有效避免腫瘤細胞的增殖，現階段隨著研究的不斷加深，多胺代謝途徑已逐漸成為腫瘤防治的熱點[4]。為明確SI-4650對人神經膠質瘤U87MG細胞的增殖、自噬過程的影響作用，本研究對SI-4650進行研究，現報告如下。

1 材料

1.1 細胞株

人神經膠質瘤U87MG細胞（購于武漢中國培養(yǎng)典藏中心）。

1.2 試劑

SI-4650（購于荷蘭Specs生物特殊化合物公司）;二甲基亞砜、DMEM、BCA定量盒等均購自美國Gibco公司;血清、抗生素等購自于天津灝洋生物。

1.3 儀器

細胞超凈臺、恒溫細胞培養(yǎng)箱、低溫冰箱、低溫離心機、高效液相色譜分析儀、流式細胞儀等。

2 方法

2.1 SI-4650配置

精確稱量SI-4650粉劑并于DMSO中溶解，濃度為100mmol/L的儲存液，置于-20℃冰箱中保存;在使用前，使用DMEM培養(yǎng)基將上述液體稀釋至適宜濃度。

2.2MTT檢測細胞增殖

將濃度為5×106/L的處于對數生長期的U87MG細胞接種在96孔細胞培養(yǎng)板中，在細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1天后，采用不同濃度的SI-4650培養(yǎng)基培養(yǎng)，每個濃度藥物設置4個復孔;繼續(xù)培養(yǎng)2.4、48、72h后，在每孔中加入MTT試劑200μL，繼續(xù)在細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h，隨后棄去MTT試劑，加入150μL的DMSO，并使用酶標儀于490nm波長處檢測吸光度（A）。

2.3 激光共聚焦顯微鏡觀察細胞自噬小體形成

將5×107/L的人神經膠質瘤U87MG細胞懸液接種到專用的細胞培養(yǎng)皿中，繼續(xù)培養(yǎng)細胞的融合度約為80%時，按照轉染試劑標準說明書，對U87MG細胞進行處理2.4h后，采用不同濃度的SI-4650培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48h，隨后采用LSCM檢測細胞內自噬小體。

2.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 200統(tǒng)計學軟件統(tǒng)計分析，計量資料采用t檢驗，以（x±s）表示;當P<005時，差異有統(tǒng)計學意義。

3 結果

31 SI-4650對U87MG細胞增殖的抑制作用

采用SI-4650對U87MG細胞進行處理2.4、48、72h后，實施MTT法進行分析表明，SI-4650對U87MG細胞增殖具有抑制作用。結果見圖1。

32 SI-4650誘導U87MG細胞自噬

經處理后，采用LSCM對U87MG細胞進行檢測，觀察到未經SI-4650處理的U87MG細胞中GEP-LC3分布均勻，而經SI-4650處理的U87MG細胞中GEP-LC3呈點狀聚集。則說明SI-4650可誘導U87MG細胞的自噬作用，促進GEP-LC3融合蛋白向自噬小體聚集。

4 討論

SMO為促進多胺類物質分解的關鍵作用酶之一，其在細胞內的合成水平能夠引起多胺多謝紊亂以及包含腫瘤等多種疾病的發(fā)生[5]。因此，隨著研究的加深SMO成為腫瘤防治的關鍵性靶點之一。本研究結果表明，采用SI-4650對U87MG細胞進行處理2.4、48、72h后，實施MTT法進行分析表明，SI-4650對U87MG細胞增殖具有抑制作用。經處理后，采用LSCM對U87MG細胞進行檢測，觀察到未經SI-4650處理的U87MG細胞中GEP-LC3分布均勻，而經SI-4650處理的U87MG細胞中GEP-LC3呈點狀聚集。

綜上所述，SI-4650能夠抑制人神經膠質瘤U87MG細胞的增殖，其作用機制可能與誘導細胞自噬有關。

參考文獻：

[1] 劉春霞，黃璐璐，閆辰，等. GLI1抑制劑FL18對膠質母細胞瘤的抑制作用及其機制[J]. 藥學學報，2018，53（07）：1.11.3-1.1.2.1

[2] 周游，曹春雨，王艷林. 基于多胺轉運系統(tǒng)的靶向抗腫瘤藥物研究進展[J]. 生命的化學，2018，38（04）：543-550

[3] 李建明，丁勁松. 基于多胺轉運系統(tǒng)的抗腫瘤藥物研究進展[J]. 生物技術通報，2017，33（05）：34-39

[4] 易星，莫遠亮，姜冬梅，等. 多胺的生物學功能及其調控機制[J]. 動物營養(yǎng)學報，2014，26（02）：348-352

[5] 劉英杰，王玉霞，李騫，等. 一種萘酰亞胺-多胺綴合物對人肝癌HepG2細胞的殺傷作用[J]. 中國藥學雜志，2016，51（03）：207-2.1.2