慕佳冶，朱昆，王穎，汪旭，趙亞男，李忻※

（1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院藥學(xué)部，長春 130033；2.長春市中心醫(yī)院制劑室，長春 130024；3.吉林省食品藥品檢驗所，長春 130033）

丹敏停膠囊為院內(nèi)制劑，處方由丹參、蒼術(shù)、蟬蛻、荊芥穗、白鮮皮、生地黃、地膚子等中藥制備而成，其性狀為淡棕色粉末，味淡，微苦，具有活血解毒、養(yǎng)燥濕健脾、祛濕止癢之功效，臨床用于治療急慢性蕁麻疹及過敏性皮膚病。丹參為該方劑中的君藥，丹參酮ⅡA為丹參的主要有效成分，具有抗炎抑菌、清除自由基、抗氧化及改善肝功能等多種藥理作用[1-4]。本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對丹敏停膠囊中丹參酮ⅡA的含量進(jìn)行測定，通過建立丹參酮ⅡA含量測定方法，為控制該產(chǎn)品質(zhì)量提供試驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2010AHT高效液相色譜儀（日本島津公司）；KQ3200E型超聲波處理器（昆山超聲儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

丹敏停膠囊（批號 2017022、2017023、20170024，長春市中心醫(yī)院制劑室）；丹參酮ⅡA（批號110766-201721，中國食品藥品檢定研究院）；甲醇為色譜純；其他所用試劑均為分析純；水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[5-6]

色譜柱：WondaSil C1（85m，4.6 mm 250 mm）；流動相：甲醇-水（80∶20）；檢測波長：270 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：25 ℃。

2.2 對照品溶液的制備

2.3 供試品溶液的制備

稱取適量丹敏停膠囊內(nèi)容物，研磨成細(xì)粉末，用3號篩濾過后，精密稱取樣品1 g，置入500 mL容量瓶中，加入95%乙醇定容至50mL，密閉，稱重，超聲波振蕩20min后，取出放冷，再對其稱重，用95%乙醇溶液彌補(bǔ)溶液耗損，振蕩搖勻，濾過溶液，即得供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液的制備

按處方中藥材比例，取除丹參外的其他藥材，按工藝流程制備成不含丹參的陰性成品，按照“2.3”項下方法制成不含丹參酮ⅡA的陰性樣品溶液。

2.5 專屬性試驗

采用“2.1”項下色譜條件，分別取對照品溶液、陰性樣品溶液以及樣品溶液，分別進(jìn)樣10L，得相關(guān)HPLC色譜圖。研究結(jié)果表明（圖1～3），丹參酮ⅡA出峰時間約16.75 min，在此時間段，陰性樣品溶液未見明顯雜質(zhì)峰干擾，即丹敏停膠囊組方中的其他成分在該檢測條件下對丹參酮ⅡA含量測定不產(chǎn)生影響，專屬性較強(qiáng)。

圖1 丹參酮ⅡA對照品液相色譜圖Fig.1 Liquid chromatography of tanshinoneⅡA reference substance

圖2 供試品液相色譜圖Fig.2 Liquid chromatogram of the test sample

圖3 陰性樣品液相色譜圖Fig.3 Liquid chromatogram of negative sample

2.6 線性范圍的考察

精密稱取適量丹參酮ⅡA對照品，用95%乙醇配制成0.0442mg/mL的溶液，分別精密吸取2、6、10、14、18、22L，注入液相色譜儀，測定丹參酮ⅡA的色譜峰面積，將進(jìn)樣量作為橫坐標(biāo)、峰面積積分值作為縱坐標(biāo)繪圖，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程：y=7 106x 3 852.3（r=0.999 1），丹參酮ⅡA 進(jìn)樣量在 0.017 1～0.274 2g丹參酮ⅡA色譜峰面積與進(jìn)樣量呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗

2.8 穩(wěn)定性試驗

取同一批供試品（批號2017022），按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別于室溫下放置 0、2、4、8、12、24 h，按照“2.1”項下色譜條件測定丹參酮ⅡA色譜峰面積，以考察試驗環(huán)境下供試品溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果，RSD為0.46%（n=6），表明供試品溶液在該環(huán)境下24 h內(nèi)的穩(wěn)定性達(dá)到測定要求。

2.9 重復(fù)性試驗

取丹敏停膠囊6份（批號2017022），按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按照“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜峰面積，計算得出RSD為0.47%，表明該方法測量結(jié)果的偏差小，重復(fù)性達(dá)到測定要求。

2.10 加樣回收率試驗

取已知含量樣品（批號2017022）6份，分別加入丹參酮ⅡA對照品，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按照“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，測定樣品中丹參酮ⅡA的含量，計算加樣回收率，結(jié)果，平均回收率為99.87%，RSD為0.57%，表明該方法對于樣品的處理方法準(zhǔn)確可行。

2.11 丹敏停膠囊中丹參酮ⅡA的含量測定

按照“2.3”項下方法，取3個批次（批號2017022、2017023、2017024）的丹敏停膠囊樣品，制備3批供試品溶液，按照“2.1”項下色譜條件，分別對3個批次的供試品溶液丹參酮ⅡA含量進(jìn)行測定。結(jié)果，3個批次丹敏停膠囊中丹參酮ⅡA的含量分別為 0.295 6、0.294 4、0.298 1 mg/g。

3 結(jié)論與討論

本研究在選擇樣品提取溶劑過程中，分別以甲醇、95%乙醇為提取溶劑，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按照“2.1”項下色譜條件比較2種試驗條件下丹參酮ⅡA峰面積與稱樣量的比值大小，以選取最佳提取溶劑。研究結(jié)果表明，甲醇及95%乙醇的提取率相似，故選取毒性較小的95%乙醇作為供試品的提取溶劑。在檢測時間方面，本研究將數(shù)據(jù)采集時間設(shè)定為120min，在30min后再無其他色譜峰出現(xiàn)，故以30min作為該研究檢測時間，優(yōu)化檢測條件。

綜上所述，通過該方法建立的丹敏停膠囊中丹參酮ⅡA的含量測定方法，可以為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供可靠的試驗依據(jù)，方法簡便、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。