李玉鑫

【摘要】 目的 研究不同方法檢測布魯氏菌抗體的效果。方法 選取C地區(qū)規(guī)模養(yǎng)殖戶與散養(yǎng)農(nóng)戶提供的1500份牛、羊血清作為研究對象， 通過虎紅平板凝集試驗（RBPT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗 （ELISA） 與試管凝集試驗（SAT）三種檢測方法檢測布魯氏菌抗體， 比較三種檢測方法的檢測效果。結(jié)果 在1500份牛、羊血清樣品中， RBPT方法檢測陽性9份， 陽性檢出率為0.60%， ELISA方法檢測陽性7份， 陽性檢出率為0.47%， SAT方法的檢測陽性8份， 陽性檢出率為0.53%。SAT方法檢測陽性8份， 有1份是RBPT檢測出的陽性血清樣品。ELISA方法檢測陽性7份， 有2份是RBPT檢測出的陽性血清樣品。ELISA、SAT檢測結(jié)果的符合率為87.50%， RBPT、ELISA檢測結(jié)果的符合率為77.78%， RBPT、SAT檢測結(jié)果的符合率為88.89%。結(jié)論 ELISA與SAT檢測方法的敏感性較高， 所以在實踐中應選用RBPT方法初步篩查布魯氏菌抗體， 并利用ELISA與SAT檢測方法確診， 進而為牛羊布魯氏菌抗體防控奠定堅實基礎。

【關(guān)鍵詞】 布魯氏菌抗體;檢測方法;對比評價

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.07.114

布魯氏菌病是人畜共患傳染疾病， 主要的誘發(fā)原因就是布魯氏菌， 臨床特點以公畜睪丸炎、母畜流產(chǎn)、生殖器官與胎膜發(fā)炎為主要表現(xiàn)[1]。此疾病的發(fā)生與傳播會嚴重危害畜牧行業(yè)的生產(chǎn)與人類身體健康。在布魯氏菌病體內(nèi)與體外診斷方面， 已經(jīng)研發(fā)出多種診斷方式， 而最常使用的就是RBPT、ELISA、SAT等[2]。為深入探討不同方法檢測布魯氏菌抗體的效果， 以下采用RBPT、ELISA、SAT三種檢測方法對布魯氏菌抗體進行檢測， 以期進一步推進相關(guān)工作的開展。

1 材料與方法

1. 1 材料 ①試驗使用試劑。布魯氏菌SAT抗原、RBPT抗原與陽性血清， 同時準備ELISA抗體檢測試劑盒。②血清來源：2015年10月～2017年10月C地區(qū)規(guī)模養(yǎng)殖戶與散養(yǎng)農(nóng)戶提供的牛、羊血清1500份。

1. 2 方法 對1500份牛、羊血清實施SAT與RBPT檢測， 并開展ELISA檢測， 根據(jù)試劑盒說明書中的具體要求實施。

1. 3 觀察指標 對比分析RBPT、ELISA、SAT三種不同方法檢測布魯氏菌抗體的效果。

2 結(jié)果

2. 1 布魯氏菌陽性檢出率 在1500份牛、羊血清樣品中， RBPT方法檢測陽性9份， 陽性檢出率為0.60%， ELISA方法檢測陽性7份， 陽性檢出率為0.47%， SAT方法的檢測陽性8份，?陽性檢出率為0.53%。

2. 2 不同檢測方法符合率 在1500份牛、羊血清樣品中， RBPT方法檢測陽性9份。SAT方法檢測陽性8份， 有1份是RBPT檢測出的陽性血清樣品。ELISA方法檢測陽性7份， 有2份是RBPT檢測出的陽性血清樣品。ELISA、SAT檢測結(jié)果的符合率為87.50%， RBPT、ELISA檢測結(jié)果的符合率為77.78%， RBPT、SAT檢測結(jié)果的符合率為88.89%。

3 討論

布魯氏菌病主要是因布魯氏桿菌誘發(fā)， 屬于人畜共患傳染性疾病， 也是二類傳染病[3]。在畜牧養(yǎng)殖中， 牛、羊都是易感染布魯氏菌病的動物。如果牛羊群中感染并傳播布魯氏菌疾病， 將帶來不可估量的經(jīng)濟損失， 且公共衛(wèi)生問題也將逐漸突顯出來[4]。為此， 牛、羊布魯氏菌病也成為各級別獸醫(yī)結(jié)構(gòu)必須檢驗項目內(nèi)容。在實際檢測的過程中， 應選用諸多方法互相配合， 以保證診斷結(jié)果的有效性與準確性?，F(xiàn)階段， 國內(nèi)布魯氏菌病最常使用的檢疫技術(shù)就是血清學的診斷， 所以有必要針對各種檢測方法應用于布魯氏菌抗體檢測中的效果展開系統(tǒng)化研究與分析， 有效規(guī)避假陽性與假陰性結(jié)果的發(fā)生， 提高檢測準確性[5]。

目前階段， 國內(nèi)大多數(shù)地區(qū)都將RBPT作為初篩的首選方法， 而SAT則發(fā)揮配套輔助作用， 對牛羊布魯氏菌病進行監(jiān)測與監(jiān)控。長期以來， SAT始終都是診斷布魯氏菌病的常規(guī)性血清學手段， 若對此方法單獨使用， 很容易出現(xiàn)假陽性亦或是假陰性的情況， 且并非全部感染動物的抗體水平都具有診斷的意義， 誤診與漏診的幾率偏高。在以上試驗研究中， 針對1500份牛、羊血清布魯氏菌病的非免疫抗體實施必要的檢測， 特別是RBPT、ELISA、SAT檢測方式中， 具有較高敏感性的檢測方法就是ELISA， 且SAT檢測的敏感程度也超過RBPT。針對血清學試驗而言， 就是針對血清亦或是乳中所含有的布魯氏菌抗體進行有效的檢測。而在布魯氏菌病的血清學診斷中， 最常見的就是平板凝集試驗， 一般將其應用在初步篩查布魯氏菌病的普查過程中。但需要注意的是， 這種檢測方法很容易發(fā)生非特異性的凝集情況， 所以盡量不在基層獸醫(yī)檢測工作中應用這種檢測方法[6]?，F(xiàn)階段， RBPT已經(jīng)逐漸發(fā)展成布魯氏菌病普查的主要方式， 且實際的檢出幾率和平板凝集試驗大致相同， 但是要比SAT陽性檢出幾率低。通常情況下， RBPT是不能有效替代平板凝集試驗和SAT的， 而是要合理選用綜合診斷的方式， 并在布魯氏菌病的早期診斷當中加以運用。而SAT則始終被應用于布魯氏菌病診斷中， 被當做常規(guī)性的血清學方式， 且國內(nèi)家畜布魯氏菌病的檢測標準就是以SAT為基礎所形成的復核診斷方式。若對SAT進行單獨使用， 還會發(fā)生假陰性反應亦或是假陽性的反應[7]。除此之外， 并非全部被感染的動物抗體水平都具備診斷意義， 所以直接增加了誤診以及漏診的幾率。對于ELISA的檢測方法而言， 也是近年來最常使用的血清學檢測方式， 具有較高的敏感性以及特異性， 也是國際貿(mào)易領(lǐng)域的指定試驗。在實驗過程中發(fā)現(xiàn)， ELISA與SAT相比， 其敏感性要更高， 高出10～1000倍左右， 所以也是診斷布魯氏菌病的重要方式。在具體操作方面， RBPT的操作相對便捷， 且使用時間不長。而SAT獲取結(jié)果的時間相對較長， 且需要實驗工作人員用肉眼觀察并對結(jié)果進行判定， 所以主觀性十分顯著。另外， 對于ELISA的檢測方法而言， 可以對布魯氏菌病進行有效地監(jiān)測， 實際操作也相對便捷， 具有較高的敏感性， 能夠獲得準確性較高的結(jié)果， 具有一定的可行性。為此， 在具體檢測時有必要將RBPT、ELISA與SAT三種不同的檢測方法相互結(jié)合， 以保證優(yōu)劣互補， 提高檢測結(jié)果的準確性。優(yōu)先選擇使用RBPT開展篩選工作， 針對疑似陽性的樣品使用ELISA與SAT檢測方法進行復檢， 最終準確地確診， 實現(xiàn)防控并進化布魯氏菌病的目標。只有這樣， 才能夠確保準確診斷布魯氏菌病， 及早發(fā)現(xiàn)并結(jié)合實際情況科學合理地采取防治措施， 以免牛羊養(yǎng)殖遭受嚴重的經(jīng)濟損失， 制約養(yǎng)殖業(yè)的進步， 不斷提高牛羊生長質(zhì)量， 促進牛羊養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

參考文獻

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[5] 羅成群. 不同方法檢測布魯氏菌抗體的比較分析. 中國畜牧獸醫(yī)文摘， 2017（11）：57.

[6] 樊生平， 齊守軍， 李連平， 等. 布魯氏菌病疫苗S2株免疫成年綿羊的抗體消長規(guī)律試驗. 中國動物檢疫， 2017（2）：88-90.

[7] 楊秀芹， 宋旭婷， 徐雪， 等. 綿羊群體中不同布魯氏菌病血清學診斷方法比較研究. 東北農(nóng)業(yè)大學學報， 2016（3）：11-16.

[收稿日期：2018-09-29]