楊金華，張慧青，穆林

長治醫(yī)學院附屬和平醫(yī)院1呼吸內科，2普外科，山西 長治0460000

肺癌是臨床中常見的惡性腫瘤，近年來肺癌的發(fā)病率和病死率日趨增加，已成為中國發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤[1]。肺癌中最常見的類型為非小細胞肺癌。肺癌的發(fā)病機制較為復雜，研究表明，長期吸煙與肺癌的發(fā)生密切相關，其他因素還包括大氣污染、職業(yè)暴露等外部誘因[2]。核糖體40S小亞基S6蛋白激酶（p70 ribosomal S6 protein kinase，p70S6K）屬于雷帕霉素靶蛋白（mechanistic target of rapamycin kinase，MTOR）下游的直接作用底物，可影響蛋白質合成及細胞的增殖和凋亡，促進腫瘤細胞的浸潤和轉移[3]。胃泌素釋放肽（gastrin releasing peptide，GRP）屬于胃腸激素，研究發(fā)現(xiàn)，GRP可通過自分泌或細胞間的相互作用，參與腫瘤的生長和轉移[4]。此外，免疫系統(tǒng)紊亂是惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要環(huán)節(jié)，趨化因子是免疫系統(tǒng)的關鍵組成部分，CXC趨化因子受體2（C-X-C motif chemokine receptor 2，CXCR2）作為趨化因子家族成員，具有較強的粒細胞趨化和促血管生成作用[5]。本研究分析了非小細胞肺癌組織中p70S6K、胃泌素釋放肽前體（pro-gastrin releasing peptide，ProGRP）和CXCR2的表達情況，旨在探討其在非小細胞肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014年1月至2017年9月長治醫(yī)學院附屬和平醫(yī)院收治的非小細胞肺癌患者的臨床資料。納入標準：①依據(jù)《內科學》[6]中的診斷標準，經(jīng)術后病理學檢查確診為非小細胞肺癌；②具有石蠟標本；③術前未接受過放療、化療；④臨床資料完整。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②合并原發(fā)性腦、腎、心、肝等器官功能障礙；③合并自身免疫性疾病。根據(jù)納入和排除標準，本研究共納入180例非小細胞肺癌患者。其中，男103例，女77例；年齡45～78歲，平均（62.74±8.30）歲；低分化68例，中高分化112例；有淋巴結轉移57例，無淋巴結轉移123例。收集患者的非小細胞肺癌組織標本及對應的癌旁正常組織（距腫瘤組織5 cm以上）標本各180例。

1.2 主要試劑

兔抗人p70S6K、ProGRP單克隆抗體均購自美國Santa Cruz公司，兔抗人CXCR2單克隆抗體購自美國Cell Signaling Technology公司，即用型鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶（streptavidin-peroxidase，SP）試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 免疫組織化學染色

取非小細胞肺癌組織標本和癌旁正常組織標本，采用免疫組織化學SP法檢測組織標本中p70S6K、ProGRP、CXCR2的表達情況。所有標本均使用4%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，使用SP試劑盒染色，檸檬酸緩沖液煮沸修復，DAB顯色，蘇木素復染。以已知的陽性切片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）作為陰性對照。

1.4 觀察指標及判定標準

比較非小細胞肺癌組織和癌旁正常組織中p70S6K、ProGRP、CXCR2的陽性表達率，分析非小細胞肺癌組織中p70S6K、ProGRP、CXCR2陽性表達情況與非小細胞肺癌患者臨床特征的關系，以及非小細胞肺癌組織中p70S6K、ProGRP、CXCR2表達的相關性。

由經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)師在高倍鏡（×400）下隨機選取5個視野進行閱片。陽性細胞所占百分比評分：陽性細胞＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，＞50%為3分。染色強度評分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項評分相加，＞2分為陽性，≤2分為陰性[7]。

1.5 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 18.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Spearman相關分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 p70 S 6 K、ProGRP、CXCR 2陽性表達率的比較

非小細胞肺癌組織中p70S6K、ProGRP、CXCR2的陽性表達率均明顯高于癌旁正常組織，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 非小細胞肺癌組織和癌旁正常組織中 p70 S 6 K、ProGRP、CXCR 2陽性表達情況的比較[ n（%）]

2.2 不同臨床特征非小細胞肺癌患者非小細胞肺癌組織中 p70 S 6 K、ProGRP、CXCR 2的陽性表達情況

不同性別、年齡的非小細胞肺癌患者非小細胞肺癌組織中p70S6K、ProGRP、CXCR2的陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。腫瘤直徑＞3 cm、低分化、有淋巴結轉移的非小細胞肺癌患者非小細胞肺癌組織中p70S6K、ProGRP、CXCR2的陽性表達率均明顯高于腫瘤直徑≤3 cm、中高分化和無淋巴結轉移的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2p70S6K=16.001、9.938、16.637，P＜0.01；χ2ProGRP=15.262、11.521、15.019，P ＜ 0.01；χ2CXCR2=13.469、23.337、10.124，P＜0.01）。（表2）

表2 不同臨床特征非小細胞肺癌患者非小細胞肺癌組織中 p70 S 6 K、ProGRP、CXCR 2的陽性表達情況（ n=180）

2.3 非小細胞肺癌組織中 p70 S 6 K、ProGRP、CX-CR 2的表達與非小細胞肺癌患者臨床特征的相關性

非小細胞肺癌組織中p70S6K、ProGRP、CXCR2的表達與非小細胞肺癌患者的腫瘤直徑、分化程度、淋巴結轉移情況均呈顯著正相關（P＜0.01）。（表3）

表3 非小細胞肺癌組織中 p70 S 6 K、ProGRP、CXCR 2的表達與非小細胞肺癌患者臨床特征的相關性

2.4 非小細胞肺癌組織中 p70 S 6 K、ProGRP、CX-CR 2表達的相關性

Spearman相關分析結果顯示，非小細胞肺癌組織中p70S6K與ProGRP、CXCR2的表達均呈顯著正相關（r=0.387、0.418，P＜0.01），ProGRP與CXCR2的表達呈顯著正相關（r=0.495，P＜0.01）。

3 討論

p70S6K屬于AGC蛋白激酶家族（包括蛋白激酶A、蛋白激酶G、蛋白激酶C），是MTOR下游的直接作用底物，而其磷酸化可啟動蛋白翻譯過程。研究發(fā)現(xiàn)，部分腫瘤患者中MTOR信號通路調控失常，如MTOR通路相關受體組成性激活、真核細胞起始因子4E及p70S6K的過度表達及擴增等[8]。研究發(fā)現(xiàn)，在結腸癌、宮頸癌等惡性腫瘤中，p70S6K均呈高表達且其在結腸癌和宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用[9-10]。許浩然等[11]研究指出，高表達的p70S6K可作為非小細胞肺癌患者早期診斷和預后預測的標志物，并認為可通過調控p70S6K信號通路為肺癌患者提供新的治療途徑。本研究結果顯示，非小細胞肺癌組織中p70S6K的陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，腫瘤直徑＞3 cm、低分化、有淋巴結轉移的非小細胞肺癌患者非小細胞肺癌組織中p70S6K的陽性表達率均明顯高于腫瘤直徑≤3 cm、中高分化和無淋巴結轉移的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。其原因可能是p70S6K通路激活對蛋白質合成、細胞增殖和凋亡具有重要影響，可促進血管生成，減少腫瘤細胞凋亡，促進腫瘤的浸潤、轉移，參與腫瘤的形成和發(fā)展。

GRP屬于蛙皮素類似物，最初于1978年由McDonald等從豬的非竇部胃上皮細胞中分離出來，之后發(fā)現(xiàn)在正常人腦、胃腸神經(jīng)纖維、胎兒肺神經(jīng)內也有GRP的部分表達。研究發(fā)現(xiàn)，小細胞肺癌細胞株和腫瘤組織分泌的GRP儲存在細胞質中的高爾基體內，并可在適當條件下分泌到組織中，與細胞膜上的GRP受體結合，促進腫瘤細胞增殖，由此推測在非小細胞肺癌的診斷中，GRP可能是一種十分具有前景的標志物[12]。然而GRP在血漿中的半衰期僅為2 min，時間較短，檢測較為困難，ProGRP是GRP的前體結構，已有研究證實，ProGRP可代表GRP的水平和基因表達情況[13]。本研究結果顯示，非小細胞肺癌組織中ProGRP的陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，腫瘤直徑＞3 cm、低分化、有淋巴結轉移的非小細胞肺癌患者非小細胞肺癌組織中ProGRP的陽性表達率均明顯高于腫瘤直徑≤3 cm、中高分化和無淋巴結轉移的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。提示ProGRP在非小細胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮關鍵作用。

趨化因子作為小分子蛋白質，是細胞因子中一大類特異性趨化白細胞物質，可通過與其受體結合參與多種病理生理過程。CXCR2屬于谷氨酸-亮氨酸-精氨酸（ELR）陽性的CXC類趨化因子的公共受體，可與多種ELR陽性的CXC類趨化因子結合，參與腫瘤進展[14-15]。但目前有關CXCR2在非小細胞肺癌患者中表達情況的報道仍較少。胡劍等[7]研究發(fā)現(xiàn)，CXCR2表達情況與肺癌患者的臨床分期、分化程度和血管浸潤情況均有關。本研究結果顯示，非小細胞肺癌組織中CXCR2的陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，腫瘤直徑＞3 cm、低分化、有淋巴結轉移的非小細胞肺癌患者非小細胞肺癌組織中CXCR2的陽性表達率均明顯高于腫瘤直徑≤3 cm、中高分化和無淋巴結轉移的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。其原因可能是CXCR2對腫瘤血管的生成具有促進作用，其表達升高可加速腫瘤血管生成，導致腫瘤的惡性程度升高。

本研究結果還表明，非小細胞肺癌組織中p70S6K與ProGRP、CXCR2的表達均呈顯著正相關（P＜0.01），ProGRP與CXCR2的表達呈顯著正相關（P＜0.01）。提示三者在非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮協(xié)同促癌作用，但其具體作用機制仍需進一步深入研究。

綜上所述，非小細胞肺癌組織中p70S6K、ProGRP、CXCR2的陽性表達率均較高，三者可能共同參與非小細胞肺癌的發(fā)生和發(fā)展。