曾赟，王昕煒，尹必儉，沈政潔

1江蘇省腫瘤醫(yī)院/江蘇省腫瘤防治研究所/南京醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，南京210009

2張家港市第一人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，江蘇 張家港 2156000

肺癌是威脅人們健康的最主要的惡性腫瘤之一[1]。隨著靶向治療的推廣應(yīng)用，晚期非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者的生活質(zhì)量有所提高，生存時(shí)間有所延長(zhǎng)，但5年生存率仍然較低。因此深入探討NSCLC的轉(zhuǎn)移和侵襲機(jī)制，尋找新的治療方法對(duì)進(jìn)一步提高患者的生存率至關(guān)重要。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展，利用分子生物學(xué)指標(biāo)評(píng)估預(yù)后，指導(dǎo)綜合治療已成為提高惡性腫瘤治療效果的發(fā)展方向[2]。uroplakin 1A是尿路上皮不對(duì)稱單位膜的蛋白組成之一，最先在膀胱癌中被發(fā)現(xiàn)且表達(dá)上調(diào)，與膀胱癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[3]。抑癌基因表達(dá)不足或癌基因過(guò)度表達(dá)是腫瘤發(fā)生發(fā)展的決定因素，穿膜蛋白PETA-3/CD151基因作為新發(fā)現(xiàn)的癌基因，在多種腫瘤中處于高表達(dá)狀態(tài)[4]。但uroplakin 1A和CD151在NSCLC中的研究較少，因此本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)uroplakin 1A和CD151在NSCLC中的表達(dá)，并結(jié)合臨床特征進(jìn)行分析，以期為NSCLC診療提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月至2012年12月于江蘇省腫瘤醫(yī)院診治的156例NSCLC患者和66例肺良性病變患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)影像學(xué)檢查和/或病理檢查確診為NSCLC、肺良性病變；②均經(jīng)手術(shù)切除治療，且NSCLC組織、肺良性病變組織保存完好；③病歷資料和隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有其他惡性腫瘤；②有術(shù)前放化療史。納入的156例NSCLC患者（NSCLC組）中，男80例，女76例；年齡為35～86歲，平均年齡為（64.81±9.08）歲；按照世界衛(wèi)生組織（WHO）肺癌病理組織分型[5]：鱗癌72例，腺癌62例，其他22例；低分化54例，中分化60例，高分化42例；根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟（Union for International Cancer Control，UICC）第7版肺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[6]：Ⅰ～Ⅱ期85例，Ⅲ～Ⅳ期71例。納入的66例肺良性病變患者（肺良性病變組）中，男36例，女30例；年齡為34～86歲，平均年齡為（64.74±9.14）歲；肺結(jié)核40例，炎性假瘤26例。

1.2 抗體和試劑

鼠抗人CD151和兔抗人uroplakin 1A單克隆抗體均購(gòu)于美國(guó)Novusbio公司。氯化鈉、磷酸氫二鈉等試劑均購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司。二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）試劑盒、蘇木素及檸檬酸鈉抗原修復(fù)液均購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 免疫組織化學(xué)檢測(cè)及結(jié)果判定

將石蠟組織進(jìn)行切片，放入40%的乙醇中，40℃水浴4 min，展開(kāi)，置于60℃烘箱中烤片。采用二甲苯脫蠟20 min，梯度乙醇水化。采用枸櫞酸鈉抗原熱修復(fù)法對(duì)CD151和uroplakin 1A進(jìn)行修復(fù)，加入3%的過(guò)氧化氫，室溫放置10 min，阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗，加入5%的羊血孵育30 min，除去封閉液，加入一抗，置于4℃冰箱中過(guò)夜，次日取出使用PBS沖洗，滴加DAB進(jìn)行顯色，然后自來(lái)水沖洗終止染色，采用蘇木素復(fù)染1～2 min，使用梯度乙醇脫水，二甲苯透明，然后封片，顯微鏡下觀察。結(jié)果判定：以細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性染色。根據(jù)染色程度進(jìn)行評(píng)分：未染色為0分，淺黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例進(jìn)行評(píng)分：0分，陽(yáng)性細(xì)胞比例為0；1分，陽(yáng)性細(xì)胞比例為1%～25%；2分，陽(yáng)性細(xì)胞比例為26%～50%；3分，陽(yáng)性細(xì)胞比例為51%～75%；4分，陽(yáng)性細(xì)胞比例為76%～100%。每個(gè)切片選取5個(gè)視野，取平均值。每張切片的最后得分為兩項(xiàng)評(píng)分之和，＞6分為陽(yáng)性[3]。

1.4 隨訪

所有患者均有門(mén)診復(fù)診和電話隨訪資料，本研究的隨訪終點(diǎn)為隨訪5年或者患者死亡。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組組織中CD151和uroplakin 1 A陽(yáng)性表達(dá)率的比較

NSCLC組織中的CD151、uroplakin 1A的陽(yáng)性表達(dá)率分別為60.9%（95/156）、73.7%（115/156），均明顯高于肺良性病變組織中的19.7%（13/66）、15.2%（10/66），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=31.514、64.660，P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征的NSCLC患者的NSCLC組織中CD151及uroplakin 1 A陽(yáng)性表達(dá)率的比較

不同年齡、性別的NSCLC患者的NSCLC組織中CD151和uroplakin 1A的陽(yáng)性表達(dá)率比較，不同腫瘤直徑的NSCLC患者的NSCLC組織中CD151陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不同組織分化程度、病理學(xué)分型的NSCLC患者的NSCLC組織中CD151和uroplakin 1A的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=38.765、32.756，P＜0.01；χ2=19.284、21.972，P＜0.01）；有吸煙史、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC患者的NSCLC組織中CD151陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于無(wú)吸煙史、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=52.096、15.020、46.167，P＜0.01）；有吸煙史、腫瘤直徑＞2 cm、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC患者的NSCLC組織中uroplakin 1A陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于無(wú)吸煙史、腫瘤直徑≤2 cm、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=65.123、27.702、15.162，52.244，P＜0.01）。（表1）

表1 不同臨床特征的NSCLC患者的NSCLC組織中CD151和uroplakin 1 A的陽(yáng)性表達(dá)情況（ n=156）

2.3 CD151和uroplakin 1 A表達(dá)的相關(guān)性及其與NSCLC患者生存情況的關(guān)系

CD151陽(yáng)性表達(dá)和uroplakin 1A陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.297，P＜0.01）（表 2）。CD151和 uroplakin 1A同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)、同時(shí)陰性表達(dá)的NSCLC患者的 5年生存率分別為 0（0/80）、19.2%（5/26），CD151陰性、uroplakin 1A陽(yáng)性或者CD151陽(yáng)性、uroplakin 1A陰性的NSCLC患者的5年生存率為12.0%（6/50）。CD151和uroplakin 1A同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)的NSCLC患者的5年生存率低于CD151和uroplakin 1A同時(shí)陰性表達(dá)的患者及CD151陰性、uroplakin 1A陽(yáng)性或者CD151陽(yáng)性、uroplakin 1A陰性的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；CD151和uroplakin 1A同時(shí)陰性表達(dá)的NSCLC患者的5年生存率與CD151陰性、uroplakin 1A陽(yáng)性或者CD151陽(yáng)性、uroplakin 1A陰性患者的5年生存率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（圖1）。

表2 CD151和uroplakin 1 A表達(dá)情況的對(duì)照

圖1 不同CD151及uroplakin1 A表達(dá)患者的 5年生存曲線

3 結(jié)論

肺癌是全世界最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，每年約130萬(wàn)人死于肺癌[7]。目前NSCLC的主要治療方法為手術(shù)、放療、化療和免疫治療，但患者5年生存率較低，深入研究NSCLC發(fā)病機(jī)制，尋求新的靶點(diǎn)成為目前研究的熱點(diǎn)。

uroplakin 1A最先被發(fā)現(xiàn)于尿路上皮組織中，與膀胱癌的分化程度高度相關(guān)，即膀胱癌分化程度越高uroplakin 1A表達(dá)越高[3]，可能是與其異常高表達(dá)后通過(guò)某種特定信號(hào)通路或靶基因參與膀胱癌的增殖分化有關(guān)。而Kong等[8]發(fā)現(xiàn)，食管癌組織中uroplakin 1A表達(dá)下調(diào)會(huì)促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移和發(fā)展，其認(rèn)為uroplakin 1A在食管癌中的作用可能與淋巴結(jié)浸潤(rùn)存在一定的關(guān)系。而uroplakin 1A在NSCLC中的表達(dá)尚無(wú)報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，NSCLC組織中的CD151、uroplakin 1A的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于肺良性病變組織（P＜0.01），且均與吸煙情況、TNM分期、組織分化程度、病理學(xué)分型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)（P＜0.01），提示CD151、uroplakin 1A參與NSCLC的發(fā)生發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，CD151在多種腫瘤中表達(dá)上調(diào)，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系，其可以作為腫瘤預(yù)后的新指標(biāo)[9-10]。楊純等[11]發(fā)現(xiàn)，CD151在NSCLC組織中的表達(dá)水平明顯高于肺良性病變組織，與本研究結(jié)果一致。周維[12]發(fā)現(xiàn)，CD151陽(yáng)性表達(dá)和腫瘤的臨床分期及病理學(xué)分級(jí)密切相關(guān)。同時(shí)，本研究結(jié)果顯示，CD151及uroplakin 1A同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)的患者80例，同時(shí)陰性表達(dá)的患者26例，CD151陽(yáng)性表達(dá)和uroplakin 1A陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.297，P＜0.01）。CD151和uroplakin 1A同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)的NSCLC患者的5年生存率為0，同時(shí)陰性表達(dá)患者的5年生存率為19.2%，CD151陰性、uroplakin 1A陽(yáng)性或者CD151陽(yáng)性、uroplakin 1A陰性的NSCLC患者的5年生存率為12.0%；CD151和uroplakin 1A同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)的NSCLC患者的5年生存率低于上述另兩種情況（P＜0.05），提示CD151及uroplakin 1A可能是影響NSCLC患者預(yù)后的重要指標(biāo)。

綜上所述，CD151及uroplakin 1A可能成為評(píng)估NSCLC患者預(yù)后的指標(biāo)，CD151及uroplakin 1A聯(lián)合檢測(cè)對(duì)NSCLC患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及病理分期等的評(píng)估具有重要的意義，有利于指導(dǎo)多學(xué)科綜合治療。