曾赟，王昕煒，尹必儉，沈政潔

1江蘇省腫瘤醫(yī)院/江蘇省腫瘤防治研究所/南京醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤內科，南京210009

2張家港市第一人民醫(yī)院腫瘤內科，江蘇 張家港 2156000

肺癌是威脅人們健康的最主要的惡性腫瘤之一[1]。隨著靶向治療的推廣應用，晚期非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者的生活質量有所提高，生存時間有所延長，但5年生存率仍然較低。因此深入探討NSCLC的轉移和侵襲機制，尋找新的治療方法對進一步提高患者的生存率至關重要。隨著分子生物學和細胞生物學的發(fā)展，利用分子生物學指標評估預后，指導綜合治療已成為提高惡性腫瘤治療效果的發(fā)展方向[2]。uroplakin 1A是尿路上皮不對稱單位膜的蛋白組成之一，最先在膀胱癌中被發(fā)現且表達上調，與膀胱癌的轉移密切相關[3]。抑癌基因表達不足或癌基因過度表達是腫瘤發(fā)生發(fā)展的決定因素，穿膜蛋白PETA-3/CD151基因作為新發(fā)現的癌基因，在多種腫瘤中處于高表達狀態(tài)[4]。但uroplakin 1A和CD151在NSCLC中的研究較少，因此本研究通過免疫組織化學法檢測uroplakin 1A和CD151在NSCLC中的表達，并結合臨床特征進行分析，以期為NSCLC診療提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月至2012年12月于江蘇省腫瘤醫(yī)院診治的156例NSCLC患者和66例肺良性病變患者。納入標準：①經影像學檢查和/或病理檢查確診為NSCLC、肺良性病變；②均經手術切除治療，且NSCLC組織、肺良性病變組織保存完好；③病歷資料和隨訪資料完整。排除標準：①伴有其他惡性腫瘤；②有術前放化療史。納入的156例NSCLC患者（NSCLC組）中，男80例，女76例；年齡為35～86歲，平均年齡為（64.81±9.08）歲；按照世界衛(wèi)生組織（WHO）肺癌病理組織分型[5]：鱗癌72例，腺癌62例，其他22例；低分化54例，中分化60例，高分化42例；根據國際抗癌聯(lián)盟（Union for International Cancer Control，UICC）第7版肺癌TNM分期標準[6]：Ⅰ～Ⅱ期85例，Ⅲ～Ⅳ期71例。納入的66例肺良性病變患者（肺良性病變組）中，男36例，女30例；年齡為34～86歲，平均年齡為（64.74±9.14）歲；肺結核40例，炎性假瘤26例。

1.2 抗體和試劑

鼠抗人CD151和兔抗人uroplakin 1A單克隆抗體均購于美國Novusbio公司。氯化鈉、磷酸氫二鈉等試劑均購于北京博奧森生物技術有限公司。二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）試劑盒、蘇木素及檸檬酸鈉抗原修復液均購于武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 免疫組織化學檢測及結果判定

將石蠟組織進行切片，放入40%的乙醇中，40℃水浴4 min，展開，置于60℃烘箱中烤片。采用二甲苯脫蠟20 min，梯度乙醇水化。采用枸櫞酸鈉抗原熱修復法對CD151和uroplakin 1A進行修復，加入3%的過氧化氫，室溫放置10 min，阻斷內源性過氧化物酶的活性。磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗，加入5%的羊血孵育30 min，除去封閉液，加入一抗，置于4℃冰箱中過夜，次日取出使用PBS沖洗，滴加DAB進行顯色，然后自來水沖洗終止染色，采用蘇木素復染1～2 min，使用梯度乙醇脫水，二甲苯透明，然后封片，顯微鏡下觀察。結果判定：以細胞內出現棕黃色顆粒為陽性染色。根據染色程度進行評分：未染色為0分，淺黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。根據陽性細胞比例進行評分：0分，陽性細胞比例為0；1分，陽性細胞比例為1%～25%；2分，陽性細胞比例為26%～50%；3分，陽性細胞比例為51%～75%；4分，陽性細胞比例為76%～100%。每個切片選取5個視野，取平均值。每張切片的最后得分為兩項評分之和，＞6分為陽性[3]。

1.4 隨訪

所有患者均有門診復診和電話隨訪資料，本研究的隨訪終點為隨訪5年或者患者死亡。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件分析數據。計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組組織中CD151和uroplakin 1 A陽性表達率的比較

NSCLC組織中的CD151、uroplakin 1A的陽性表達率分別為60.9%（95/156）、73.7%（115/156），均明顯高于肺良性病變組織中的19.7%（13/66）、15.2%（10/66），差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=31.514、64.660，P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征的NSCLC患者的NSCLC組織中CD151及uroplakin 1 A陽性表達率的比較

不同年齡、性別的NSCLC患者的NSCLC組織中CD151和uroplakin 1A的陽性表達率比較，不同腫瘤直徑的NSCLC患者的NSCLC組織中CD151陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；不同組織分化程度、病理學分型的NSCLC患者的NSCLC組織中CD151和uroplakin 1A的陽性表達率比較，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=38.765、32.756，P＜0.01；χ2=19.284、21.972，P＜0.01）；有吸煙史、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移的NSCLC患者的NSCLC組織中CD151陽性表達率均明顯高于無吸煙史、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=52.096、15.020、46.167，P＜0.01）；有吸煙史、腫瘤直徑＞2 cm、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移的NSCLC患者的NSCLC組織中uroplakin 1A陽性表達率均明顯高于無吸煙史、腫瘤直徑≤2 cm、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=65.123、27.702、15.162，52.244，P＜0.01）。（表1）

表1 不同臨床特征的NSCLC患者的NSCLC組織中CD151和uroplakin 1 A的陽性表達情況（ n=156）

2.3 CD151和uroplakin 1 A表達的相關性及其與NSCLC患者生存情況的關系

CD151陽性表達和uroplakin 1A陽性表達呈正相關（r=0.297，P＜0.01）（表 2）。CD151和 uroplakin 1A同時陽性表達、同時陰性表達的NSCLC患者的 5年生存率分別為 0（0/80）、19.2%（5/26），CD151陰性、uroplakin 1A陽性或者CD151陽性、uroplakin 1A陰性的NSCLC患者的5年生存率為12.0%（6/50）。CD151和uroplakin 1A同時陽性表達的NSCLC患者的5年生存率低于CD151和uroplakin 1A同時陰性表達的患者及CD151陰性、uroplakin 1A陽性或者CD151陽性、uroplakin 1A陰性的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；CD151和uroplakin 1A同時陰性表達的NSCLC患者的5年生存率與CD151陰性、uroplakin 1A陽性或者CD151陽性、uroplakin 1A陰性患者的5年生存率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）（圖1）。

表2 CD151和uroplakin 1 A表達情況的對照

圖1 不同CD151及uroplakin1 A表達患者的 5年生存曲線

3 結論

肺癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，每年約130萬人死于肺癌[7]。目前NSCLC的主要治療方法為手術、放療、化療和免疫治療，但患者5年生存率較低，深入研究NSCLC發(fā)病機制，尋求新的靶點成為目前研究的熱點。

uroplakin 1A最先被發(fā)現于尿路上皮組織中，與膀胱癌的分化程度高度相關，即膀胱癌分化程度越高uroplakin 1A表達越高[3]，可能是與其異常高表達后通過某種特定信號通路或靶基因參與膀胱癌的增殖分化有關。而Kong等[8]發(fā)現，食管癌組織中uroplakin 1A表達下調會促進腫瘤的轉移和發(fā)展，其認為uroplakin 1A在食管癌中的作用可能與淋巴結浸潤存在一定的關系。而uroplakin 1A在NSCLC中的表達尚無報道。本研究結果顯示，NSCLC組織中的CD151、uroplakin 1A的陽性表達率均明顯高于肺良性病變組織（P＜0.01），且均與吸煙情況、TNM分期、組織分化程度、病理學分型及淋巴結轉移情況有關（P＜0.01），提示CD151、uroplakin 1A參與NSCLC的發(fā)生發(fā)展。研究發(fā)現，CD151在多種腫瘤中表達上調，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及轉移有著密切的關系，其可以作為腫瘤預后的新指標[9-10]。楊純等[11]發(fā)現，CD151在NSCLC組織中的表達水平明顯高于肺良性病變組織，與本研究結果一致。周維[12]發(fā)現，CD151陽性表達和腫瘤的臨床分期及病理學分級密切相關。同時，本研究結果顯示，CD151及uroplakin 1A同時陽性表達的患者80例，同時陰性表達的患者26例，CD151陽性表達和uroplakin 1A陽性表達呈正相關（r=0.297，P＜0.01）。CD151和uroplakin 1A同時陽性表達的NSCLC患者的5年生存率為0，同時陰性表達患者的5年生存率為19.2%，CD151陰性、uroplakin 1A陽性或者CD151陽性、uroplakin 1A陰性的NSCLC患者的5年生存率為12.0%；CD151和uroplakin 1A同時陽性表達的NSCLC患者的5年生存率低于上述另兩種情況（P＜0.05），提示CD151及uroplakin 1A可能是影響NSCLC患者預后的重要指標。

綜上所述，CD151及uroplakin 1A可能成為評估NSCLC患者預后的指標，CD151及uroplakin 1A聯(lián)合檢測對NSCLC患者的淋巴結轉移情況及病理分期等的評估具有重要的意義，有利于指導多學科綜合治療。