張佳悅，趙本正，李政澤，王 媛，宋天嬌，孫 鵬*,劉 劍*

(1.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院，延邊大學(xué)附屬醫(yī)院 藥學(xué)部，吉林 延吉133000；2.吉林大學(xué)第二醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春130041；3.吉林大學(xué)附屬中學(xué)，吉林 長(zhǎng)春130021；4.吉林大學(xué)護(hù)理學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春130021)

阿特拉津(atrazine,ATR)又名莠去津，化學(xué)名：2-氯-4-二乙胺基-6-異丙胺基-1,3,5-三嗪，是一種低毒性農(nóng)用除草劑，廣泛應(yīng)用于玉米、高粱、甘蔗、小麥等農(nóng)作物種植[1-3]。由于良好的水溶性、土壤流動(dòng)性以及較長(zhǎng)的半衰期，ATR常常導(dǎo)致地表飲用水源污染并超出美國(guó)環(huán)保局(EPA)設(shè)定的最大污染限制(3/109 ppb)[4,5]。歐盟于2003年全面禁用ATR[6]，但在美國(guó)中西部及我國(guó)部分地區(qū)ATR仍見(jiàn)使用。研究表明，ATR可對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)等多個(gè)系統(tǒng)產(chǎn)生生物學(xué)作用，并參與肥胖癥與癌癥的發(fā)生[7,8]。近年來(lái)，由于內(nèi)分泌干擾物(Endocrine disruptive chemicals,EDCs)的研究熱度升高，ATR作為一種常見(jiàn)的內(nèi)分泌干擾物再次引起人們的關(guān)注，尤其它對(duì)生物體神經(jīng)內(nèi)分泌功能的影響引起了人們的重視。本研究通過(guò)測(cè)定ATR處理后大鼠血清中多巴胺(Dopamine,DA)、5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、內(nèi)啡肽(endorphin,EP)、皮質(zhì)醇(cortisol,COR)和去甲腎上腺素(Norepinephrine,NA)水平的變化，明確ATR對(duì)大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌功能的影響，為EDCs作用及機(jī)制的研究提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

4周齡Wistar雌性大鼠28只，購(gòu)于吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(動(dòng)物合格證號(hào)：20160014675)，飼養(yǎng)于恒定溫度(22℃-25℃)、恒定濕度(40%-50%)環(huán)境中，標(biāo)準(zhǔn)飼料和水供動(dòng)物自由食用。ATR(純度98.99%)購(gòu)于美國(guó)Sigma公司，以橄欖油溶解，4℃保存?zhèn)溆谩７派涿庖叻治鲈噭┖匈?gòu)自濰坊三維生物工程集團(tuán)有限公司。

1.2 動(dòng)物分組和處理

28只Wistar大鼠隨機(jī)分為4組(對(duì)照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組)，每組7只。分別給予0 mg·kg-1(等體積橄欖油)、5 mg·kg-1、25 mg·kg-1和125 mg·kg-1ATR灌胃，1次/d，連續(xù)給藥28 d，觀察大鼠一般狀態(tài)、飲食及活動(dòng)情況，每4 d測(cè)量各組大鼠體質(zhì)量，根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整給藥劑量。

1.3 放射免疫法測(cè)定大鼠血清中神經(jīng)遞質(zhì)水平

第29天于麻醉狀態(tài)下腹主動(dòng)脈取血，3000 r·min-1離心15 min，收集大鼠血清。根據(jù)放射免疫法試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，測(cè)定各組大鼠血清中多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)、內(nèi)啡肽(EP)、皮質(zhì)醇(COR)和去甲腎上腺素(NA)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

與對(duì)照組比較，中劑量(25 mg·kg-1)ATR組大鼠血清中DA水平顯著降低(P<0.05)，而低、高劑量(5 mg·kg-1、125 mg·kg-1)ATR組大鼠血清中DA水平無(wú)明顯改變。低劑量(5 mg·kg-1)ATR組大鼠血清中EP水平顯著降低(P<0.01)，而中、高劑量(25 mg·kg-1、125 mg·kg-1)ATR組大鼠血清中EP水平無(wú)明顯改變。高劑量(125 mg·kg-1)ATR組大鼠血清中COR水平顯著降低(P<0.05)，而低、中劑量(5 mg·kg-1、25 mg·kg-1)ATR組大鼠血清中COR水平無(wú)明顯改變。各劑量組大鼠血清中5-HT及NA水平均無(wú)明顯改變。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清中DA、5-HT、EP、COR、NA水平

3 討論

內(nèi)分泌干擾物(Endocrine disruptive chemicals,EDCs)是一類能夠干擾內(nèi)源性激素信號(hào)通路的外源性介質(zhì)的總稱[7]。EDCs有著不同的結(jié)構(gòu)，存在于我們生活中的各個(gè)方面如：塑化劑、藥品和農(nóng)藥等[9-11]。EDCs可與不同的激素受體結(jié)合，發(fā)揮類似于激素的作用，或者阻斷激素與受體結(jié)合而發(fā)揮抑制作用，此外EDCs還可通過(guò)干擾激素的合成、轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝和清除而降低激素水平[12]。由于ATR等農(nóng)藥的廣泛使用，EDCs對(duì)許多野生動(dòng)物如無(wú)脊椎動(dòng)物、爬行動(dòng)物、魚(yú)、鳥(niǎo)以及哺乳類動(dòng)物等均產(chǎn)生了影響[13]。EDCs對(duì)人類的影響與性別、年齡、飲食及工作相關(guān)，而年齡是其中最敏感的因素，研究發(fā)現(xiàn)與成年人相比，胎兒與兒童更容易受到EDCs的影響[9,14,15]。

多巴胺(DA)、內(nèi)啡肽(EP)及皮質(zhì)醇(COR)是人體重要的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)控物質(zhì)，參與多種生理功能調(diào)控，且與情緒情感等的調(diào)控息息相關(guān)。如帕金森病(Parkinson’s disease,PD)的發(fā)生與紋狀體內(nèi)DA水平的降低及黑質(zhì)致密部(substantia nigra pars compacta,SNpc)和腹側(cè)被蓋區(qū)(ventral tegmental area,VTA)多巴胺神經(jīng)元的減少相關(guān)[16]。在外周，多巴胺因其升壓作用被作為抗休克藥物而廣泛使用。研究發(fā)現(xiàn)[17]，抑郁癥患者血清中EP含量降低，提示內(nèi)啡肽缺失可能與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展緊密相關(guān)。另有研究提出，在應(yīng)激時(shí)機(jī)體可通過(guò)促進(jìn)COR分泌而緩解負(fù)面情緒[18]。在本研究中，ATR作用后，大鼠血清中DA、EP及COR水平均顯著降低(P<0.05或P<0.01)，提示ATR或可通過(guò)降低DA、EP及COR水平，干擾機(jī)體的正常神經(jīng)內(nèi)分泌功能，致使機(jī)體神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂，增加諸如帕金森病、抑郁癥等神經(jīng)精神疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

傳統(tǒng)毒理學(xué)認(rèn)為“劑量決定毒性”，即有毒物質(zhì)的作用效果取決于其劑量大小，劑量越大則毒性越強(qiáng)。近期有學(xué)者提出，EDCs的作用特點(diǎn)呈非單純劑量-效應(yīng)關(guān)系，即EDCs作用的劑量與效應(yīng)之間并非呈單純的線性相關(guān)[19]。這一觀點(diǎn)的提出打破了傳統(tǒng)毒理學(xué)的量-效觀念，同時(shí)提示EDCs的安全劑量不能單純通過(guò)高劑量實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果推斷而出。我們的研究結(jié)果顯示，ATR處理后，中劑量(25 mg·kg-1)組大鼠血清中DA水平降低(P<0.05)，而高劑量(125 mg·kg-1)組大鼠血清中DA水平無(wú)明顯變化(P>0.05)；低劑量(5 mg·kg-1)組大鼠血清中EP水平顯著降低(P<0.01)，而中、高劑量(25 mg·kg-1、125 mg·kg-1)組大鼠血清中EP水平無(wú)明顯改變(P>0.05)。這些結(jié)果提示ATR濃度的大小與大鼠血清中DA及EP水平的降低呈非單純劑-效關(guān)系。

綜上所述，ATR可以降低Wistar大鼠血清中多巴胺(DA)、內(nèi)啡肽(EP)、皮質(zhì)醇(COR)水平，且這一作用呈非單純劑量-效應(yīng)關(guān)系。提示ATR或可通過(guò)這一作用干擾大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌功能，從而增加如帕金森病、抑郁癥等神經(jīng)精神疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。有必要進(jìn)一步探究ATR對(duì)機(jī)體神經(jīng)內(nèi)分泌功能的影響，為其作用規(guī)律的總結(jié)及作用機(jī)制的闡明提供科學(xué)依據(jù)。