黃雅婷

（南平市糧油質(zhì)量監(jiān)測(cè)站，福建南平 353000）

稻谷的脂肪在貯藏期間，特別是高溫高濕環(huán)境下，容易發(fā)生氧化和水解，產(chǎn)生游離脂肪酸和不良?xì)馕?，從而影響其貯藏、加工和食用品質(zhì)[1]。脂肪酸值的變化反映了稻谷品質(zhì)劣變程度，在國(guó)標(biāo)的稻谷的儲(chǔ)存判定規(guī)則中，將脂肪酸值作為一項(xiàng)宜存指標(biāo)，規(guī)定了稻谷的脂肪酸安全值為≤30 mg KOH/100 g干基，因而快速、準(zhǔn)確測(cè)定脂肪酸值，對(duì)于推陳出新、輪換儲(chǔ)備、減少糧食損失和評(píng)定糧食品質(zhì)都有重要的意義[2]。

目前，國(guó)內(nèi)使用較多的稻谷脂肪酸值檢測(cè)方法是 GB/T 20569—2006和 GB/T 29405—2012等國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中所規(guī)定的方法，在糧食行業(yè)的實(shí)際檢測(cè)工作中，受終點(diǎn)判定、環(huán)境條件（溫度、光線）、二氧化碳、操作過(guò)程不規(guī)范等因素的影響，脂肪酸值檢測(cè)結(jié)果的差異依然較大[2-5]。此外，現(xiàn)有的檢測(cè)方法由于操作過(guò)程較繁雜、使用的玻璃器具較多、采用人工滴定和讀數(shù)、整個(gè)過(guò)程檢驗(yàn)人員的工作量和勞動(dòng)強(qiáng)度都非常大，因此效率較低[6]。近年來(lái)，隨著自動(dòng)檢測(cè)技術(shù)的不斷進(jìn)步，出現(xiàn)了一系列的脂肪酸自動(dòng)檢測(cè)儀器，解決了滴定環(huán)節(jié)存在的滴定終點(diǎn)難判定的問(wèn)題，但是針對(duì)整個(gè)脂肪酸值檢測(cè)過(guò)程其他環(huán)節(jié)的簡(jiǎn)化研究較少[7]。為盡可能提高檢測(cè)結(jié)果一致性和工作效率，降低檢驗(yàn)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度，對(duì)國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法中提取、過(guò)濾、轉(zhuǎn)移環(huán)節(jié)進(jìn)行改進(jìn)，同時(shí)對(duì)改進(jìn)法測(cè)定稻谷脂肪酸值的可行性進(jìn)行了研究分析。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料

不同品種、生產(chǎn)年限的稻谷，來(lái)自某儲(chǔ)備糧公司倉(cāng)庫(kù)。

1.1.2 試劑

氫氧化鉀，AR；無(wú)水乙醇，AR；95%乙醇，AR；酚酞，AR；不含二氧化碳的蒸餾水；亞油酸，分析純。

1.2 主要儀器與設(shè)備

CLS.JLG-1型檢驗(yàn)礱谷機(jī)，國(guó)家糧食儲(chǔ)備局成都糧食儲(chǔ)藏科學(xué)研究所產(chǎn)品；3100型錘式旋風(fēng)磨，瑞典波通公司產(chǎn)品；KS-1型電動(dòng)振蕩器，江蘇金壇恒豐儀器制造有限公司產(chǎn)品；JJ200型天平，常熟市雙杰測(cè)試儀器廠產(chǎn)品；BSA224S-CW型萬(wàn)分之一天平，德國(guó)賽多利斯科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；DHG-9070型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司產(chǎn)品；Prospenser瓶口分液器，賽多利斯（上海）貿(mào)易有限公司產(chǎn)品；TD6型離心機(jī)，長(zhǎng)沙湘銳離心機(jī)有限公司產(chǎn)品；1～10 mL可調(diào)移液器，Thermo Scientific公司產(chǎn)品。

1.3 方法

1.3.1 改進(jìn)法測(cè)定

試樣制備與國(guó)標(biāo)法相同，稱取制備好的試樣約10 g，精確到0.01 g，置于100 mL圓底螺口離心管中，用瓶口分液器準(zhǔn)確加入50.0 mL無(wú)水乙醇，旋緊離心管，并橫向置于振蕩器中，按標(biāo)準(zhǔn)方法中的規(guī)定振搖10 min，振蕩頻率為100 r/min。振蕩結(jié)束后取下離心管，立即用離心機(jī)以轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心2 min。取出離心管，用可調(diào)移液器準(zhǔn)確移取離心后的提取液25.0 mL于一次性透明塑料滴定杯中，用瓶口分液器準(zhǔn)確加入50 mL不含二氧化碳的蒸餾水，滴加3～4滴酚酞指示劑，用氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至微紅色，30 s不消褪為止，記下耗用的氫氧化鉀體積，計(jì)算出樣品的脂肪酸值，同時(shí)做空白試驗(yàn)。

1.3.2 相關(guān)指標(biāo)測(cè)定

試樣水分含量按照GB 5009.3—2016中的直接干燥法進(jìn)行測(cè)定，稻谷脂肪酸值按照GB/T 20569—2006測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 準(zhǔn)確度分析

分別用1.3改進(jìn)法和現(xiàn)行國(guó)標(biāo)法測(cè)定6個(gè)稻谷樣品的脂肪酸值，每個(gè)樣品進(jìn)行2次平行檢測(cè)，并進(jìn)行對(duì)照。

改進(jìn)法與國(guó)標(biāo)法脂肪酸值檢測(cè)結(jié)果對(duì)比見(jiàn)表1。

表1 改進(jìn)法與國(guó)標(biāo)法脂肪酸值檢測(cè)結(jié)果對(duì)比/mg KOH·（100 g）-1干基

由表1可以看出，6對(duì)檢測(cè)結(jié)果絕對(duì)值之差均小于國(guó)標(biāo)規(guī)定的重復(fù)性臨界值2 mg KOH/100 g。用配對(duì)試驗(yàn)法進(jìn)行顯著性分析，可得改進(jìn)法與國(guó)標(biāo)法測(cè)定脂肪酸值時(shí)=0.27＜t0.05(10)=2.228 ，故 p＞0.05，說(shuō)明這2種方法的測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性差異。

2.2 精密度分析

以脂肪酸高低不同的2個(gè)稻谷樣品為試樣，用1.3改進(jìn)法進(jìn)行6次平行檢測(cè)。

改進(jìn)法脂肪酸值檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性分析見(jiàn)表2。

結(jié)果表明，6次平行檢測(cè)結(jié)果的極差最大為1.58 mg KOH/100 g，小于國(guó)標(biāo)規(guī)定的重復(fù)性臨界值2 mg KOH/100 g，說(shuō)明改進(jìn)法檢測(cè)結(jié)果符合國(guó)標(biāo)中規(guī)定的重復(fù)性要求。稻谷脂肪酸值6次平行測(cè)定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.40～0.56，變異系數(shù)在2.19～2.27，說(shuō)明該方法具有較高的精密度。

表2 改進(jìn)法脂肪酸值檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性分析/mg KOH·（100 g）-1干基

2.3 回收率分析

采用已知脂肪酸值的稻谷（樣品1）為基質(zhì)，分別添加不同量的亞油酸乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，并按公式換算為理論脂肪酸添加值，用改進(jìn)法進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算方法全過(guò)程的回收率。

改進(jìn)法脂肪酸值檢測(cè)結(jié)果回收率分析見(jiàn)表3。

結(jié)果表明：①改進(jìn)法測(cè)定稻谷脂肪酸值回收率為95%～111%，完全符合方法學(xué)方面對(duì)回收率一般應(yīng)達(dá)到80%～120%的要求[8]。②平均回收率為102%，回收率標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.32%，變異系數(shù)為5.22%，其平均值的95%置信區(qū)間（隨機(jī)誤差的不確定度）為±3.38，μ=102%±3.38%，表明改進(jìn)法測(cè)定稻谷回收率波動(dòng)較小。

2.4 改進(jìn)法的優(yōu)點(diǎn)

2.4.1 移液速度更快和提取效率更高

國(guó)標(biāo)法采用移液管移取無(wú)水乙醇和提取液，采用量筒加無(wú)CO2蒸餾水，耗時(shí)較長(zhǎng)、移液工作效率較低；改進(jìn)法采用瓶口分液器加液，可調(diào)移液器移取提取液，耗時(shí)短、移液工作效率提高2倍以上。

國(guó)標(biāo)法使用三角瓶，一般的康氏振蕩器一次只能振蕩8個(gè)三角瓶，提取效率較低。改進(jìn)法使用離心管，根據(jù)儀器處理能力的不同，每批次處理量不同，試驗(yàn)1次可振蕩10支離心管，提取工作效率提高1.2倍以上。

2.4.2 提取液分離效率提高

國(guó)標(biāo)法使用濾紙過(guò)濾，需先靜置1～2 min，再棄去最初幾滴濾液，每批次過(guò)濾8份樣品，一般要5 min左右，且折疊濾紙需要花費(fèi)一定時(shí)間，提取液分離工作效率低。改進(jìn)法使用離心機(jī)分離樣品和提取液，根據(jù)儀器處理能力的不同，每批次處理量不同，試驗(yàn)每批次可離心8支離心管，耗時(shí)2 min，分離工作效率提高2倍以上。

2.4.3 器皿的使用與人員勞動(dòng)強(qiáng)度減小

國(guó)標(biāo)法試驗(yàn)過(guò)程中要折疊濾紙，試驗(yàn)結(jié)束后需要清洗移液管、250 mL和150 mL三角瓶，整個(gè)過(guò)程使用和清洗的器皿較多，操作繁瑣、人員勞動(dòng)強(qiáng)度大。改進(jìn)法因采用離心方式分離樣液，采用瓶口分液器取液，全過(guò)程只需清洗150 mL三角瓶，操作簡(jiǎn)便、效率高、節(jié)省人力。

表3 改進(jìn)法脂肪酸值檢測(cè)結(jié)果回收率分析

2.4.4 檢測(cè)時(shí)間縮短，受環(huán)境影響小

用國(guó)標(biāo)法測(cè)定稻谷，檢測(cè)時(shí)間在40 min以上。改進(jìn)法除稱樣、提取和滴定時(shí)間與國(guó)標(biāo)方法一致外，離心、移液、加水時(shí)間均縮短，整個(gè)測(cè)定過(guò)程檢測(cè)時(shí)間在20 min左右，檢測(cè)時(shí)間縮短約50%，全過(guò)程（含器皿清洗）工作效率提高2倍以上。

國(guó)標(biāo)法過(guò)濾、取液、加水等環(huán)節(jié)均暴露在空氣中，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，受周圍環(huán)境中二氧化碳的影響較大。改進(jìn)法由于采用離心方式分離樣液，檢測(cè)時(shí)間短、受二氧化碳的影響減小、測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確。

3 結(jié)論

改進(jìn)法通過(guò)對(duì)稻谷脂肪酸值檢測(cè)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法在提取、過(guò)濾、轉(zhuǎn)移方面進(jìn)行了改進(jìn)，克服了國(guó)標(biāo)法中操作過(guò)程復(fù)雜繁瑣的缺點(diǎn)，節(jié)時(shí)省工、測(cè)定快速。特別適用于開(kāi)展大批量樣品檢測(cè)的各種檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)和檢驗(yàn)人員相對(duì)較少、收購(gòu)任務(wù)重的基層糧庫(kù)。

改進(jìn)法測(cè)得結(jié)果與國(guó)標(biāo)法相比較，具有良好的準(zhǔn)確度、精密度和回收率，測(cè)定結(jié)果可行且可靠。若將該方法的手工滴定由電位滴定法所取代，實(shí)現(xiàn)儀器自動(dòng)化操作，其意義和價(jià)值必將更大。