王玉杰,李 偉,王林元,湯如瑩,瞿 研,賀 成,張建軍

(北京中醫(yī)藥大學(xué),北京 100029)

阿薩伊(A?aí)為棕櫚科植物阿薩伊棕櫚樹(shù)(EuterpeoleraceaeMart.)的果實(shí)[1],廣泛分布于亞馬遜流域的巴西、秘魯、哥倫比亞等地。阿薩伊凍干粉是阿薩伊經(jīng)挑選、清洗、去除果核、磨碎、冷凍干燥而制成[2]。其含有脂肪油(含量占50%以上)、甾醇、花青素、原花青素等物質(zhì)[2-6]?；ㄇ嗨鼐哂锌寡趸?、清除自由基、調(diào)節(jié)脂代謝、抗腫瘤等生物活性[7-11],其抗氧化能力比VE高50倍,比VC高20倍[7]。目前自然界已知的花青素有23種,在植物體中常見(jiàn)的有6種,最常見(jiàn)的為矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷[12-14]。除藍(lán)莓、桑葚等少數(shù)植物含量較高外,其他植物中含量普遍偏低,且由于其化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定,高溫易降解[15-18],難以富集和測(cè)定。目前,測(cè)定阿薩伊中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的文獻(xiàn)較少,因此有必要對(duì)其進(jìn)行研究。

矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷易溶于水和醇類(lèi)溶劑,不溶于乙醚、二氯甲烷等有機(jī)溶劑,遇熱不穩(wěn)定。其結(jié)構(gòu)母核是由兩個(gè)苯環(huán)通過(guò)中間三碳鏈相互連接而成C6-C3-C6結(jié)構(gòu),并與1個(gè)葡萄糖通過(guò)糖苷鍵結(jié)合形成花青素苷。矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷在中性或弱酸性(pH4～7)條件下,呈中性醌式堿,顯紫色;在強(qiáng)酸條件(pH1～3)下,呈烊陽(yáng)離子形式存在,顯紅色[19-22],見(jiàn)圖1。矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷對(duì)照品為鹽酸鹽,分子式C21H21ClO11,分子量484.84;矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷分子式為C21H21O11,分子量449.38,故矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量=矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷(鹽酸鹽)含量/1.079。

圖1 矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷在不同pH溶液中的構(gòu)型Fig.1 Conformations of cyanidin-3-O-glucoside in different pH solutions

測(cè)定阿薩伊中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的文獻(xiàn)較少,且缺少HPLC-紫外檢測(cè)器的測(cè)定方法。采用HPLC-MS法測(cè)定的有如下文獻(xiàn),Garzón等人采用0.01%鹽酸甲醇提取阿薩伊鮮果,測(cè)得矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量為0.57 mg/g[23];Schauss A G等人采用丙酮-水-乙酸溶液(70∶29.5∶0.5)提取阿薩伊凍干粉,測(cè)得矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量為1.17 mg/g[24]。另有采用HPLC-紫外檢測(cè)器測(cè)定黑豆皮和紫背天葵中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的含量的文獻(xiàn)[25-26]。本實(shí)驗(yàn)研究采用HPLC-紫外檢測(cè)器,分別以水和1%鹽酸水溶液為溶劑,使矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷分別呈中性醌式堿構(gòu)型(pH4～7)和烊陽(yáng)離子構(gòu)型(pH1～3)構(gòu)型,探討構(gòu)型對(duì)矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量測(cè)定的影響,建立了阿薩伊凍干粉中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的含量測(cè)定方法。2013年衛(wèi)生部批準(zhǔn)阿薩伊作為新資源食品使用[27],目前,國(guó)內(nèi)已有阿薩伊與淡竹葉、雪蓮等中藥配伍的市售產(chǎn)品,本文對(duì)阿薩伊的質(zhì)量控制進(jìn)行研究可以為相關(guān)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷(鹽酸鹽),分子式C21H21ClO11,分子量484.84 上海詩(shī)丹德生物技術(shù)有限公司,批號(hào):7084-24-4,質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%;阿薩伊凍干粉 蒙維(上海)貿(mào)易有限公司,批號(hào):20170228、20170307、20170315;乙腈 色譜純,Fisher公司;超純水 實(shí)驗(yàn)室自制;磷酸、鹽酸 分析純,北京化工廠。

Agilent 1100型高效液相色譜儀 美國(guó)安捷倫公司；G1311A四元梯度泵、G1322A在線脫氣機(jī)、G1316A柱溫箱、G1315D DAD檢測(cè)器、手動(dòng)進(jìn)樣器和化學(xué)工作站 杭州賽析科技有限公司;UV-2450型紫外分光光度計(jì) 日本島津公司;Model 9860A/D型超聲波清洗機(jī) 天津科貝爾光電技術(shù)有限公司;BT 1250D電子天平 Sartorious公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件的考察

1.2.1.1 兩種構(gòu)型對(duì)最大吸收波長(zhǎng)的影響 精密稱(chēng)取矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷對(duì)照品,分別以水和1%鹽酸水溶液為溶劑配制對(duì)照品溶液,使其分別呈中性醌式堿和烊陽(yáng)離子構(gòu)型,濃度約為0.01 mg/mL,以分光光度計(jì)在190～800 nm范圍進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描,考察矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷兩種構(gòu)型對(duì)最大吸收波長(zhǎng)的影響。

1.2.1.2 兩種構(gòu)型對(duì)測(cè)定波長(zhǎng)和色譜峰分離度的影響 精密稱(chēng)取矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷對(duì)照品,分別以水和1%鹽酸水溶液為溶劑配制對(duì)照品溶液,使其分別成中性醌式堿和烊陽(yáng)離子構(gòu)型,濃度約為0.01 mg/mL。

取阿薩伊凍干粉約0.6 g,精密稱(chēng)定,用濾紙包裹,各加入石油醚50 mL,超聲脫脂0.5 h,取出,揮去石油醚,精密加入水10 mL,稱(chēng)重,超聲提取1 h,冷卻至室溫,補(bǔ)足減失的重量,過(guò)濾,取續(xù)濾液作為中性醌式堿構(gòu)型的阿薩伊凍干粉供試品溶液。

取阿薩伊凍干粉約0.6 g,精密稱(chēng)定,置于錐形瓶中,精密加入1%鹽酸水溶液10 mL,稱(chēng)重,超聲提取1 h,冷卻至室溫,補(bǔ)足減失的重量,過(guò)濾,取續(xù)濾液作為烊陽(yáng)離子構(gòu)型的阿薩伊凍干粉供試品溶液。

色譜條件:色譜柱為DIKMA C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm);流動(dòng)相組成為乙腈-0.5%磷酸溶液(12∶88),流速1 mL/min[28],分別于最大吸收波長(zhǎng)270、520 nm測(cè)定。以色譜圖中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷色譜峰分離和基線噪音為指標(biāo),考察兩種構(gòu)型對(duì)矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷測(cè)定波長(zhǎng)和色譜峰分離度的影響。

1.2.2 供試品溶液制備方法的考察

1.2.2.1 兩種構(gòu)型對(duì)脫脂阿薩伊凍干粉中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷提取的影響 阿薩伊凍干粉含有50%以上的脂肪油,取阿薩伊凍干粉約0.6 g,精密稱(chēng)定,用濾紙包裹,各加入石油醚50 mL,超聲脫脂0.5 h,取出,揮去石油醚,分別精密加入80%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、水、1%鹽酸水溶液各10 mL,稱(chēng)重,超聲提取1 h,冷卻至室溫,補(bǔ)足減失的重量,作為供試品溶液。矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷對(duì)照品分別用與供試品相同溶劑溶解,使呈相同構(gòu)型,濃度約為0.01 mg/mL。按照“1.2.1.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,考察兩種構(gòu)型對(duì)脫脂阿薩伊提取矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的影響。

1.2.2.2 兩種構(gòu)型對(duì)未脫脂阿薩伊凍干粉中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷提取的影響 取阿薩伊凍干粉約0.6 g,分別精密加入80%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、水、1%鹽酸水溶液各10 mL,稱(chēng)重,超聲提取1 h,冷卻至室溫,補(bǔ)足減失的重量,作為供試品溶液。矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷對(duì)照品分別以供試品相同溶劑溶解,使呈相同構(gòu)型,濃度約為0.01 mg/mL。按照“1.2.1.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,考察兩種構(gòu)型對(duì)未脫脂阿薩伊提取矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的影響。

1.2.3 兩種構(gòu)型對(duì)紫外檢測(cè)器響應(yīng)因子和標(biāo)準(zhǔn)曲線的影響 精密稱(chēng)取矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷,加水1 mL溶解,再分別以水和1%鹽酸水溶液為溶劑稀釋,使其分別呈中性醌式堿和烊陽(yáng)離子構(gòu)型;制成每1 mL含矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷為0.002419、0.004838、0.009676、0.01935、0.03871、0.07741 mg/mL的對(duì)照品溶液,按照“1.2.1.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定兩種構(gòu)型矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷不同濃度的峰面積、響應(yīng)因子(儀器對(duì)單位濃度樣品的響應(yīng)值)和標(biāo)準(zhǔn)曲線,考察兩種構(gòu)型對(duì)紫外檢測(cè)器的響應(yīng)因子和標(biāo)準(zhǔn)曲線的影響。

1.2.4 兩種構(gòu)型對(duì)含量測(cè)定結(jié)果的影響 采用中性醌式堿構(gòu)型測(cè)定:取阿薩伊凍干粉約0.6 g,精密稱(chēng)定,用濾紙包裹,各加入石油醚50 mL,超聲0.5 h,取出,揮去石油醚,再精密加入水10 mL,稱(chēng)重,超聲提取1 h,冷卻至室溫,補(bǔ)足減失的重量,過(guò)濾,取續(xù)濾液作為矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷中性醌式堿構(gòu)型的供試品溶液。另取矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷對(duì)照品,加水溶解,濃度約為0.01 mg/mL,作為對(duì)照品溶液。

采用烊陽(yáng)離子構(gòu)型測(cè)定:取阿薩伊凍干粉約0.6 g,精密稱(chēng)定,置于錐形瓶中,精密加入1%鹽酸水溶液10 mL,稱(chēng)重,超聲提取1 h,冷卻至室溫,補(bǔ)足減失的重量,過(guò)濾,取續(xù)濾液作為矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷烊陽(yáng)離子構(gòu)型的供試品溶液。另取矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷對(duì)照品,加1%鹽酸水溶液溶解,濃度約為0.01 mg/mL,作為對(duì)照品溶液。

按照“1.2.1.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,考察兩種構(gòu)型對(duì)矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量測(cè)定結(jié)果的影響。

1.2.5 方法學(xué)考察

1.2.5.1 線性實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取對(duì)照品2.61 mg,加1%鹽酸水溶液制成矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量分別為0.002419、0.004838、0.009676、0.01935、0.03871、0.07741 mg/mL的供試品溶液。上機(jī),用液相色譜儀測(cè)定峰面積,以峰面積為縱坐標(biāo),以濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.5.2 精密度實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取阿薩伊凍干粉約0.6 g,精密加入1%鹽酸水溶液10 mL超聲提取1 h,濾液作為供試品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的峰面積。

1.2.5.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取“1.2.5.2”項(xiàng)下供試品溶液,分別于室溫放置0、6、12、24、48、72 h后,上機(jī),用液相色譜儀測(cè)定峰面積。

1.2.5.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批次阿薩伊凍干粉6份,制備供試品溶液,按照方法測(cè)定含量。

1.2.5.5 加樣回收實(shí)驗(yàn) 取同一批次阿薩伊凍干粉(含量為0.1233 mg/g)9份,每份0.3 g,精密稱(chēng)定,分別加入矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷對(duì)照品溶液50、75、100 μL(每1 mL相當(dāng)于矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷0.4839 mg),各加入量平行操作3份,制備供試品溶液,按照方法測(cè)定含量。

1.2.6 樣品測(cè)定方法 取3批次阿薩伊凍干粉,按照確定的方法測(cè)定矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量。每批次平行測(cè)定3組。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果和分析

2.1 色譜條件的考察

2.1.1 兩種構(gòu)型對(duì)最大吸收波長(zhǎng)的影響 矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷中性醌式堿和烊陽(yáng)離子構(gòu)型的紫外-可見(jiàn)吸收光譜見(jiàn)圖2。由圖2可知,矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷對(duì)照品溶液的中性醌式堿和烊陽(yáng)離子構(gòu)型對(duì)最大吸收波長(zhǎng)無(wú)影響,分別在270、520 nm波長(zhǎng)有強(qiáng)吸收。

圖2 矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的紫外吸收光譜圖Fig.2 UV absorption spectra of cyanidin-3-O-glucoside

2.1.2 兩種構(gòu)型對(duì)測(cè)定波長(zhǎng)和色譜峰分離度的影響 矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷兩種構(gòu)型在270、520 nm的色譜圖,見(jiàn)圖3、圖4。結(jié)果表明,以乙腈-0.5%磷酸溶液(12∶88)為流動(dòng)相,矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷兩種構(gòu)型對(duì)色譜峰分離無(wú)影響。兩種構(gòu)型供試品色譜圖在270 nm波長(zhǎng)基線噪音大,無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)定,在520 nm波長(zhǎng)基線穩(wěn)定,因此選擇520 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

圖3 對(duì)照品和樣品的高效液相色譜圖(270 nm)Fig.3 HPLC chromatogram of reference substances and sample(270 nm)

圖4 對(duì)照品和樣品的高效液相色譜圖(520 nm)Fig.4 HPLC chromatogram of reference substances and sample(520 nm)

圖4 兩種構(gòu)型矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.4 Standard curve for the two form of cyanidin-3-O-glucoside

2.2 供試品溶液制備方法的考察

2.2.1 兩種構(gòu)型對(duì)脫脂阿薩伊提取矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的影響 對(duì)脫脂阿薩伊凍干粉分別以多種溶劑提取,測(cè)定矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的含量,結(jié)果見(jiàn)表1。脫脂后多種溶劑提取,測(cè)定為矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的含量基本一致。結(jié)果表明,兩種構(gòu)型對(duì)脫脂后阿薩伊凍干粉中提取矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷無(wú)影響。

表1 阿薩伊凍干粉脫脂后經(jīng)不同溶劑提取矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量的測(cè)定結(jié)果Table 1 Determination results of cypermethrin-3-O-glucoside content in A?aí freeze-dried powder extracted by different solvents after degreasing

2.2.2 兩種構(gòu)型對(duì)未脫脂阿薩伊提取矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的影響 對(duì)未脫脂阿薩伊凍干粉分別以多種溶劑提取,測(cè)定矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的含量,結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知,矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量測(cè)定結(jié)果不一致。以1%鹽酸為溶劑制成的失車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷烊陽(yáng)離子構(gòu)型含量測(cè)定結(jié)果最高,并與“2.2.1兩種構(gòu)型對(duì)脫脂阿薩伊提取矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的影響”項(xiàng)下脫脂阿薩伊凍干粉測(cè)定結(jié)果相同,表明失車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷呈烊陽(yáng)離子構(gòu)型,易溶于水,可不脫脂提取,簡(jiǎn)化操作。

表2 未脫脂阿薩伊凍干粉經(jīng)多種溶劑提取后矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量的測(cè)定結(jié)果Table 2 Determination results of cypermethrin-3-O-glucoside content in undefatted A?aí freeze-dried powder extracted by different solvents

2.3 兩種構(gòu)型對(duì)紫外檢測(cè)器的響應(yīng)因子和標(biāo)準(zhǔn)曲線的影響

配制不同濃度矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷對(duì)照品中性醌式堿和烊陽(yáng)離子構(gòu)型的對(duì)照品溶液,測(cè)定峰面積,計(jì)算響應(yīng)因子和標(biāo)準(zhǔn)曲線,烊陽(yáng)離子構(gòu)型的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=37029.5438x-7.6051,R2=0.9999。中性醌式堿構(gòu)型的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=8100.2724x-1.0906,R2=1.0000,結(jié)果見(jiàn)表3和圖5。結(jié)果表明,兩個(gè)構(gòu)型均呈良好線性關(guān)系。但是,烊陽(yáng)離子構(gòu)型時(shí)響應(yīng)因子是中性醌式堿構(gòu)型的4.6倍,導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率不同,表明烊陽(yáng)離子構(gòu)型構(gòu)型影響紫外吸收強(qiáng)度,使響應(yīng)因子增大,有利于準(zhǔn)確測(cè)定矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量。

表3 矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷兩種構(gòu)型的峰面積和響應(yīng)因子Table 3 Peak area and response factor for the two forms of cyanidin-3-O-glucoside

2.4 兩種構(gòu)型對(duì)含量測(cè)定結(jié)果的影響

分別采用矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷中性醌式堿和烊陽(yáng)離子構(gòu)型,測(cè)定阿薩伊凍干粉中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量,結(jié)果見(jiàn)表4。分別以中性醌式堿和烊陽(yáng)離子構(gòu)型測(cè)定矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的含量一致,但相同濃度的供試品和對(duì)照品峰面積不一致。結(jié)果表明,兩種構(gòu)型對(duì)含量測(cè)定結(jié)果無(wú)影響。測(cè)定方法中對(duì)照品和供試品制備溶劑應(yīng)一致,使其呈相同構(gòu)型,否則會(huì)導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果有誤。

表4 矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷中性醌式堿和烊陽(yáng)離子構(gòu)型含量測(cè)定結(jié)果Table 4 Results of determination for the two forms of neutral quinonoidal anhydrobase and flavylium cation of cyanidin-3-O-glucoside

2.5 方法學(xué)考察結(jié)果

2.5.1 線性實(shí)驗(yàn) 矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷在0.002419～0.077412 mg/mL范圍呈線性關(guān)系,標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:y=37029.5438x-7.6051,R2=0.9999。

2.5.2 精密度實(shí)驗(yàn) 連續(xù)進(jìn)樣6次,矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的峰面積RSD%為0.92%,結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 分別于室溫放置0、6、12、24、48、72 h后,峰面積RSD%為1.14%,結(jié)果表明,供試品溶液室溫下放置72 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 6份同一批次阿薩伊凍干粉中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量為0.1233 mg/g,RSD%為1.82%,結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.5 加樣回收實(shí)驗(yàn) 9份同一批次阿薩伊凍干粉(含量為0.1233 mg/g),平均回收率為98.31%,RSD%為1.44%。結(jié)果表明,該方法回收率良好。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 Table 5 Results of recovery rate experiment

2.6 阿薩伊凍干粉樣品中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量測(cè)定結(jié)果

取3批次阿薩伊凍干粉中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表6。由表6可知,3批次阿薩伊凍干粉中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量為0.1158～0.1663 mg/g。

表6 阿薩伊凍干粉中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量測(cè)定結(jié)果Table 6 Determination results of cypermethrin-3-O-glucoside content in A?aí freeze-dried powder

3 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn),以1%鹽酸水溶液為溶劑,使阿薩伊凍干粉中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷呈烊陽(yáng)離子構(gòu)型,易溶于水,可不脫脂提取,簡(jiǎn)化操作;以HPLC-紫外檢測(cè)器測(cè)定矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量,采用兩種構(gòu)型測(cè)定矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷含量的結(jié)果無(wú)差異,但選擇烊陽(yáng)離子構(gòu)型,因其響應(yīng)因子大于中性醌式堿,有利于準(zhǔn)確測(cè)定;并提示,測(cè)定方法中對(duì)照品和供試品溶液中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷構(gòu)型應(yīng)保持一致,否則會(huì)因響應(yīng)因子不同而導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生誤差。矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷烊陽(yáng)離子構(gòu)型在0.002419～0.077412 mg/mL范圍呈線性關(guān)系,y=37029.5438x-7.6051(R2=0.9999),回收率為98.31%(RSD%=1.44%),3批阿薩伊凍干粉中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷的含量為0.1158～0.1663 mg/g。本研究建立的方法簡(jiǎn)便、靈敏、測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好,對(duì)阿薩伊相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制有一定的參考價(jià)值。