陳靜靜，田京輝，徐炳欣，岳延濤，蘭丙欣

（許昌市中心醫(yī)院 藥學(xué)部，河南 許昌 461000）

缺血性腦卒中在我國(guó)中老年人群中有較高的發(fā)病率和致殘致死率，主要是由于腦血管狹窄、硬化引起血管堵塞從而導(dǎo)致的神經(jīng)功能損傷[1]。在缺血性腦卒中的藥物治療和預(yù)防中，阿司匹林應(yīng)用最為廣泛，但在臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，5 %～65 %的患者在接受規(guī)范的阿司匹林治療后，療效不能達(dá)到預(yù)期，患者對(duì)阿司匹林的抗血小板藥理作用非敏感，這種現(xiàn)象稱為阿司匹林抵抗[2-3]。這種現(xiàn)象的發(fā)生是由許多因素導(dǎo)致的，其中影響最大的因素被認(rèn)為是遺傳因素[4]。血小板內(nèi)皮聚集體1（platelet endothelial aggregation receptor 1，PEAR1）是在血小板中有高度表達(dá)的Ⅰ型膜蛋白，參與血小板的激活和聚集，在形成穩(wěn)定血栓中起到積極作用[5]。目前未發(fā)現(xiàn)關(guān)于PEAR1基因多態(tài)性與我國(guó)缺血性腦卒中患者人群中阿司匹林抵抗相關(guān)性的報(bào)道。為此，筆者分析我院2016年1月～2018年1月收治的缺血性腦卒中患者的臨床資料，檢測(cè)PEAR1基因多態(tài)性，探討其與阿司匹林抵抗的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2016年1月～2018年1月我院就診的缺血性腦卒中患者的詳細(xì)臨床資料，按納入和排除標(biāo)準(zhǔn)入組患者共148例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)影像學(xué)檢查確診為缺血性腦卒中；②接受阿司匹林規(guī)范治療7 d以上；③血小板計(jì)數(shù)為100×109～500×109/L；④年齡18～70歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近1個(gè)月內(nèi)聯(lián)用其他抗血小板聚集的藥物；②凝血功能異常、近期有活動(dòng)性出血；③近期外科手術(shù)患者；④惡性腫瘤、膠原病、血液病及嚴(yán)重心肝腎功能異常；⑤妊娠婦女；⑥患者依從性較差。

1.2 分組和樣本收集

入組患者連續(xù)口服阿司匹林 7 d，100 mg/日，于第8天早晨空腹抽取外周靜脈血，采用血栓彈力圖檢測(cè)血小板的聚集率，根據(jù)抑制率分為對(duì)照組（即敏感患者，抑制率不小于30 %，共計(jì)102例）和觀察組（即抵抗患者，抑制率小于30 %，共計(jì)46例）。所有患者均告知并均已簽署患者知情同意書(shū)。

1.3 基因檢測(cè)方法

兩組患者于早晨空腹抽取外周靜脈血3 ml，置入用EDTA處理過(guò)的離心管，-20 ℃保存。采用熒光染色體原位雜交技術(shù)對(duì)PEAR1基因型進(jìn)行檢測(cè)。具體操作步驟如下：在1.5 ml離心管中加入1.2 ml 1×NH4Cl預(yù)處理液，加入150 μl患者全血，混勻后室溫靜置5 min，離心吸棄上層紅色液體，加入生理鹽水重懸白細(xì)胞，再離心吸棄上清，最后向多次富集白細(xì)胞離心管中加入50 μl PEAR1基因耀金分試劑，反復(fù)吹打后混勻，室溫靜置30 min后用熒光檢測(cè)儀測(cè)定，結(jié)果由軟件自動(dòng)分析判讀。以上操作均嚴(yán)格按試劑盒和儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)量數(shù)據(jù)和計(jì)數(shù)資料分別采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）和百分比（%）表示，比較采用t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)，多因素分析采用Logistic回歸。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較

對(duì)兩組的性別、年齡、基礎(chǔ)疾病、危險(xiǎn)因素和可能與阿司匹林抵抗相關(guān)的生化指標(biāo)進(jìn)行比較，兩組性別、飲酒和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）方面的差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其他一般臨床資料之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

表1 一般資料的比較

表2 生化指標(biāo)比較

2.2 兩組PEAR1基因多態(tài)性的比較

兩組患者PEAR1基因rs12041331位點(diǎn)檢出GG、GA和AA3種基因型，其基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中觀察組中的GG型攜帶頻率遠(yuǎn)低于對(duì)照組（P＜0.05）；兩組患者PEAR1基因rs2768759位點(diǎn)存在多態(tài)性，基因型有AA、AC和CC，兩組患者3種基因型的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表3。

表3 兩組PEAR1基因分布比較（例數(shù)，%）

2.3 Logistic回歸分析

將單因素分析中存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的影響因素：性別、飲酒、HDL-C、PEAR1基因rs12041331位點(diǎn)基因型分布納入Logistic回歸方程進(jìn)行多因素分析，結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明性別、HDL-C、PEAR1基因rs12041331位點(diǎn)基因型分布是阿司匹林抵抗發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05），而飲酒被排除（P＞0.05）。

表4 阿司匹林抵抗多因素分析

3 討論

缺血性腦卒中患者是因血小板聚集和活化形成腦血栓，最為有效的治療方法為抗血小板聚集的溶栓治療，其中阿司匹林臨床應(yīng)用最為廣泛。但有臨床報(bào)道，大量患者出現(xiàn)了阿司匹林抵抗，是指規(guī)律口服治療劑量的阿司匹林仍不能減少或避免血栓的形成，血小板聚集未得到有效抑制[6]。其發(fā)生的機(jī)制較為復(fù)雜，不是十分明確，其中遺傳因素可能是一關(guān)鍵機(jī)制[4,7]。近年，有文獻(xiàn)報(bào)道PEAR1基因與血小板聚集有密切相關(guān)性，在內(nèi)皮細(xì)胞和血小板細(xì)胞有較高的表達(dá)，其編碼的蛋白質(zhì)是一種參與誘導(dǎo)血小板激活的跨膜蛋白，這種蛋白的磷酸化可促進(jìn)血小板的聚集并形成穩(wěn)定的血栓[8]。

在近年關(guān)于PEAR1基因的研究中，有研究報(bào)道rs2768759位點(diǎn)中的C等位基因可能與促進(jìn)血小板活化聚集相關(guān)，但也有研究報(bào)道該位點(diǎn)的變異與阿司匹林抵抗并不存在相關(guān)性[9-10]。本研究發(fā)現(xiàn)，兩組患者在rs2768759位點(diǎn)均存在多態(tài)性，但阿司匹林抵抗組（即觀察組）基因分布與阿司匹林敏感組（即對(duì)照組）相比，雖然抵抗組C等位基因的頻數(shù)高于敏感組，但兩組間差異不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。筆者分析這可能與入選病例數(shù)量有限和存在偏倚相關(guān)，要明確rs2768759位點(diǎn)與阿司匹林抵抗的相關(guān)性尚需進(jìn)一步擴(kuò)大樣品容量加以證實(shí)。本研究發(fā)現(xiàn)阿司匹林抵抗組（即觀察組）與阿司匹林敏感組（即對(duì)照組）的PEAR1基因rs12041331位點(diǎn)的基因分布存在明顯差異（P＜0.05），觀察組中的GG純合子頻數(shù)明顯低于對(duì)照組（P＜0.05），且經(jīng)Logistic多因素回歸分析發(fā)現(xiàn)，rs12041331位點(diǎn)的A等位基因?yàn)榘⑺酒チ值挚沟莫?dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05），與近年多篇文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)論相一致[11-13]，從而證實(shí)了rs12041331基因多態(tài)性與阿司匹林抵抗密切相關(guān)。這可能是與攜帶A等位基因的患者血小板活化作用增強(qiáng)，且對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞遷移有影響，從而促進(jìn)血栓形成有關(guān)[14-15]。本研究發(fā)現(xiàn)性別和HDL-C為阿司匹林抵抗的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05），但飲酒被排除（P＞0.05），筆者分析可能是由于女性患者體內(nèi)雌激素具有抗氧化、降低血脂水平和血管張力、抑制血小板的聚集和黏附等作用，從而抑制阿司匹林抵抗的發(fā)生[16]，LDL-C則通過(guò)減少炎性因子釋放從而抑制阿司匹林抵抗的發(fā)生[17]，飲酒在中國(guó)生活習(xí)慣的男女差異極大，絕大部分為男性，故飲酒作為獨(dú)立危險(xiǎn)因素的可能被排除。

綜上所述，本研究提示PEAR1基因的多態(tài)性與缺血性腦卒中患者的阿司匹林反應(yīng)密切相關(guān)，rs12041331位點(diǎn)的A等位基因有增加阿司匹林抵抗的風(fēng)險(xiǎn)。本研究入選病例有限，存在許多局限性，尚需進(jìn)一步的大樣本多中心檢測(cè)。