蔣燕霞，林榜建，徐瑞超，肖禮娥，唐富麗，董自亮

（太極集團(tuán)重慶涪陵制藥廠有限公司，重慶 408099）

八仙湯出自《圣濟(jì)總錄》卷六十五，由桑白皮，桔梗，麻黃，茯苓，柴胡，陳皮，苦杏仁、馬兜鈴8味藥材組成，主治久患?xì)馑裕l(fā)即奔喘，坐臥不安，喉中氣欲絕。目前對(duì)于八仙湯中單味藥的成分和藥理活性研究較多，而對(duì)于整方的研究特別是物質(zhì)基礎(chǔ)和配伍效應(yīng)研究則無(wú)相關(guān)報(bào)道。

為探討八仙湯組方藥材中揮發(fā)性成分在組方中的作用，尋找八仙湯作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）對(duì)八仙湯中揮發(fā)性成分進(jìn)行分析研究，并模擬相同條件對(duì)各單味藥材進(jìn)行分析比較，以為八仙湯的物質(zhì)基礎(chǔ)與配伍機(jī)理研究奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 7890A-5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，包括Agilent GC-MSD工作站，HP型毛細(xì)管柱（250μm×30 m，0.25 μm）（美國(guó)Agilent Technologies公司）； KQ2200E型超聲清洗器（昆山超聲儀器公司）；BP211D 型電子分析天平（梅特勒-托利多）；ALPHAi-4LSC冷凍干燥機(jī)（德國(guó)Christ）。

1.2 材料

藥材購(gòu)于重慶桐君閣大藥房，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)王光志教授鑒定為正品。其中麻黃為麻黃科植物草麻黃Ephedra sinicaStapf的干燥根和根莖，苦杏仁為薔薇科植物山杏Prunus armemacaL.var.ansu Maxim.的干燥成熟種子，陳皮為蕓香科植物橘Citrus reticulataBlanco的干燥成熟果皮，桑白皮為桑科植物桑Morus albaL.的干燥根皮，茯苓為多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.) Wolf的干燥菌核，其他藥味均符合《中國(guó)藥典》2015年版一部項(xiàng)下要求。所用試劑均為分析純，水為三重水。

2 方法

2.1 GC-MS分析

參考文獻(xiàn)[1-4]，并進(jìn)行了改進(jìn)，確定了以下分析條件。

色譜條件：色譜柱為HP 型毛細(xì)管柱（250μm×30 m，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度200 ℃；柱溫為程序升溫：初始溫度60 ℃，以4 ℃/min的速率升溫至150 ℃，保持3 min，再以25 ℃/min的速率升溫至200 ℃，保持10 min；分流比40:1；進(jìn)樣量1μl；載氣為氦氣（純度＞ 99.99 %），流速為1.0 ml/min。分析時(shí)間：42 min。

質(zhì)譜條件：電子轟擊（EI）離子源，電離電壓70 eV，離子源溫度220 ℃，加速電壓200 eV；掃描質(zhì)量m/z35～550。

2.2 揮發(fā)油的提取

取總處方飲片180 g，置圓底燒瓶中，加入10倍量水，浸泡30 min，采用水蒸氣蒸餾法提取8 h，得到揮發(fā)油，無(wú)水Na2SO4干燥，封裝，備用，得油率為0.10 %（v/w）。同法制得麻黃、苦杏仁、陳皮、桑白皮單味藥材揮發(fā)油。

3 結(jié)果

圖1 八仙湯揮發(fā)油總離子流圖譜

圖2 麻黃揮發(fā)油總離子流圖譜

圖3 苦杏仁揮發(fā)油總離子流圖譜

圖4 陳皮揮發(fā)油總離子流圖譜

圖5 桑白皮揮發(fā)油總離子流圖譜

按上述分析條件，對(duì)各揮發(fā)油進(jìn)行GC-MS分析，總離子流圖見(jiàn)圖1～5，以峰面積歸一化法計(jì)算各揮發(fā)油中各組分的相對(duì)含量，采用化學(xué)工作站對(duì)各質(zhì)譜圖的色譜峰進(jìn)行NIST標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)檢索，選擇匹配度最高的化學(xué)結(jié)構(gòu)作為最佳鑒定結(jié)果，從而確定各揮發(fā)性成分的結(jié)構(gòu)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 八仙湯與麻黃、苦杏仁、陳皮、桑白皮揮發(fā)油的化學(xué)成分

注：“-”未檢測(cè)到

經(jīng)分析，初步指認(rèn)了70種化合物，經(jīng)面積歸一化計(jì)算占總揮發(fā)油的96.66 %，其中主要含有：苯甲醛、D-檸檬烯、γ-松油烯、α-松油醇，在八仙湯中分別占揮發(fā)油含量的43.03 %，28.35 %，2.82 %，2.25 %，其他還有烯類(lèi)、烷類(lèi)等物質(zhì)。八仙湯揮發(fā)油中歸屬于麻黃揮發(fā)油的化學(xué)成分有26個(gè)，如苯甲醛、D-檸檬烯、四甲基吡嗪等，歸屬于苦杏仁揮發(fā)油的化學(xué)成分有20個(gè)，如苯甲醛、D-檸檬烯、γ-松油烯、麝香草酚等，歸屬于陳皮揮發(fā)油的化學(xué)成分有25個(gè)，如(1R)-2,6,6-三甲基[3.1.1]庚-2-烯、β-月桂烯、D-檸檬烯、γ-松油烯等，歸屬于桑白皮揮發(fā)油的化學(xué)成分有3個(gè)，如苯甲醛、D-檸檬烯、十八甲基環(huán)壬硅氧烷等。

Hexana、4-亞甲基-1-（1 -甲基乙基）環(huán)己烯、氧化檸檬烯等在八仙湯揮發(fā)油中發(fā)現(xiàn)而在單味藥材中未檢測(cè)到；而單味藥材揮發(fā)性成分化學(xué)信號(hào)只有部分在八仙湯揮發(fā)油中檢測(cè)到，且在量上亦有一定的變化。由此可見(jiàn)，富含揮發(fā)性成分藥材在組方的煎湯過(guò)程中可能存在著一系列成分間的相互作用與轉(zhuǎn)化，其轉(zhuǎn)化過(guò)程及轉(zhuǎn)化產(chǎn)物及含不同類(lèi)型揮發(fā)性成分水煎煮和蒸餾過(guò)程中在媒介中分配系數(shù)的不同、油/水兩相間飽和曲線(xiàn)與動(dòng)態(tài)平衡的關(guān)系等改變可能導(dǎo)致復(fù)方揮發(fā)油成分的組成與量的變化，從而影響復(fù)方整體治療功效。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)采用GC-MS首次對(duì)八仙湯及其單味藥材中揮發(fā)油類(lèi)成分進(jìn)行了鑒定和分析，初步指認(rèn)了苯甲醛、D-檸檬烯、γ-松油烯、α-松油醇等70種成分，占揮發(fā)油總量的96.66 %。而八仙湯中其他未歸屬的揮發(fā)油，可能來(lái)自方中其他藥材，也有可能是藥材之間的相互配伍產(chǎn)生的新的揮發(fā)油成分，有待于進(jìn)一步考察。主要成分苯甲醛、D-檸檬烯等具有較強(qiáng)的抑菌及抗癌作用，初步揭示了揮發(fā)油類(lèi)的藥效作用物質(zhì)，為揭示其效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)和配伍機(jī)理奠定基礎(chǔ)，也為后期的制劑研究提供基礎(chǔ)。