張月丹 朱力

(蘇州大學(xué)附屬第三醫(yī)院常州市第一人民醫(yī)院急診科，江蘇 常州 213003)

膿毒癥(sepsis)是以感染導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)和器官功能損傷為特征的復(fù)雜疾病，在臨床上十分常見，并有逐年增多的趨勢。據(jù)統(tǒng)計，美國平均每年有750，000人患膿毒癥，至少210，000人因此而死亡，死亡率高達(dá)28.6%[1]在歐洲，膿毒癥患者死亡率約為27%[2]。盡管我國目前尚缺乏膿毒癥詳細(xì)的流行病學(xué)資料，但最近一項多中心流行病學(xué)調(diào)查表明，我國膿毒癥的發(fā)病率和死亡率也接近發(fā)達(dá)國家水平[3]。近年的臨床研究證實，單核/巨噬細(xì)胞異常活化是膿毒癥早期的典型特征[4]，在病原體介導(dǎo)的膿毒癥中發(fā)揮重要作用，深入研究膿毒癥中單核/巨噬細(xì)胞的活化機(jī)制具有重要意義。本研究擬通過流式細(xì)胞術(shù)檢測膿毒癥患者單核細(xì)胞上S100A8/A9的表達(dá)，初步探討S100A8/A9在膿毒癥中的作用，為后續(xù)深入研究提供實驗基礎(chǔ)，為膿毒癥治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012年1月至2012年12月在本院重癥醫(yī)學(xué)科治療的21例膿毒癥患者外周血標(biāo)本，其中男12例，女9例。選擇16名健康體檢者外周血作為對照。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測各組外周血單核細(xì)胞上S100A8/A9的表達(dá)水平。膿毒癥診斷均符合2001年國際膿毒癥定義會議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。收集體檢者外周靜脈血5 mL，肝素鈉抗凝；3 000r/5 min離心后取血漿保存于-80 ℃冰箱；剩余細(xì)胞用于流式細(xì)胞學(xué)檢測。

1.2 流式細(xì)胞學(xué)檢測方法 取外周血50 μL，加入5 μL抗人FITC-CD14單克隆抗體和5 μL抗人PE- S100A8/A9單克隆抗體，避光孵育30 min；加入1 mL紅細(xì)胞裂解液，37 ℃孵育5 min；加入PBS，1 200 r/5 min 離心，棄上清，加入500 μL PBS重懸，進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析。

2 結(jié) 果

流式細(xì)胞術(shù)分別檢測兩組外周血中S100A8/A9的水平，結(jié)果顯示，膿毒癥組患者外周血S100A8/A9+單核細(xì)胞的比例明顯高于對照組(見圖1)，膿毒癥組患者單核細(xì)胞上S100A8/A9陽性率達(dá)到(92.88±5.34)%，對照組為(3.920±1.76)%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)(見表1和圖2)。

表1 外周血單核細(xì)胞表面S100A8/A9陽性率

圖1 流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血單核細(xì)胞表面S100A8/A9的表達(dá)水平

注：膿毒癥組與對照組比較***P<0.001。

圖2 外周血單核細(xì)胞表面S100A8/A9的表達(dá)陽性率

3 討 論

炎癥反應(yīng)是生物體在長期進(jìn)化過程中對內(nèi)外源刺激因素建立的一套精密的監(jiān)視、防御及修復(fù)機(jī)制，也是膿毒癥重要的病理基礎(chǔ)。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，來自入侵微生物的病原體相關(guān)模式分子(pathogen associated molecular patterns，PAMPs)是引起膿毒癥患者體內(nèi)過度炎癥的罪魁禍?zhǔn)?。PAMPs形式多樣并廣泛存在于病原體細(xì)胞表面，如酵母細(xì)胞壁上的甘露糖、脂多糖、多肽糖、胞壁酸等各種細(xì)菌的細(xì)胞壁成分等，單核/巨噬細(xì)胞等固有免疫細(xì)胞通過識別PAMPs啟動免疫應(yīng)答[6]。然而，大量的臨床及臨床前研究發(fā)現(xiàn)，針對PAMPs進(jìn)行干預(yù)并不能有效改善膿毒癥患者體內(nèi)免疫失衡狀態(tài)[7-8]，提示膿毒癥中的大范圍、高強(qiáng)度的炎癥反應(yīng)可能依賴其它介質(zhì)的參與。

1994年，Matzinger首次提出“損傷相關(guān)分子模式(damage-associated molecular patterns，DAMPs)”的概念[9]，指出除PAMPs外，還存在一類由活化或損傷細(xì)胞釋放的內(nèi)源性蛋白可以與單核/巨噬細(xì)胞膜上的模式識別受體結(jié)合，誘導(dǎo)炎癥產(chǎn)生。至今，DAMPs成員不斷擴(kuò)充，已經(jīng)發(fā)展成為包括高遷移率族蛋白1(high-mobility group protein B1，HMGB1)、熱休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)、S100蛋白、防御素等十幾類分子的大家族，并被廣泛證實在多種疾病的炎癥紊亂中扮演著重要角色[10]。因此，DAMPs正成為研究膿毒癥發(fā)病機(jī)制的新熱點(diǎn)。S100A8和S100A9是DAMPs家族在單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞中表達(dá)最豐富的蛋白[11]。

在生理狀態(tài)下，S100A8和S100A9主要以S100A8/A9復(fù)合體的形式發(fā)揮功能，并且S100A8/A9主要表達(dá)于細(xì)胞內(nèi)。然而，更多的研究發(fā)現(xiàn)，S100A8/A9與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，銀屑病，炎癥性腸病，系統(tǒng)性紅斑狼瘡等多種炎癥性疾病密切相關(guān)[12-14]。本課題證實膿毒癥患者外周血單核細(xì)胞上S100A8/A9表達(dá)明顯增加；膿毒癥患者外周血中S100A8/A9+單核細(xì)胞的比例明顯升高，單核細(xì)胞上S100A8/A9陽性率達(dá)到(92.88±5.34)%，顯著高于正常人；結(jié)果提示膿毒癥發(fā)生過程中，S100A8/A9由胞內(nèi)轉(zhuǎn)移至胞外，這可能是引發(fā)膿毒癥患者炎癥反應(yīng)過度的關(guān)鍵步驟。S100A8/A9對膿毒癥的具體作用，及其可能的作用機(jī)制，仍有待進(jìn)一步研究。