牛志英，彭 云

(1.鄭州市口腔醫(yī)院，河南 鄭州 450000； 2.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院, 河南 鄭州 450000)

牙周炎是口腔科常見的感染性疾病，病程持續(xù)時(shí)間長，好發(fā)于成年人群，嚴(yán)重影響患者的日常工作和生活。臨床上多以西藥治療為主，但效果并不理想。骨堿性磷酸酶[1-2](bone alkaline phosphatase, BALP)是成熟期骨形成的中期指標(biāo)，反映骨形成的速率。骨形態(tài)發(fā)生蛋白2[3-4](bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白4[5](bone morphogenetic protein-4,BMP-4)可以促進(jìn)骨形成，在破壞骨組織修復(fù)過程中起重要作用。本研究建立大鼠牙周炎動(dòng)物模型，以中藥自擬方聯(lián)合西藥同時(shí)治療，通過對大鼠牙周炎臨床癥狀及血液指標(biāo)，以及外周血中BALP、BMP-2、BMP-4的含量測定考察中西藥聯(lián)用對牙周炎大鼠的治療作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

健康SD雄性大鼠48只，SPF級，體質(zhì)量180～220 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號：SCXK(京)2016-0006。飼養(yǎng)于IVC動(dòng)物房，自由飲食水，適應(yīng)性飼養(yǎng) 3 d后開始造模。

1.2 藥品、試劑與儀器

中藥自擬方由青皮、荊芥、防風(fēng)、黃芩、桔梗、連翹、生地黃、升麻、生石膏、甘草、皂角刺、蒲公英、細(xì)辛組成。青皮(批號1805221)、荊芥(批號1803281)、防風(fēng)(批號1803025)、黃芩(批號1805312)、桔梗(批號1808012)、連翹(批號1806111)、生地黃(批號1802201)、升麻(批號1806193)、生石膏(批號1801081)、甘草(批號1804052)、皂角刺(批號1805253)、蒲公英(批號1807122)、細(xì)辛(批號1806224)，均購自河南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院中藥房，由安徽普仁中藥飲片有限公司生產(chǎn)，經(jīng)檢驗(yàn)均符合2015版《中國人民共和國藥典》一部質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，水煎濃縮，4 ℃保存，備用。替硝唑片，東北制藥集團(tuán)沈陽第一制藥廠產(chǎn)品，批號1804032；羅紅霉素片，石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號385180855。根據(jù)人與大鼠體表面積折算系數(shù)，大鼠給藥劑量為中藥自擬方(15 g/kg)、替硝唑片(100 μg/g)、羅紅霉素片(31 μg/g)。XFA6130型動(dòng)物血液細(xì)胞分析儀，南京普朗醫(yī)療設(shè)備有限公司產(chǎn)品；JS15-01電子天平，上海蒲春計(jì)量儀器有限公司產(chǎn)品。BALP、BMP-2、BMP-4試劑盒，上海拜力生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.3 動(dòng)物模型的建立

取10只大鼠作為正常對照組，常規(guī)飲食。其余38只大鼠以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為100 g/L的水合氯醛腹腔注射麻醉，于鼠板上固定，參照文獻(xiàn)方法[6]，使用正畸結(jié)扎絲對大鼠雙側(cè)上頜部第二磨牙結(jié)扎，術(shù)后喂養(yǎng)自制高糖飼料、0.2 g/mL糖水建立大鼠牙周炎動(dòng)物模型。正常對照組常規(guī)飲食。

4周后隨機(jī)抽取8只大鼠觀察牙周，可見結(jié)扎部位牙齦紅腫明顯，周圍附著食物殘?jiān)?，觸之易出血；牙周組織HE染色，電鏡下觀察到牙齦上皮組織內(nèi)出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞，已形成牙周袋，表明造模成功。造模成功后，造模大鼠的飲食改為常規(guī)飲食。將造模成功的大鼠麻醉后取出結(jié)扎絲，隨機(jī)分為模型對照組、西藥組和中西藥組3組，每組10只。西藥組給予替硝唑片(100 μg/g)+羅紅霉素片(31 μg/g)；中西藥組給予替硝唑片(100 μg/g)+羅紅霉素片(31 μg/g)+中藥自擬方水煎液(15 g/kg)；正常對照組和模型對照組給予同體積的純化水。均灌胃給藥，1 d 1 次，連續(xù) 7 d。

1.4 檢測指標(biāo)

給藥期間觀察各組大鼠的精神行為活動(dòng)、飲食、飲水等一般情況，參照文獻(xiàn)方法[7]檢測牙齦出血指數(shù)、菌斑指數(shù)和探診深度。末次給藥后 1 h，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，采用全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀分析大鼠血常規(guī)，酶聯(lián)免疫吸附法測定血清中BALP、BMP-2、BMP-4的含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 各組一般情況對比

造模3 d后，大鼠食欲減退，精神萎靡，少動(dòng)倦怠，毛發(fā)無光澤，牙齦紅腫。隨著造模時(shí)間延長，上述癥狀逐漸加重。造模結(jié)束時(shí)，大鼠牙齦組織紅腫明顯，觸之易出血，形成牙周袋。給藥后大鼠食欲增加、活動(dòng)增多，牙齦逐漸恢復(fù)。中西藥組大鼠牙齦紅腫明顯減退，幾乎未見牙周袋；模型對照組牙齦紅腫，未見明顯好轉(zhuǎn)；正常對照組大鼠一切正常。由表1可知：與模型對照組對比，中西藥組大鼠治療后體質(zhì)量明顯增加(P<0.01)。與西藥組對比，中西藥組大鼠體質(zhì)量明顯增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由表2可知：與模型對照組對比，中西藥組與西藥組的牙齦出血指數(shù)均降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)；中西藥組菌斑指數(shù)降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義意義(P<0.01)，西藥組無差別。與西藥組對比，中西藥組探診深度降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表1各組大鼠不同時(shí)期體質(zhì)量對比

組 別造模前/g造模后/g治療后/g正常對照組194.1±5.38244.8±25.70265.9±24.30模型對照組192.0±3.74201.5±10.15**210.4±13.21**西藥組195.3±6.12199.6±13.26**218.1±21.74**中西藥組194.0±4.85203.5±12.38**241.0±25.40##△

注：與正常對照組對比，**P<0.01；與模型對照組對比，##P<0.01 ；與西藥組對比，△P<0.05

表2各組大鼠牙周炎臨床指標(biāo)對比

組 別牙齦出血指數(shù)菌斑指數(shù)探診深度/mm正常對照組0 0.27±0.110.02±0.01 模型對照組2.36±0.281.84±0.22**1.39±0.21**西藥組1.04±0.19#1.16±0.09**1.25±0.16**#中西藥組0.91±0.25##1.02±0.14**##1.13±0.15**##△△

注：與正常對照組對比，**P<0.01；與模型對照組對比，#P<0.05，##P<0.01 ；與西藥組對比，△△P<0.01

2.2 各組大鼠血常規(guī)指標(biāo)對比

與模型對照組對比，中西藥組大鼠血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中心粒細(xì)胞計(jì)數(shù)降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。與西藥組對比，中西藥組的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中心粒細(xì)胞計(jì)數(shù)降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量對比，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

表3各組大鼠血常規(guī)指標(biāo)對比

組 別紅細(xì)胞計(jì)數(shù)/(×1012·L-1)白細(xì)胞計(jì)數(shù)/(×109·L-1)中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)/%血小板計(jì)數(shù)/(×109·L-1)血紅蛋白/(g·L-1)正常對照組6.50±0.4114.21±1.476.29±1.24192.50±61.34141.06±14.70模型對照組7.13±0.2518.36±1.34**9.54±2.80**216.74±41.31155.31±12.46西藥組6.94±0.7616.52±1.52**##7.72±2.12**#200.83±30.26152.65±10.38中西藥組7.01±0.2015.08±1.55##△6.63±1.61##△198.04±24.59154.27±13.29

注：與正常對照組對比，**P<0.01；與模型對照組對比，##P<0.01；與西藥組對比，△P<0.05

2.3 各組大鼠血清BALP、BMP-2、BMP-4含量對比

與正常對照組對比，西藥組和中西藥組大鼠的血清BALP、BMP-2、BMP-4含量升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。與模型對照組對比，西藥組僅BMP-2差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；中西藥組3項(xiàng)指標(biāo)均呈現(xiàn)顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。與西藥組對比，中西藥組BALP、BMP-2的含量明顯較高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4各組大鼠血清BALP、BMP-2、BMP-4含量對比

組 別BALPBMP-2BMP-4正常對照組39.05±7.257.31±0.8571.95±5.23模型對照組46.26±5.33*9.59±1.33**72.81±4.25西藥組52.14±5.20**#10.86±1.25**#77.68±6.34*中西藥組58.11±5.86**##△12.31±1.63**##△78.22±5.48*#

注：與正常對照組對比，*P<0.05，**P<0.01；與模型對照組對比，#P<0.05，##P<0.01； 與西藥組對比，△P<0.05

3 討 論

牙周炎是一種慢性炎癥，主要臨床表現(xiàn)為牙齦紅腫、出血。若未及時(shí)治療會(huì)出現(xiàn)潰瘍，牙齒松動(dòng)，甚至脫落，嚴(yán)重影響正常進(jìn)食。羅禮君等[8]運(yùn)用益腎清火方治療牙周炎大鼠3個(gè)月，發(fā)現(xiàn)中藥組血清中IL-1β的含量明顯下降，與模型組對比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。劉麗等[1]研究甘草液對牙周炎大鼠的治療機(jī)制，發(fā)現(xiàn)甘草液能夠促進(jìn)破壞骨組織中BALP和BMP-4的表達(dá)，從而具有一定的治療效果。另有研究[9-10]發(fā)現(xiàn)，中藥黃芩除能降低血液中白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的水平外，還能提高牙周組織和血清中BMP-2的的含量，加速壞損牙周組織的修復(fù)和再生。

本研究采用中西藥聯(lián)用治療實(shí)驗(yàn)性牙周炎大鼠，結(jié)果表明中西藥組無論是牙周組織恢復(fù)情況還是血液指標(biāo)的含量均優(yōu)于西藥組。此為牙周炎臨床新藥的研發(fā)提供了新的思路。