汪亞玲，朱月芳，楊先甲

恩施市中心醫(yī)院1婦產(chǎn)科，2急診外科，湖北 恩施 445000

研究表明，近年來卵巢癌的病死率及致殘率均呈上升趨勢[1-2]。在探討卵巢癌患者病情進(jìn)展相關(guān)原因的過程中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子或腫瘤相關(guān)因子能夠通過影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特征，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞浸潤和增殖過程異常，促進(jìn)卵巢上皮性惡性腫瘤的發(fā)生。Y-盒結(jié)合蛋白1（Y-box binding protein 1，YB1）能夠通過激活卵巢上皮細(xì)胞核基因的轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)卵巢上皮細(xì)胞的持續(xù)性增殖[3]；黏附分子CD44表達(dá)升高能夠?qū)е侣殉舶┘?xì)胞浸潤?quán)徑Ｂ殉步M織或盆腔內(nèi)其他組織，提高了卵巢癌細(xì)胞的黏附能力，增加了卵巢癌細(xì)胞的浸潤深度[4-5]。本研究選取80例上皮性卵巢癌組織，探討YB1和CD44蛋白表達(dá)與卵巢癌患者臨床特征的關(guān)系，旨在為卵巢癌患者的診療提供理論基礎(chǔ)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2015年1月至2017年12月于恩施市中心醫(yī)院診治的80例上皮性卵巢癌患者和80例卵巢良性上皮性腫瘤患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①上皮性卵巢癌及卵巢良性上皮性腫瘤的診斷參考中華醫(yī)學(xué)會制定的標(biāo)準(zhǔn)[6]；②年齡19～65歲；③無放化療史或免疫治療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他部位惡性腫瘤；②轉(zhuǎn)移性卵巢腫瘤。80例卵巢癌患者，年齡33～65歲，平均（49.3±11.6）歲；國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期：Ⅰ期18例，Ⅱ期25例，Ⅲ期27例，Ⅳ期10例；病理類型：漿液性44例，非漿液性36例；分化程度：高分化15例，中分化30例，低分化35例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例。80例卵巢良性上皮性腫瘤患者，年齡31～65歲，平均（48.8±12.4）歲；病理類型：漿液性囊腺瘤48例，黏液性囊腺瘤28例，內(nèi)膜樣腫瘤4例。上皮性卵巢癌和卵巢良性上皮性腫瘤患者的年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。收集80例上皮性卵巢癌患者的上皮性卵巢癌組織標(biāo)本及80例卵巢良性上皮性腫瘤患者的卵巢良性上皮性腫瘤組織標(biāo)本。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過，所有患者均對本研究知情并簽署知情同意書。

1.2 免疫組織化學(xué)染色方法

取組織標(biāo)本，采用石蠟包埋進(jìn)行連續(xù)切片，脫蠟至水后采用H2O2室溫下孵育10 min，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗3次，每次3～5 min，8%的蛋白粉封閉液封閉2 h，棄去封閉液后加入一抗[兔來源，濃度為1∶（1000～1500）]，4 ℃孵育過夜，PBS沖洗3次，每次3～5 min，加入二抗[鼠來源，濃度為 1∶（400～500）]，室溫孵育 20～30 min，PBS沖洗3次，每次3～5 min，滴加辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶的熒光標(biāo)記物，室溫孵育10 min，PBS沖洗3次，每次3～5 min，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木精復(fù)染，脫水，封片。

1.3 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判斷

YB1蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，CD44蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞膜。由2名資深病理科醫(yī)師采用半定量法[5]進(jìn)行評分。根據(jù)染色強(qiáng)度評分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，褐色或黑色為3分。根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行評分：陽性細(xì)胞所占百分比≤10%為1分，陽性細(xì)胞所占百分比11%～50%為2分，陽性細(xì)胞所占百分比51%～75%為3分，陽性細(xì)胞數(shù)所占百分比＞75%為4分。將染色強(qiáng)度評分和陽性細(xì)胞所占百分比評分相乘，＜3分為陰性，≥3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Spearman秩相關(guān)分析法進(jìn)行相關(guān)性分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 YB1和CD44蛋白表達(dá)情況的比較

上皮性卵巢癌組織中YB1和CD44蛋白的陽性表達(dá)率分別為57.50%（46/80）和65.00%（52/80），均明顯高于卵巢良性上皮性腫瘤組織的6.25%（5/80）和10.00%（8/80），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=48.383、51.627，P＜0.01）。

2.2 上皮性卵巢癌組織中YB1和CD44蛋白表達(dá)的相關(guān)性

相關(guān)性分析結(jié)果顯示，上皮性卵巢癌組織中YB1和CD44蛋白的表達(dá)呈明顯正相關(guān)（r=0.588，P＜0.01）。（表1）

表1 上皮性卵巢癌組織中YB1和CD44蛋白的表達(dá)情況（n =80）

2.3 不同臨床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌組織中YB1蛋白表達(dá)情況的比較

FIGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌組織中YB1蛋白的陽性表達(dá)率均高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的上皮性卵巢癌患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。不同病理類型、分化程度的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌組織中YB1蛋白的陽性表達(dá)率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

2.4 不同臨床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌組織中CD44蛋白表達(dá)情況的比較

FIGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌組織中CD44蛋白的陽性表達(dá)率均高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的上皮性卵巢癌患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。不同病理類型的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌組織中CD44蛋白的陽性表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表3）

表2 不同臨床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌組織中YB1蛋白表達(dá)情況的比較（n =80）

表3 不同臨床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌組織中CD44蛋白表達(dá)情況的比較（n= 80）

3 討論

卵巢上皮性惡性腫瘤的發(fā)生主要與長期的性激素受體敏感性改變或家族性遺傳易感基因的攜帶有關(guān)，特別是在年齡＞45歲、具有卵巢癌家族史的群體中，卵巢癌的發(fā)病率可進(jìn)一步升高[7-8]。YB1是轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)因子，能夠通過影響核基因的轉(zhuǎn)錄活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄激活程度的改變，增加卵巢上皮細(xì)胞核基因異常突變和轉(zhuǎn)錄的風(fēng)險(xiǎn)。研究表明，YB1蛋白表達(dá)升高可導(dǎo)致卵巢癌細(xì)胞基因錯配修復(fù)能力下降，造成卵巢癌細(xì)胞周期發(fā)生紊亂[9]；CD44是腫瘤干細(xì)胞相關(guān)因子，不僅能夠影響腫瘤細(xì)胞的黏附過程，還能夠激活腫瘤干細(xì)胞，顯著增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞干性特征，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[10]。有研究者探討了CD44蛋白在卵巢癌患者中的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CD44蛋白表達(dá)升高與卵巢癌的發(fā)生密切相關(guān)[11]。

本研究通過免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)，上皮性卵巢癌組織中YB1和CD44蛋白的陽性表達(dá)率均明顯高于卵巢良性上皮性腫瘤組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），提示YB1和CD44蛋白高表達(dá)均能促進(jìn)上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展。分析其原因可能有以下兩個方面[12-13]：①YB1蛋白表達(dá)升高能夠提高轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子的活性；②CD44蛋白表達(dá)升高能夠提高卵巢癌細(xì)胞對盆腔器官和組織的黏附能力，促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞對鄰近正常卵巢組織的浸潤。侯小滿等[12]研究結(jié)果顯示，上皮性卵巢癌組織中CD44蛋白的陽性表達(dá)率明顯升高，且CD44蛋白的陽性表達(dá)率與卵巢癌患者的臨床特征密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，上皮性卵巢癌組織中YB1和CD44蛋白表達(dá)呈明顯正相關(guān)（P＜0.01），提示二者在促進(jìn)卵巢癌病情進(jìn)展的過程中可能發(fā)揮了一定的協(xié)同作用。本研究探討了YB1和CD44蛋白表達(dá)與卵巢癌患者臨床特征的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)IGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌組織中YB1蛋白的陽性表達(dá)率均高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的上皮性卵巢癌患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示YB1蛋白表達(dá)與卵巢癌患者的臨床特征密切相關(guān)。這主要是由于YB1蛋白表達(dá)升高能夠?qū)е侣殉舶┘?xì)胞基因突變和錯配修復(fù)能力異常，促進(jìn)了癌基因的激活，導(dǎo)致卵巢癌細(xì)胞的持續(xù)性浸潤和侵襲，造成臨床分期升高。FIGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌組織中CD44蛋白的陽性表達(dá)率均高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的上皮性卵巢癌患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示CD44蛋白表達(dá)與卵巢癌患者的臨床特征密切相關(guān)，臨床上可通過隨訪術(shù)后免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，進(jìn)而評估卵巢癌患者的病情。

綜上所述，上皮性卵巢癌組織中YB1和CD44蛋白表達(dá)明顯升高，二者的表達(dá)呈正相關(guān)，且與上皮性卵巢癌患者的臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)。