楊光華，向森，高冬冬，焉然

1駐馬店市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南 駐馬店 463000

2黃淮學(xué)院醫(yī)學(xué)院，河南 駐馬店 463000

肺癌是臨床常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤，其中，非小細(xì)胞肺癌為其主要類型，早期缺乏特異性癥狀，多數(shù)患者就診時(shí)已進(jìn)展至中晚期，盡管放療、化療、生物免疫治療等方法在不斷改進(jìn)，但晚期非小細(xì)胞肺癌患者的無(wú)進(jìn)展生存期仍較短，這可能與晚期非小細(xì)胞肺癌復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制有關(guān)[1-2]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)多種生物標(biāo)志物在惡性腫瘤的診治、轉(zhuǎn)移和預(yù)后判斷中發(fā)揮著重要的作用[3]。近年來(lái)，基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)不斷進(jìn)步。有研究報(bào)道，微小核糖核酸（m icroRNA，miRNA）可參與細(xì)胞的分化、增殖和凋亡等多種生物學(xué)過(guò)程，其異常表達(dá)可引起細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)失去平衡，導(dǎo)致出現(xiàn)一系列的病理改變[4]。miRNA-135a是miRNA的亞型之一，已有研究證實(shí)其在體外能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖[5]。血清轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α（transforming grow th factor-α，TGF-α）是表皮生長(zhǎng)因子，主要作用于上皮細(xì)胞，與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[6]。本研究通過(guò)分析晚期非小細(xì)胞肺癌患者血清中miRNA-135a、TGF-α的表達(dá)水平與患者無(wú)疾病進(jìn)展生存期的關(guān)系，旨在為臨床評(píng)估晚期非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后及指導(dǎo)臨床用藥提供客觀依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2015年1月至2017年3月駐馬店市中心醫(yī)院和黃淮學(xué)院醫(yī)學(xué)院收治的87例晚期非小細(xì)胞肺癌患者作為晚期非小細(xì)胞肺癌組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)活體組織病理學(xué)檢查證實(shí)為原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌；②TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期；③預(yù)計(jì)生存時(shí)間在3個(gè)月以上。排除標(biāo)準(zhǔn)：①入組前4周進(jìn)行了抗腫瘤治療；②全身各系統(tǒng)存在明顯病變。87例晚期非小細(xì)胞肺癌患者中，男51例，女36例；年齡為35～68歲，平均年齡為（56.49±8.10）歲；腫瘤直徑為30～90 mm，平均腫瘤直徑為（65.14±10.58）mm；鱗癌30例，腺癌57例。選擇同期33例門診健康體檢者作為對(duì)照組，該組患者的血常規(guī)、尿常規(guī)、心電圖和肝腎功能等均正常，既往均無(wú)急性疾病史和慢性疾病史。其中，男20例，女13例；年齡為33～69歲，平均年齡為（55.10±9.42）歲。兩組患者的年齡、性別比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的審核批準(zhǔn)，患者均對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 資料收集與標(biāo)本采集 記錄晚期非小細(xì)胞肺癌患者的年齡、性別、腫瘤最大直徑、分化程度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等信息。分別采集晚期非小細(xì)胞肺癌組患者和對(duì)照組受試者的外周血4 ml，將其放置于不含乙二胺四乙酸的試管中，在室溫下放置1 h，常規(guī)離心后放置于-80℃的低溫箱中保存待檢。采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction，RTPCR）檢測(cè)miRNA-135a的表達(dá)水平。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)TGF-α的表達(dá)水平。參考相關(guān)文獻(xiàn)中miRNA-135a和TGF-α的臨界值，將miRNA-135a≥0.53定義為高表達(dá)，miRNA-135a＜0.53定義為低表達(dá)；將TGF-α≥14.56 pg/ml定義為高表達(dá)，TGF-α＜14.56 ng/ml定義為低表達(dá)[7-8]。

1.2.2 隨訪 采用電話、門診等方式進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間為1年，以開(kāi)始研究日期為隨訪起始日期，至隨訪結(jié)束、失訪或者死亡為截止日期，計(jì)算無(wú)疾病進(jìn)展生存期（指隨機(jī)化至患者出現(xiàn)腫瘤進(jìn)展或者死亡的時(shí)間）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；中位無(wú)疾病進(jìn)展生存期的比較采用Log-rank檢驗(yàn)；晚期非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的影響因素分析采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miRNA-135a、TGF-α表達(dá)水平的比較

晚期非小細(xì)胞肺癌組患者血清中miRNA-135a的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組患者，TGF-α的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 兩組受-試者血清miRNA-135a、TGF-α表達(dá)水平的比較（±s）

表1 兩組受-試者血清miRNA-135a、TGF-α表達(dá)水平的比較（±s）

組別晚期非小細(xì)胞肺癌組（n=87）對(duì)照組（n=33）t值P值0.55±0.09 1.17±0.20 23.432 0.000 11.60±1.90 5.98±0.77 16.452 0.000 miRNA-135a TGF-α（ng/ml）

2.2 miRNA-135a、TGF-α表達(dá)水平與晚期非小細(xì)胞肺癌患者臨床特征的關(guān)系

不同年齡、性別和腫瘤最大直徑晚期非小細(xì)胞肺癌患者血清中miRNA-135a、TGF-α的表達(dá)水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不同分化程度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況晚期非小細(xì)胞肺癌患者血清中miRNA-135a的表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.646、5.484、5.531，P＜0.01）。不同分化程度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況晚期非小細(xì)胞肺癌患者的血清TGF-α水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.655、7.959、4.203，P＜0.01）。（表2）

2.3 晚期非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后影響因素的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析

miRNA-135a和TGF-α均為具體數(shù)值。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析結(jié)果顯示，分化程度為低分化、TNM分期為Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TGF-α高表達(dá)為晚期非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，miRNA-135a高表達(dá)為晚期非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立保護(hù)因素。（表3）

表2 不同臨床特征晚期非小細(xì)胞肺癌患者血清中miRNA-135a、TGF-α的表達(dá)水平（n =87）

表3 87例晚期非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后影響因素的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析

2.4 晚期非小細(xì)胞肺癌患者血清中miRNA-135a、TGF-α表達(dá)水平與無(wú)疾病進(jìn)展生存期的關(guān)系

隨訪期間，87例晚期非小細(xì)胞肺癌患者中，有26例患者死亡（其中包括miRNA-135a高表達(dá)者4例，miRNA-135a低表達(dá)者22例；TGF-α高表達(dá)者23例，TGF-α低表達(dá)者3例）。miRNA-135a低表達(dá)患者的中位無(wú)疾病進(jìn)展生存期短于miRNA-135a高表達(dá)患者，TGF-α高表達(dá)患者的中位無(wú)疾病進(jìn)展生存期短于TGF-α低表達(dá)患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表4）

表4 miRNA-135a、TGF-α表達(dá)水平與87例晚期非小細(xì)胞肺癌患者無(wú)疾病進(jìn)展生存期的關(guān)系

3 討論

非小細(xì)胞肺癌嚴(yán)重威脅著患者的健康與生命，具有發(fā)病率和病死率高的特點(diǎn)，而晚期非小細(xì)胞肺癌患者的無(wú)疾病進(jìn)展生存情況相對(duì)較差，因此，創(chuàng)建完善的預(yù)后系統(tǒng)對(duì)患者臨床治療和生活質(zhì)量的改善極為重要[9-10]。盡管臨床特征對(duì)于評(píng)估晚期非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后情況具有一定的參考價(jià)值，但由于受個(gè)體差異等因素的影響，預(yù)后評(píng)估結(jié)果仍存在一定的偏差[11]。病理組織標(biāo)本已成為惡性腫瘤診治的金標(biāo)準(zhǔn)，但其屬有創(chuàng)操作，且成本較高，不利于患者耐受[12]。血液標(biāo)本較組織標(biāo)本具有創(chuàng)傷性小、成本低、可重復(fù)性高等優(yōu)勢(shì)，能夠直觀地反映機(jī)體的全身狀態(tài)[13]。近年來(lái)，隨著RT-PCR技術(shù)和miRNA基因芯片技術(shù)研究的不斷深入，越來(lái)越多的血清生物標(biāo)志物已逐漸用于肺癌患者的預(yù)后分析[14]。

miRNA為真核生物內(nèi)源性小分子單鏈DNA，其檢出譜系廣，特異性高，能夠避免個(gè)體之間的飲食、性別、年齡等差異。相關(guān)研究已證實(shí)，其可在多種腫瘤的形成中起到重要的作用，通過(guò)靶向調(diào)控mRNA的表達(dá)能夠調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)功能[15]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，明確miRNA類分子標(biāo)志物及其重要的靶基因，可能能夠在肺癌的診治和預(yù)后的評(píng)估方面有新的突破[16-17]。miRNA-135a為miRNA的常見(jiàn)靶序列，能夠通過(guò)激活KLF-8抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的遷徙和轉(zhuǎn)移[18]。Ahmad等[19]研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-135a可下調(diào)多種促血管生長(zhǎng)因子的表達(dá)，抑制腫瘤血管生成，控制腫瘤轉(zhuǎn)移。以上研究表明miRNA-135a表達(dá)的下調(diào)或缺失與腫瘤的發(fā)生有一定的關(guān)系。本研究結(jié)果顯示，晚期非小細(xì)胞肺癌組患者血清中miRNA-135a的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組受試者，且不同分化程度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況晚期非小細(xì)胞肺癌患者的血清miRNA-135a、TGF-α表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明通過(guò)檢測(cè)miRNA-135a表達(dá)水平能夠輔助診斷晚期非小細(xì)胞肺癌，反映患者臨床特征。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析結(jié)果顯示，miRNA-135a高表達(dá)為晚期非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的保護(hù)因素；且生存分析結(jié)果顯示，miRNA-135a低表達(dá)患者的中位無(wú)疾病進(jìn)展生存期短于miRNA-135a高表達(dá)患者（P＜0.05）。這說(shuō)明miRNA-135a表達(dá)水平可一定程度地反映晚期非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后。

惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是個(gè)復(fù)雜多變的過(guò)程，因此，多個(gè)指標(biāo)的檢測(cè)可能較單一指標(biāo)更能客觀地反映腫瘤的進(jìn)展過(guò)程。TGF-α為有絲分裂多肽，較表皮生長(zhǎng)因子（epidermal grow th factor，EGF）有更強(qiáng)的生物學(xué)效應(yīng)，其可通過(guò)鄰分泌、旁分泌及自分泌方式作用于靶細(xì)胞，引起腫瘤耐藥，降低臨床療效[20-21]。TGF-α能夠誘導(dǎo)正常細(xì)胞沿腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化，其結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子受體后能夠激活受體酪氨酸激酶，上調(diào)相關(guān)基因的表達(dá)，影響腫瘤微環(huán)境，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生惡性病變[22]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，晚期非小細(xì)胞肺癌組患者血清中TGF-α的表達(dá)水平相對(duì)較高，且分化程度為低分化、TNM分期為Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的晚期非小細(xì)胞肺癌組患者血清中TGF-α的表達(dá)水平均明顯高于分化程度為中高分化、TNM分期為Ⅲ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的晚期非小細(xì)胞肺癌組患者，提示通過(guò)檢測(cè)TGF-α的表達(dá)情況，不僅能夠有助于對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌的篩查和診斷，還可反映腫瘤的惡性程度。另外，通過(guò)隨訪發(fā)現(xiàn)，TGF-α低表達(dá)的晚期非小細(xì)胞肺癌患者的中位無(wú)疾病進(jìn)展生存期較長(zhǎng)，進(jìn)一步的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析結(jié)果顯示TGF-α高表達(dá)為晚期非小細(xì)胞肺癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示TGF-α與晚期非小細(xì)胞肺癌的預(yù)后有關(guān)。

綜上所述，血清miRNA-135a、TGF-α表達(dá)異常和晚期非小細(xì)胞肺癌患者的無(wú)疾病進(jìn)展生存期有關(guān)，可作為此類患者預(yù)后評(píng)估的參考指標(biāo)。但本研究納入的樣本量較少，且樣本選擇缺乏廣泛性，結(jié)果可能存在一定的偏差；另外，本研究主要分析的是血清miRNA-135a、TGF-α表達(dá)水平與患者無(wú)疾病進(jìn)展生存期的關(guān)系，其與患者預(yù)后的關(guān)系仍有待后續(xù)研究進(jìn)一步證實(shí)。