何茜 穆瓊 郝晟赟 劉富億 劉晗琳 袁媛 邵丹丹

(貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 1全科醫(yī)學(xué)科，貴州 貴陽(yáng) 550002；2急診科；3貴州省腫瘤醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科)

梗死后血管性認(rèn)知障礙(VCI)系指腦血管病及其危險(xiǎn)因素引起輕度認(rèn)知損傷到癡呆的認(rèn)知損傷綜合征，包括血管性認(rèn)知功能障礙非癡呆(VCIND)、血管性癡呆(VD)及混合性癡呆。VCI的高發(fā)病率、高致殘率及高致死率給人們的健康及生命帶來(lái)了嚴(yán)重的威脅〔1〕。研究顯示〔2〕：VCI的發(fā)病及嚴(yán)重程度與載脂蛋白(ApoE)基因多態(tài)性關(guān)系密切。本研究旨在探討VCI與ApoE基因多態(tài)性關(guān)系及血清胱抑素(Cys)C對(duì)VCI監(jiān)測(cè)的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 以2016年1月至2018年6月貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科327例腦梗死住院患者為研究對(duì)象，其中158例AMI患者設(shè)為VCI組，梗死后認(rèn)知功能正?；颊?69例設(shè)為腦梗死認(rèn)知功能正常(CIND)組，兩組在性別、年齡及高血壓、冠心病、糖尿病、飲酒、吸煙構(gòu)成比例上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。見(jiàn)表1。研究對(duì)象均為首次發(fā)病，注意排除嚴(yán)重心、肝、腎內(nèi)科疾患，排除腦梗死外其他系統(tǒng)疾病或腦部疾患所致的認(rèn)知障礙，排除無(wú)法遵從配合患者。研究對(duì)象或家屬均簽署知情同意書(shū)，享有知情權(quán)。

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn) 研究對(duì)象均符合1995年全國(guó)第4次腦血管疾病會(huì)議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，臨床有相關(guān)頭顱CT及磁共振成像(MRI)檢查診斷支持，并根據(jù)蒙特利爾認(rèn)知評(píng)估量表(MoCA)測(cè)試結(jié)果進(jìn)行分組：MoCA總分30分，≥26分為CIND組，<26分為VCI組，受教育年限≤12年加1分校正教育偏差。

1.3研究方法

表1 兩組基本情況比較(n)

1.3.1ApoE基因多態(tài)性檢測(cè) 取靜脈血乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)抗凝，改良碘化鈉法提取白細(xì)胞基因組DNA，PCR擴(kuò)增儀為ABI7500，引物序列P1：5′-AACAACTGACCCCGGT-FFCG-3′，P2：5′-ATGGCGCTGAGGCGCTC-3′。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性15 min，冰浴加Taq DNA聚合酶2 U，10 000 r/min離心30 s，95℃1 min→75℃3 min循環(huán)5次，95℃1 min→65℃→75℃1 min循環(huán)20次，75℃10 min凝膠糖瓊脂電泳。ApoE基因酶切10%聚丙烯酰胺凝膠電泳、銀染。ApoE等位基因頻率計(jì)算公式PA=x/2n，其中PA：等位基因的頻率，n：患者總數(shù)，x：A 等位基因的數(shù)目。

1.3.2CysC、血脂血清檢測(cè) 取靜脈血肝素鈉抗凝離心分離血清檢測(cè)CysC及血脂〔三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)〕，全自動(dòng)生化分析儀為HITACH7600，試劑由寧波美康生物有限公司提供，當(dāng)日室內(nèi)質(zhì)控保證結(jié)果的有效性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、方差分析、SNK-q檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組研究對(duì)象ApoE基因型頻率及等位基因頻數(shù)比較 ε4/4基因型頻率VCI組顯著高于CIND組(P<0.05)，ApoE等位基因頻數(shù)VCI組ε4顯著高于CIND組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.2各組CysC及血脂水平比較 各組CysC、TC、LDL水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，組間兩兩比較，CysC在ε4基因攜帶者、VCI組、非ε4基因攜帶者及CIND組依次降低，任意組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；ε4基因攜帶者血清TC顯著高于其他三組(P<0.05)，其他三組TC水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；CIND組及非ε4基因攜帶者LDL水平顯著低于VCI組，ε4基因攜帶者LDL水平顯著高于其他三組(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表2 兩組ApoE基因型頻率及等位基因頻數(shù)分布比較〔n(%)〕

表3 各組CysC及血脂水平比較

與VCI組比較:1)P<0.05；與CIND組比較:2)P<0.05；與非ε4基因攜帶者比較:3)P<0.05

3 討 論

ApoE為一種多態(tài)性蛋白，主要參與脂蛋白的代謝及轉(zhuǎn)化，臨床研究顯示〔3〕：ApoE蛋白的多態(tài)性主要由其基因多態(tài)性所決定。ApoE編碼基因位于第19號(hào)染色體長(zhǎng)臂13區(qū)2帶，其多態(tài)性源于第4號(hào)外顯子編碼112位、158位氨基酸密碼子表達(dá)ε2 、ε3、ε4 3種等位基因及ε2/2，ε2/3，ε3/3，ε2/4，ε3/4，ε4/4 6種基因型。ApoE基因多態(tài)性具有重要的生物學(xué)意義，目前在心腦血管病領(lǐng)域逐漸成為臨床研究的熱門(mén)課題。有研究證明〔4～6〕：多種常見(jiàn)的心腦血管疾病諸如：動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、腦血管的淀粉樣變性等均與ApoE基因多態(tài)性關(guān)系密切。VCI為血管及其相關(guān)因素引起認(rèn)知功能障礙，與老年性癡呆綜合征比較，VCI為一更為廣闊的定義，其涵蓋了血管源性認(rèn)知損傷的整個(gè)漸進(jìn)性過(guò)程〔7〕。VCI的早期診治對(duì)老年性癡呆的預(yù)防及延緩均有重要的臨床意義，有學(xué)者認(rèn)為〔8〕：VCI的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)與ApoE基因的多態(tài)性密切相關(guān)。

ApoE生理功能主要在于作為乳糜微粒殘基受體及低密度脂蛋白受體的配基介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)脂蛋白的攝取。ApoEε3基因編碼112位為半胱氨酸，158位為精氨酸，ApoEε2 158位則被半胱氨酸取代，ApoEε4第112位為精氨酸。氨基酸表達(dá)的差異性決定了ApoE蛋白N端對(duì)受體結(jié)合的活性改變，其中以ApoEε4活性最高〔9〕，ApoEε4活性增高，可造成大量脂質(zhì)內(nèi)吞，增加機(jī)體的膽固醇水平，并加重血管硬化〔10〕。本研究數(shù)據(jù)支持上述觀點(diǎn)，ε4基因攜帶者血清TC及LDL均高于其他三組。有研究證明〔11〕：ε4等位基因攜帶者罹患易損斑塊的概率相對(duì)其他等位基因更高，其體內(nèi)的慢性炎性狀態(tài)也更為顯著。

CysC為半胱氨酸蛋白酶抑制劑，廣泛地存在于體液及組織的有核細(xì)胞中，調(diào)節(jié)機(jī)體蛋白水解酶的活性，對(duì)組織蛋白酶B有強(qiáng)烈的抑制作用。Ghidoni等〔12〕研究認(rèn)為CysC老年人的認(rèn)知功能關(guān)系密切，其血清水平的升高為VCI的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。有研究證明〔13〕：ε4基因與CysC均能增加血清TC、LDL而加重動(dòng)脈粥樣硬化，增加VCI風(fēng)險(xiǎn)，早期VCI患者僅表現(xiàn)為輕度的認(rèn)知功能下降，早期隱匿性臨床癥狀易導(dǎo)致VCI患者發(fā)生漏診，未形成癡呆的早期VCI具有可逆性，早期的診斷尤為重要，CysC水平的監(jiān)測(cè)對(duì)于VCI的早期診斷及發(fā)病概率的預(yù)測(cè)有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

綜上，ApoEε4腦梗死患者更容易發(fā)生VCI，CysC水平的監(jiān)測(cè)對(duì)于VCI的早期診斷及發(fā)病概率的預(yù)測(cè)有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。