張曉妍

關(guān)鍵詞：垂體激素缺乏癥;PROP1;生長激素;促甲狀腺激素;催乳素

中圖分類號：R730? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標(biāo)識碼：B? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.07.063

文章編號：1006-1959（2019）07-0191-02

垂體激素缺乏癥（combined pituitary hormone deficiency，CPHD）在臨床主要是由于外傷、嚴(yán)重缺氧、手術(shù)期間損傷以及慢性疾病所造成的垂體活性抑制性疾病[1]。從生物學(xué)角度分析[2]，人體的垂體組織是由口腔頂部外胚層發(fā)育而來，一般在患者的胚胎發(fā)育第9天，形成垂體基板，同時隨著口腔外胚層的內(nèi)陷，逐步形成垂體囊原基，同時，在胚胎發(fā)育第12天，囊原基閉合從口腔外胚層進行分離，通過各種轉(zhuǎn)錄因子和信號通道在患者的垂體背部形成梯度分布，最終分化為多個細胞體系[3]。在近年來的研究中發(fā)現(xiàn)[4]，垂體特異性轉(zhuǎn)錄因子祖先蛋白（Prophet of Pit-1，PROP1）缺陷是該疾病在人群中最為常見的病因之一，且在家族遺傳性垂體激素缺乏癥患者的檢出率最高。PROP1基因在胚胎發(fā)育的不同時期通過對細胞出現(xiàn)的時間和空間進行調(diào)控，最終促使其分化為垂體激素分泌細胞[5]。而人類的PROP1基因主要是由3個外顯子以及2個內(nèi)顯子組成，由上述外顯子和內(nèi)顯子共同組成人體的垂體分泌細胞結(jié)構(gòu)域，當(dāng)人提的該結(jié)構(gòu)域發(fā)生突變或者缺陷時，則會導(dǎo)致機體生長激素（GH）、促甲狀腺激素（TSH）以及催乳素（PRL）的分泌異?；蛉狈?，以上生長發(fā)育的重要激素的缺乏在不同的生長發(fā)育階段表現(xiàn)為嚴(yán)重的年齡差異，80%的患者可表現(xiàn)為生長發(fā)育遲緩[6]，青春期腎上腺皮質(zhì)功能表現(xiàn)為進行性加重。本研究將通過2個非血緣關(guān)系家系的3例CPHD的PROP1基因缺失研究，為臨床提供科學(xué)依據(jù)。

1 臨床資料

研究對象為3例腎上腺激素缺乏患者，女性患者2例，男性患者1例，其中2例女性患者的就診年齡分別為15歲、16歲，男性患者就診年齡為22歲。為研究方便，將以上患者按照年齡大小依次編號為A、B、C，其中，A、B患者為單卵雙生，于3歲發(fā)現(xiàn)身材矮小，生長速度緩慢，其生長速度平均為1～2 cm/年，剖腹產(chǎn)生產(chǎn)，生產(chǎn)過程中未見宮內(nèi)窘迫以及嚴(yán)重缺氧，父母存在近親結(jié)婚史，父母身高及智力正常，A、B 2例患者經(jīng)血液檢查，均存在血清甲狀腺激素、促甲狀腺激素、性激素以及促腎上腺皮質(zhì)激素分泌降低等現(xiàn)象，經(jīng)骨齡測定，2例患者的骨齡均為3.5歲，C患者為男性，于7歲發(fā)現(xiàn)生長發(fā)育遲緩，生長發(fā)育遲緩，年平均生長速度為2～3 cm，患者足月生產(chǎn)，生產(chǎn)過程中均無窒息、窘迫等疾病史，父母近親結(jié)婚，性功能發(fā)育遲緩，男性體征不明顯，患者經(jīng)血液檢查，患者的甲狀腺功能異常，生長激素正常，性激素分泌降低，且患者的骨齡測定顯示，患者的骨齡測定為10歲。3例患者經(jīng)生長激素治療后，身高均升高2～3 cm，提示垂體激素、生長激素分泌異常?？崭钩槿?例患者的血液5 ml，加入抗凝劑后，對患者樣品進行細胞裂解液處理，混勻，離心（3600 r/min，15 min），取下層液體加入緩沖液混勻，56 ℃水浴10 min，混勻，使用500 ml異丙醇混勻，再次離心，棄去上清液，加入500 ml乙醇溶液混勻后繼續(xù)離心，棄去上清液，干燥提取DNA，加入200 μl緩沖溶液TB，65℃加熱1 h，充分溶解DNA備檢。使用實時熒光定量PCR儀器，使用引物為5'-ACCTACACACACATTGAGAGACAG-'3進行DNA擴增[7]，同時，通過使用geneloc對患者的基因進行PROP1基因探查。使用瓊脂糖凝膠進行電泳實驗，以正常人體的靶基因作為對照，正常人體的提取DNA進行引物為5'-ACCTACACACACATTGAGAGACAG-'3，對正常人以及患者的PROP1基因的側(cè)翼進行擴增分析，擴增方法分別從5'以及3'的上游和下游進行，擴增結(jié)束以患者的相鄰序列出現(xiàn)“-”到“+”轉(zhuǎn)變?yōu)橹埂Ｔ谡Ｈ梭w中均發(fā)現(xiàn)GDB：314805STS、F4、F5、F1、F2、F3、RH102778STS、HR1、HR2、SQ1、SQ2、SQ3、SQ4、SQ5、SQ6、 SQ7、 HUMC5597STS、Q6ZTH3EXON1、SHGC-147122STS等基因片段，而在本研究患者中僅出現(xiàn)F5基因片段，而在SHGC-147122STS和Q6ZTH3EXON1基因片段中，PROP1基因外顯子1出現(xiàn)明顯擴增，患者出現(xiàn)基因缺失片段就在該位置，進而對SHGC-147122STS和Q6ZTH3EXON1之間的基因片段進行再次擴增，發(fā)現(xiàn)正常人體和3例患者的SQ2、SQ3、SQ5、SQ6、SQ7基因片段大小一致?；颊叩腟Q1、SQ4基因片段與正常人體出現(xiàn)明顯的差異。3例患者的電泳結(jié)果顯示均未出現(xiàn)SQ1基因片段的目標(biāo)條帶。A、C患者電泳結(jié)果顯示出現(xiàn)拷貝量較小的SQ4基因片段，而B患者電泳結(jié)果顯示未出現(xiàn)SQ4基因片段。根據(jù)整體的基因擴增實驗，以PROP1基因以及PROP1基因的側(cè)翼進行檢測，患者的缺失基因大小為53kb。

2討論

研究顯示，轉(zhuǎn)錄因子PROP1基因以及PROP1基因的側(cè)翼的缺失是CPHD最為常見的病因之一[9]。國外有學(xué)者對該疾病的研究中指出[10]，在對患者的集中監(jiān)測中發(fā)現(xiàn)，患者的PROP1基因以及PROP1基因的側(cè)翼的缺失占總體患者的18.3%[11]，其中對垂體激素分泌異常家族史患者的的檢測中，PROP1基因以及PROP1基因的側(cè)翼的缺陷占比達到47.1%[12]，針對散發(fā)患者的研究中指出，PROP1基因以及PROP1基因的側(cè)翼的缺陷約站整體患者的13.2%[13]，提示垂體激素分泌異常的患者具有一定的家族遺傳傾向。