許 斌 姜彥多 孟 媛

作者單位：113008 遼寧省撫順市中心醫(yī)院

肺癌是當(dāng)今全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病與患病在眾多國(guó)家都有增高趨勢(shì)[1-2]；但是肺癌患者的早期診斷與發(fā)現(xiàn)一直是臨床與預(yù)防領(lǐng)域的難題，很多患者首診已經(jīng)是肺癌中晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)機(jī)，對(duì)于患者的預(yù)后造成嚴(yán)重不良影響[3-4]。研究提示，早期診斷對(duì)于提高患者生存率至關(guān)重要，隨著相關(guān)學(xué)科的發(fā)展，腫瘤標(biāo)志物的無(wú)創(chuàng)檢測(cè)技術(shù)也取得了進(jìn)步與發(fā)展，其中通過(guò)分泌物的端粒酶催化基團(tuán)mRNA測(cè)評(píng)，對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)和診斷肺癌應(yīng)該具有重要臨床價(jià)值[5]。目前端粒酶催化基團(tuán)mRNA的測(cè)定更多集中于組織活檢的測(cè)定以及血液中的測(cè)定[6-7]，痰液中進(jìn)行端粒酶催化基團(tuán)mRNA測(cè)定更具無(wú)創(chuàng)性，本研究即擬就痰中端粒酶催化基團(tuán)mRNA表達(dá)與肺癌發(fā)生及進(jìn)展的相關(guān)性進(jìn)行分析討論。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取本院2014年1月至2016年6月間本院首診的確診肺癌患者75例納入研究，并對(duì)患者進(jìn)行為期1年的隨訪；同時(shí)選取同期可比的普通肺炎患者100例納入研究作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：確診的肺癌患者，均為首診患者，且入組時(shí)未接受過(guò)任何形式的肺癌治療干預(yù)，受試對(duì)象知情同意，病歷資料完整，且能配合研究和隨訪的進(jìn)行。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往診斷為肺癌的患者或復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的肺癌患者，其他惡性腫瘤患者，各種原因不能配合研究和隨訪進(jìn)行的受試對(duì)象。研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后進(jìn)行。

1.2 研究方法

留取受試對(duì)象痰液，并存放于無(wú)菌器皿中，經(jīng)無(wú)菌生理鹽水沖洗后離心，加入2%的溴己新注射液5 ml液化痰液，離心去上清，收集沉淀細(xì)胞備用。使用PCR法測(cè)定端粒酶mRNA以及端粒酶催化基團(tuán)mRNA表達(dá)陽(yáng)性情況。比較肺癌患者與健康人，以及患者中隨訪檢出的不同病情進(jìn)展?fàn)顟B(tài)的3組患者之間的表達(dá)陽(yáng)性差異。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 受試對(duì)象一般情況

肺癌患者與健康對(duì)照組的年齡(62.83±6.35 vs 62.39±6.26)和性別分布(39/36 vs 54/46)均衡可比，差別未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。肺癌患者中鱗癌患者36例(48.00%)，腺癌患者9例(12%)，小細(xì)胞癌患者30例(40.00%)；此外隨訪1年，患者的病情控制良好或好轉(zhuǎn)的檢出16例(21.33%)，隨訪中惡化或進(jìn)展的患者共53例(70.67%)，另外隨訪檢出6例患者死亡(8.00%)。

2.2 2組受試對(duì)象痰中端粒酶催化基團(tuán)mRNA表達(dá)比較

與健康對(duì)照比較，肺癌患者的痰中端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA表達(dá)均高于健康對(duì)照，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，詳見(jiàn)表1所示。提示肺癌病理背景下痰中端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA表達(dá)增高，痰中的端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA陽(yáng)性檢出具有提示肺癌的腫瘤標(biāo)志價(jià)值。

表1 受試對(duì)象痰中端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA表達(dá)比較(例，%)

2.3 隨訪期病情狀態(tài)不同的肺癌患者痰中端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA陽(yáng)性表達(dá)情況比較

與病情控制良好或好轉(zhuǎn)患者比較，病情惡化或進(jìn)展的患者以及出現(xiàn)死亡的患者痰中端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA表達(dá)陽(yáng)性率均更高，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。提示肺癌病情進(jìn)展甚至死亡均與痰中端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA表達(dá)增高存在關(guān)聯(lián)，痰中的端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA高陽(yáng)性率提示病情惡化及不良的預(yù)后。

表2 肺癌患者痰中端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA表達(dá)與肺癌控制情況的相關(guān)性(例，%)

*為與病情控制良好或好轉(zhuǎn)患者比較，P<0.05。

3 討論

端粒是真核生物染色體末端的一段串聯(lián)復(fù)制序列，近年來(lái)隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，逐漸被關(guān)注，并發(fā)現(xiàn)其與多種慢性疾病、衰老等生理病理過(guò)程密切聯(lián)系[7-8]。端粒本身的生物學(xué)效應(yīng)是對(duì)細(xì)胞的壽命、發(fā)育以及分化等進(jìn)行調(diào)節(jié)，類似于細(xì)胞的生物鐘；端粒酶具有RNA依賴性，同時(shí)還具有DNA合成酶活性，能夠以自身攜帶的RNA為模板，完成端粒重復(fù)序列的合成，因此研究者們目前認(rèn)為阻止端粒的縮短，能夠達(dá)到使細(xì)胞永生的效果[9-10]。

在端粒與腫瘤的相關(guān)研究中，我們發(fā)現(xiàn)小細(xì)胞肺癌腫瘤組織的端粒酶活性的陽(yáng)性率很高，在胸腔的惡性積液中也發(fā)現(xiàn)了較高的陽(yáng)性水平[11]。由此推斷，在患者的痰液以及脫落細(xì)胞中也應(yīng)該能檢測(cè)到端粒酶的陽(yáng)性表達(dá)，并可以據(jù)此反推腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展?fàn)顟B(tài)，但相關(guān)研究尚不多[12]。本次研究選取首診的確診肺癌患者75例納入研究，并對(duì)患者進(jìn)行為期1年的隨訪；研究同時(shí)選取同期可比的普通肺炎患者100例納入研究作為對(duì)照組。收集受試對(duì)象痰液，分析痰中端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA表達(dá)與肺癌發(fā)生及進(jìn)展的相關(guān)性情況。通過(guò)比較患者治療前痰液標(biāo)本發(fā)現(xiàn)，肺癌患者的痰中端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA表達(dá)均高于健康對(duì)照組，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；肺癌患者痰中端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA表達(dá)陽(yáng)性率分別達(dá)到了66.67%和71.56%。進(jìn)一步比較不同隨訪病情狀態(tài)的患者痰中端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA表達(dá)陽(yáng)性情況，可見(jiàn)與病情控制良好或好轉(zhuǎn)患者比較，病情惡化或進(jìn)展的患者以及出現(xiàn)死亡的患者痰中端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA表達(dá)陽(yáng)性率均更高，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。

痰液脫落細(xì)胞檢查是早期發(fā)現(xiàn)肺癌的1種傳統(tǒng)方式，但痰液標(biāo)本中的腫瘤細(xì)胞數(shù)量很少，同時(shí)還會(huì)混在各種炎性因子等，給預(yù)測(cè)腫瘤的存在與進(jìn)展帶來(lái)困難；PCR技術(shù)的出現(xiàn)與發(fā)展，能從標(biāo)本中檢出微量基因，且具有較好的靈敏度與特異度[13]，因此成為越來(lái)越多的分子生物學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)方法之一。本研究結(jié)果提示肺癌病理背景下痰中端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA表達(dá)增高，痰中的端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA陽(yáng)性檢出具有提示肺癌的腫瘤標(biāo)志價(jià)值。同時(shí)，肺癌病情進(jìn)展甚至死亡均與痰中端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA表達(dá)增高存在關(guān)聯(lián)，痰中的端粒酶及其催化基團(tuán)mRNA高陽(yáng)性率提示病情惡化及不良的預(yù)后。

另外，無(wú)論是組織中，還是外周血中，抑或是痰液等分泌物中的端粒酶催化基團(tuán)mRNA表達(dá)與肺癌的發(fā)生與進(jìn)展存在關(guān)聯(lián)，其內(nèi)在機(jī)制均與p53基因突變密切關(guān)聯(lián)[14]。相關(guān)機(jī)理以及通路等詳情有待今后繼續(xù)縱深研究。