董碧蓮，蔡延渠，呂 莉，朱志東，朱盛山

（廣東藥科大學(xué)新藥研發(fā)中心，廣東 廣州 510006）

多糖是指由10 個(gè)以上單糖通過苷鍵聚合形成的一種天然生物大分子，其相對(duì)分子質(zhì)量可達(dá)數(shù)萬甚至數(shù)百萬，是一類重要的生物信息大分子，廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi)，為高等植物和動(dòng)物細(xì)胞膜、微生物細(xì)胞壁中的重要組成物質(zhì)［1］；中藥多糖則是指從動(dòng)、植物體內(nèi)和微生物中分離的活性多糖成分的總稱［2］，目前已有近百種被分離提取鑒定出來，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗疲勞、抗炎、降血糖、降血脂、抗腫瘤、抗病毒等藥理作用，加之毒副作用小、不易造成殘留等優(yōu)點(diǎn)，其結(jié)構(gòu)及功能的研究已成為繼蛋白質(zhì)、核酸研究之后探索生命奧秘的又一重要里程碑［1，3］。

本文通過查閱中國(guó)知網(wǎng)、維普、萬方等數(shù)據(jù)庫(kù)近10年來中藥多糖增強(qiáng)免疫、抗疲勞作用的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)黃芪多糖、人參多糖、香菇多糖等均具有很強(qiáng)的，但尚無比較其藥理活性強(qiáng)弱。因此，將分別整理中藥多糖增強(qiáng)免疫作用、抗疲勞作用的實(shí)驗(yàn)性研究數(shù)據(jù)，以期通過各評(píng)價(jià)指標(biāo)的最低有效劑量來比較該類成分的藥理活性強(qiáng)度。

1 增強(qiáng)免疫作用

中藥多糖不僅參與細(xì)胞骨架構(gòu)成，也是多種內(nèi)源性生物活性分子的重要組成部分，其主要藥理作用之一是調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，可增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫及體液免疫功能，促進(jìn)淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、造血干細(xì)胞生理功能，從而使機(jī)體免疫平衡達(dá)到健康平和的狀態(tài)［4］。

免疫系統(tǒng)包括特異性免疫、非特異性免疫2 大部分，無論免疫增強(qiáng)或免疫抑制藥都可能在機(jī)體免疫過程中的不同環(huán)節(jié)起到作用，故要對(duì)涉及免疫過程主要環(huán)節(jié)的多種實(shí)驗(yàn)方法及觀察指標(biāo)進(jìn)行研究，至少觀察非特異性免疫、體液免疫、細(xì)胞免疫各1種，才能初步肯定該藥物對(duì)免疫功能的作用。目前，常用的影響非特異性免疫功能方法有免疫器官重量法、胸腺和脾臟細(xì)胞計(jì)數(shù)、外周白細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞吞噬功能測(cè)定等；測(cè)定體液免疫功能的方法有溶血素測(cè)定單向免疫擴(kuò)散等；外周血T 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)、淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒試驗(yàn)天然殺傷（NK）細(xì)胞活動(dòng)等是測(cè)定細(xì)胞免疫功能的方法［5］。

1.1 正常小鼠 一般選用體質(zhì)量18～22 g 的成年昆明小鼠用于增強(qiáng)免疫作用實(shí)驗(yàn)，飼養(yǎng)溫度 22～25 ℃，相對(duì)濕度40%～70%，給予標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物飼料，自由攝食飲水，于正式實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)喂養(yǎng)1 周，高、中、低劑量組分別每天灌胃給予1 次相應(yīng)劑量多糖溶液，對(duì)照組則灌胃給予相同體積蒸餾水，連續(xù)30 d。常用的非特異性免疫功能檢測(cè)指標(biāo)有脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、外周白細(xì)胞數(shù)、吞噬指數(shù) α；體液免疫功能指標(biāo)有溶血素抗體水平；細(xì)胞免疫功能指標(biāo)有脾淋巴細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞因子生成、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)等，再通過比較各指標(biāo)呈顯著性差異的最低劑量（即最低有效劑量）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果見表1。

1.2 免疫低下小鼠 動(dòng)物選擇同 “1.1”項(xiàng)，在適應(yīng)性喂養(yǎng)后建立小鼠免疫低下模型，一般80 mg／（kg·d）環(huán)磷酰胺連續(xù)腹腔注射 3 d［19］，造模完成后設(shè)置高、中組、低劑量組，每天灌胃給予1 次相應(yīng)劑量多糖溶液，模型組則灌胃給予相同體積蒸餾水，連續(xù)30 d，空白對(duì)照組正常小鼠給予飼料和水，再按 “1.1”項(xiàng)下方法檢測(cè)指標(biāo)，分析數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)最低劑量。結(jié)果見表2。

表1 中藥多糖對(duì)正常小鼠增強(qiáng)免疫作用的最低劑量［mg／（kg·d）］

表2 中藥多糖對(duì)免疫抑制小鼠增強(qiáng)免疫作用的最低劑量［mg／（kg·d）］

2 抗疲勞作用

疲勞是指機(jī)體生理過程不能將其機(jī)能持續(xù)在一特定水平，或各器官不能維持其預(yù)定運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的機(jī)體復(fù)雜生理生化過程。中藥多糖可通過促進(jìn)糖原合成、減少運(yùn)動(dòng)代謝產(chǎn)物、增加耐缺氧能力等方面來高肌體的抗疲勞能力，對(duì)于預(yù)防與消除運(yùn)動(dòng)性疲勞有重要作用［46］。

中藥多糖的抗疲勞作用可通過測(cè)定相關(guān)指標(biāo)來體現(xiàn)，如小鼠持續(xù)運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間可以反映小鼠耐力，由負(fù)荷運(yùn)動(dòng)引起的小鼠機(jī)體相關(guān)生化指標(biāo)變化可反映其疲勞程度，較常用的指標(biāo)主要有乳酸（LAC）、超氧化物歧化酶（SOD）、尿素氮（BUN）、肌酸激酶（CK）、丙二醛（MDA）、乳酸脫氫酶活力（LDH）、糖原、DNA 損傷、睪酮、皮質(zhì)醇、兒茶酚胺等，其中乳酸被認(rèn)為是判斷疲勞程度、有氧代謝能力、控制運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度等因素的重要指標(biāo)之一，而DNA 損傷、睪酮、皮質(zhì)醇、兒茶酚胺等因檢測(cè)難度較大，目前中醫(yī)藥相關(guān)實(shí)驗(yàn)中較少用到［47］。

2.1 正常小鼠 動(dòng)物選擇同 “1.1”項(xiàng)，適應(yīng)性喂養(yǎng)后設(shè)置高、中、低劑量組，每天灌胃給予1 次相應(yīng)劑量多糖溶液，對(duì)照組則灌胃給予相同體積蒸餾水，連續(xù)30 d，于末次給藥后30 min 取血，測(cè)定相關(guān)指標(biāo)，統(tǒng)計(jì)最低劑量。結(jié)果見表3。

表3 中藥多糖對(duì)正常小鼠抗疲勞作用的最低劑量［mg／（kg·d）］

2.2 力竭小鼠 動(dòng)物選擇同 “1.1”項(xiàng)，在適應(yīng)性喂養(yǎng)后建立小鼠力竭模型，一般通過5 周游泳訓(xùn)練，在灌服藥物的同時(shí)每周訓(xùn)練 6 d，游泳時(shí)間從第1 周的 30 min 遞增10 min，到第 4 周的每天 60 min 后持續(xù) 1 周，小鼠在 5 周過度運(yùn)動(dòng)后導(dǎo)致機(jī)體中葡萄糖、糖原等能源耗盡，由于血清乳酸和血尿素等代謝物過度積累，從而引起疲勞［82，84］。然后，設(shè)置高、中、低劑量組，在疲勞訓(xùn)練的同時(shí)分別每天灌胃給予1 次相應(yīng)劑量多糖溶液，模型組則灌胃給予相同體積蒸餾水，空白對(duì)照組正常小鼠給予飼料和水，于末次給藥后30 min 取血，測(cè)定相關(guān)指標(biāo)，統(tǒng)計(jì)最低劑量。結(jié)果見表4。

表4 中藥多糖對(duì)力竭小鼠抗疲勞作用的最低劑量［mg／（kg·d）］

3 結(jié)果

在中藥多糖對(duì)正常小鼠增強(qiáng)免疫作用實(shí)驗(yàn)中，香菇、蘆薈、馬齒莧、板藍(lán)根、黃芪、青蒿多糖效果較強(qiáng)，其最低有效劑量均≤50 mg／（kg·d），而川牛膝、灰樹花、酸棗、云芝、紅芪多糖效果一般，均≤400 mg／（kg·d）；對(duì)免疫力低下小鼠增強(qiáng)免疫作用實(shí)驗(yàn)中，黃芪、香菇、青蒿、石見穿紅多糖、枸杞、靈芝多糖最低有效劑量均接近50 mg／（kg·d），以黃芪、香菇多糖的效果最強(qiáng)，而白花蛇舌草、木蹄層孔菌、地衣、杜仲葉、蓮子多糖也均為100 mg／（kg·d）。

在中藥多糖對(duì)正常小鼠抗疲勞作用實(shí)驗(yàn)中，五味子、黃芪、滁菊、褚實(shí)、黃蘑、枸杞多糖效果較強(qiáng)，其最低有效劑量均＜50 mg／（kg·d），而蘆薈、地錦草、何首烏、黃秋葵、姬松茸、土黨參、人參多糖也均為 100 mg／（kg·d）；對(duì)力竭小鼠的抗疲勞作用實(shí)驗(yàn)中，白靈菇、龍眼、敗醬草、五味子、當(dāng)歸、竹蓀、紅棗多糖 最 低有效劑量 均為100 mg／（kg·d）。

4 結(jié)語

本文從中藥多糖增強(qiáng)免疫、抗疲勞作用出發(fā)，分別以正常動(dòng)物、病理模型動(dòng)物分組，整理出該成分對(duì)體內(nèi)相關(guān)指標(biāo)的最低有效劑量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，香菇、黃芪多糖有較強(qiáng)的增強(qiáng)免疫、抗疲勞作用，而人參、太子參、石斛、黨參多糖等效果一般；同種多糖在相同動(dòng)物模型下的有效劑量相差較大，如對(duì)正常小鼠增強(qiáng)免疫作用中的黃芪多糖，以及對(duì)正常小鼠抗疲勞作用中的黃芪、五味子、枸杞、黃精多糖等，其中在對(duì)正常小鼠的抗疲勞作用中，黃芪多糖3個(gè)有效劑量［12.5、50、400 mg／（kg·d）］效果之差高達(dá)30 多倍，來源分別為市購(gòu)（含有量70%）、實(shí)驗(yàn)室自制、長(zhǎng)白山黃芪自制，可能因純度、藥材產(chǎn)地、提取方法等因素影響了其藥效［50，58-59］。

通過查閱大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，增強(qiáng)免疫、抗疲勞作用實(shí)驗(yàn)中存在動(dòng)物模型單一、評(píng)價(jià)指標(biāo)有限、多糖含有量差異大、缺乏考察最佳劑量等問題，各劑量組中的最低有效劑量是否為多糖最低有效劑量或最佳劑量也有待進(jìn)一步探討。我國(guó)中藥資源豐富，中藥多糖在增強(qiáng)免疫、抗疲勞作用方面有很廣闊的應(yīng)用前景，本文整理了常見中藥多糖相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，對(duì)人們用藥選擇與后期研究具有重要的參考價(jià)值。