趙 諍 張美華

（廣元市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 廣元 628000）

目前，前哨淋巴結(jié)（SLN）活檢術(shù)是腋淋巴結(jié)陰性早期乳腺癌的標(biāo)準(zhǔn)術(shù)式。快速、準(zhǔn)確的進(jìn)行SLN診斷，通過(guò)一次手術(shù)完成腋淋巴結(jié)清掃術(shù)，可有效避免二次手術(shù)。術(shù)后連續(xù)切片是診斷SLN的金標(biāo)準(zhǔn)，而術(shù)中診斷方法的優(yōu)劣尚無(wú)定論，既往主要采用細(xì)胞印片、冷凍切片和快速免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行SLN的術(shù)中病理診斷，但假陰性率較高。近年來(lái)，分子診斷技術(shù)因較高的靈敏度和特異度而備受關(guān)注。本研究中66例乳腺癌患者均采用GeneSearchTM核糖核酸（RNA）樣本制備試劑盒進(jìn)行SLN檢測(cè)，現(xiàn)就術(shù)中分子診斷情況報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：我院乳腺病中心2013年1月至2015年8月收治乳腺癌患者共66例（SLN活檢標(biāo)本122枚，1.85枚/例），年齡28～76歲，平均年齡（49.2±6.6）歲；其中浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌49例，導(dǎo)管原位癌11例，浸潤(rùn)性小葉癌4例，透明細(xì)胞癌1例，黏液癌1例。按照倫理委員會(huì)批準(zhǔn)的研究方案和赫爾辛基宣言，計(jì)劃接受SLNB的患者均簽署知情同意書(shū)；有同側(cè)腋窩手術(shù)史的患者不予納入。

1.2 方法。SLN處理：均垂直于長(zhǎng)軸進(jìn)行切割，厚度為2.0 mm；奇數(shù)組織塊行冰凍及石蠟組織學(xué)檢測(cè)，偶數(shù)組織塊行BLN檢測(cè)。冰凍及石蠟組織學(xué)檢測(cè)：SLN組織塊各取切片3張，切片厚度為6 μm。剩余組織進(jìn)行HE染色，表明、200 μm、500μ m 3個(gè)水平切片，厚度為4 μm。以美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)（AJCC）的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)作為診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，轉(zhuǎn)移灶≥2 mm為宏轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移灶0.2～2 mm為微轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移灶≤0.2 mm為孤立性腫瘤細(xì)胞（ITC）。宏轉(zhuǎn)移和（或）微轉(zhuǎn)移為SLN陽(yáng)性，ITC及無(wú)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移為SLN陰性。GeneSearch檢測(cè)：采用GeneSearchTM RNA樣本制備試劑盒在SLN的送檢組織勻漿液中提取RNA，在SmartCycler系統(tǒng)上，基于逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）原理，利用GeneSearchTM 乳腺淋巴結(jié)試劑盒進(jìn)行RNA標(biāo)本檢測(cè)。細(xì)胞角蛋白19（CK-19）、乳腺球蛋白（MG）、膽色素原脫氨酶（內(nèi)部對(duì)照物）納入實(shí)時(shí)RT-PCR，并對(duì)陽(yáng)性和陰性外對(duì)照物進(jìn)行檢測(cè)。循環(huán)閾值（Ct）[2]：“MG≤31和（或）CK-19≤30”為SLN陽(yáng)性。

2 結(jié) 果

122枚SLN中，宏轉(zhuǎn)移16枚，微轉(zhuǎn)移2枚，無(wú)腫瘤轉(zhuǎn)移104枚，無(wú)ITC。GeneSearch檢測(cè)陽(yáng)性18枚，陰性104枚；以組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，GeneSearch檢測(cè)的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值為88.9%（16/18）、96.2%（100/104）、80.0%（16/20）、98.0%（100/102），與組織學(xué)檢測(cè)的總符合率為95.1%（116/122）。見(jiàn)表1。

表1 GeneSearch檢測(cè)與組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果（枚）

3 討 論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要基于TNM分期選擇乳腺癌治療方案，因此淋巴結(jié)狀況的準(zhǔn)確評(píng)估尤為關(guān)鍵。SLN活檢可以反映腋窩淋巴結(jié)情況，同時(shí)還能避免腋窩淋巴結(jié)清掃的不良結(jié)果，術(shù)中SLN評(píng)估亦能避免患者進(jìn)行二次手術(shù)。AJCC標(biāo)準(zhǔn)中，微轉(zhuǎn)移和宏轉(zhuǎn)移均為SLN陽(yáng)性，需行腋窩淋巴結(jié)清掃，ITC一般作為陰性處理。2005年美國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)（ASCO）推薦采用細(xì)胞學(xué)和冰凍組織學(xué)進(jìn)行術(shù)中SLN評(píng)估，雖然診斷特異度高，但細(xì)胞學(xué)的靈敏度低，冰凍組織學(xué)有漏診及毀損標(biāo)本等缺點(diǎn)[3]。如今，采用RT-PCR方法檢測(cè)乳腺癌標(biāo)志物的表達(dá)，用于SLN術(shù)中診斷取得一定成果。其中美國(guó)Veridex公司的GenesearchTM RNA樣本制備試劑盒已獲臨床批準(zhǔn)，利用GeneSearch可對(duì)SLN中的乳腺球蛋白mRNA和CK-19表達(dá)進(jìn)行準(zhǔn)確檢測(cè)。有研究顯示[4]，該方法在是否存在＞0.2 mm轉(zhuǎn)移灶的判定中，敏感度均高于術(shù)中冷凍切片和細(xì)胞印片。采用Genesearch法進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)，可有效彌補(bǔ)取材不足可能導(dǎo)致的假陰性結(jié)果，就Genesearch法本身而言，亦能避免轉(zhuǎn)移腫瘤量少可能出現(xiàn)的假陰性結(jié)果。此外，在中國(guó)大部分醫(yī)院，SLN術(shù)后病理診斷與普通腋淋巴結(jié)無(wú)異，已證實(shí)該方法存在取樣誤差，易導(dǎo)致部分微轉(zhuǎn)移灶出現(xiàn)漏診。國(guó)際多個(gè)指南均推薦對(duì)SLN組織塊進(jìn)行連續(xù)切片或逐層切片，但此種方法耗時(shí)耗力，可行性差。術(shù)中分子診斷則可以對(duì)100%的淋巴結(jié)組織進(jìn)行評(píng)價(jià)，可以克服傳統(tǒng)方法存在的誤差情況。本研究中，GeneSearch檢測(cè)的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、與組織學(xué)檢測(cè)的總符合率分別為88.9%、96.2%、80.0%、98.0%、95.1%，說(shuō)明 GeneSearch檢測(cè)能夠保證SLN術(shù)中診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。需要注意的是，本研究Genesearch檢測(cè)中，有假陰性2例、假陽(yáng)性4例，究其原因可能與轉(zhuǎn)移癌灶分布不均、組織污染、技術(shù)操作等因素相關(guān)。

綜上所述，GeneSearch法具有操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速、準(zhǔn)確性高、可重復(fù)性好等特點(diǎn)，用于SLN術(shù)中診斷具有良好的臨床價(jià)值，值得推廣及運(yùn)用。