李彥鋒，魏芳，周自廣，馬曉煥，勾愛(ài)麗，姚亞瓊，陳文嬌（鄭州市第一人民醫(yī)院，河南鄭州450004）

血管瘤是血管內(nèi)皮細(xì)胞異常增殖所致，多見(jiàn)于嬰幼兒期，目前發(fā)病原因尚不清楚[1］，血管瘤可發(fā)生于體表任何部位，瘤體通常在1歲內(nèi)快速增長(zhǎng)[2］，如果治療不及時(shí)，可致嚴(yán)重的功能障礙或容貌破壞，從而影響患兒身心健康[3-4］。目前臨床上治療血管瘤的方法很多，但均有一定的局限型，本研究以雄性萊亨雞雞冠代替血管瘤的動(dòng)物模型，動(dòng)態(tài)觀察雞冠經(jīng)曲安奈德注射液注射、雙波長(zhǎng)激光照射及兩者聯(lián)合應(yīng)用后血管組織的病理改變，探討3種方法對(duì)血管瘤的影響及機(jī)制，為血管瘤的治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與設(shè)備 美國(guó)Candela公司生產(chǎn)的Cynergy雙波長(zhǎng)激光[即585 nm脈沖染料激光及1 064 nm釔鋁石榴石晶體（Nd：YAG）激光］治療儀，曲安奈德注射液（浙江仙琚制藥股份有限公司，規(guī)格：50 mg/支，產(chǎn)品批號(hào)：20170609），Olympus光學(xué)顯微鏡CX31（日本Olympus公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 6個(gè)月齡雄性萊亨雞30只，體質(zhì)量1.5～2.0 kg，由北京梅里亞維通實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司實(shí)驗(yàn)中心提供。將動(dòng)物隨機(jī)分為A、B、C共3組，每組10只，雞冠色澤紅潤(rùn)，顏色均勻，雞冠厚度一般為6～10 mm，筆者以未處理側(cè)雞冠作為自身對(duì)照。A組：曲安奈德注射實(shí)驗(yàn)組，用2%利多卡因注射液+等量0.9%氯化鈉注射液配置至曲安奈德濃度為1 g/L，抽取藥液，局部常規(guī)消毒，以5號(hào)頭皮針緊貼雞冠邊緣水平刺入，回抽無(wú)血或少量血液后將藥物緩慢注入，作用面積呈直徑1 cm的圓形區(qū)域，藥量達(dá)到表面顏色稍變白即可，每次注入藥量約0.5 mL，注射后按壓3 min。B組：雙波長(zhǎng)激光實(shí)驗(yàn)組，常規(guī)消毒后，取脈沖染料激光波長(zhǎng)585 nm，取脈寬6ms、功率6J/cm2，Nd：YAG激光波長(zhǎng)1064nm，取脈寬15 ms、功率25 J/cm2，光斑直徑 3 mm，光斑重疊率＜10%，作用面積同A組，時(shí)間3～5 sec，使雞冠表面呈紫紅色即可。C組：聯(lián)合應(yīng)用實(shí)驗(yàn)組，先給予曲安奈德注射，間隔30 min后，給予雙波長(zhǎng)激光照射，步驟及方法同前。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 一般情況 各組觀察治療第1、3、7、14天實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況及雞冠大體變化。

1.3.2 HE染色 3組不同方法實(shí)驗(yàn)后，分別在第3、7、14天切取各組雞冠組織塊，10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片，片厚3～4 μm，取部分切片HE染色，行組織病理學(xué)觀察。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，選取各組雞冠組織塊，每張切片隨機(jī)取5個(gè)中倍視野（10×10），計(jì)算毛細(xì)血管平均數(shù)，根據(jù)下面公式，得出毛細(xì)血管減少率。

毛細(xì)血管減少率=（對(duì)照側(cè)毛細(xì)血管平均數(shù)實(shí)驗(yàn)側(cè)毛細(xì)血管平均數(shù)/對(duì)照側(cè)毛細(xì)血管平均數(shù)）×100%

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，全部數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料單向方差分析及配對(duì)t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物狀況良好，觀察期內(nèi)無(wú)死亡。A組雞冠實(shí)驗(yàn)后第1天組織輕度水腫，出現(xiàn)灰白色斑，第3天、第7天、第14天變化不明顯；B組雞冠實(shí)驗(yàn)后第1天組織水腫，出現(xiàn)灰白斑，個(gè)別出現(xiàn)水皰，第3天表面組織輕度壞死結(jié)痂，第7天痂皮逐漸脫落，第14天創(chuàng)面愈合；C組實(shí)驗(yàn)后第1天組織高度水腫，顏色蒼白，局部腫脹，個(gè)別出現(xiàn)水皰，第3天表面組織壞死結(jié)痂，第7天，痂皮脫落，第14天顏色變淡，質(zhì)地變硬、變厚，創(chuàng)面基本愈合。

2.2 HE染色 A組第3天雞冠真皮組織間以水腫為主，毛細(xì)血管減少不明顯，第7天雞冠真皮組織間水腫輕度減輕，毛細(xì)血管略減少，第14天雞冠真皮組織間水腫明顯減輕，毛細(xì)血管減少；B組第3天雞冠組織水腫，表面壞死，炎性滲出物，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，毛細(xì)血管減少，第7天雞冠組織水腫減輕，炎性滲出物減少，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，毛細(xì)血管減少，第14天雞冠組織水腫明顯減輕，膠原纖維輕度增生，毛細(xì)血管明顯減少；C組第3天雞冠組織表面壞死，炎性滲出物，高度水腫，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，毛細(xì)血管明顯減少，第7天雞冠組織水腫輕度減輕，仍有炎性滲出物，炎細(xì)胞減少，毛細(xì)血管明顯減少，第14天雞冠組織大量纖維組織增生，毛細(xì)血管減少效果明顯優(yōu)于其余2組。見(jiàn)圖1。

圖1 各組雞冠組織學(xué)觀察

2.3 毛細(xì)血管減少率 A、B、C組的毛細(xì)血管減少率分別為（68.03±1.80）%、（70.01±2.21）%、（89.63±1.93）%。A、B組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.39P＞0.05），C組與A組、C組與B組之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=34.31，22.09；均P＜0.05）。

3 討論

雞冠組織學(xué)表現(xiàn)與血管瘤相似，雞和人的血紅蛋白光吸收特性基本相同[5］。早在1992年我國(guó)學(xué)者顧瑛等[6］進(jìn)行了相關(guān)研究，認(rèn)為雞冠及肉垂可作為毛細(xì)血管瘤的動(dòng)物模型，由此以雞冠為毛細(xì)血管瘤的動(dòng)物模型是可行的。血管瘤在快速增長(zhǎng)期可能出現(xiàn)潰瘍、出血、感染等并發(fā)癥，因此主張對(duì)血管瘤行早期干預(yù)治療[7］。傳統(tǒng)治療血管瘤的方法包括液氮冷凍、局部硬化劑注射、放射性核素貼敷、淺層X(jué)線照射、口服激素、手術(shù)治療等，這些方法不良反應(yīng)較大，治療后容易出現(xiàn)色素異常，多次治療后更易出現(xiàn)瘢痕，所以在臨床上的使用有一定的局限性。

臨床中瘤體內(nèi)注射糖皮質(zhì)激素治療血管瘤的方法已有多年[8］，曲安奈德做為中效糖皮質(zhì)激素，能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，從而抑制瘤體的增殖，并使血管瘤消退[9］。為避免系統(tǒng)使用糖皮質(zhì)激素對(duì)機(jī)體造成的不良反應(yīng)，臨床上常給予局部瘤體內(nèi)注射治療血管瘤[10］。本研究中僅給予曲安奈德注射液可使雞冠毛細(xì)血管減少，毛細(xì)血管減少率為（68.03±1.80）%，說(shuō)明該療法有治療意義，但該療法的缺點(diǎn)是易致皮膚萎縮，對(duì)于較大的血管瘤，由于治療次數(shù)多，療程長(zhǎng)，易引起系統(tǒng)不良反應(yīng)，如庫(kù)欣綜合征等。

根據(jù)氧合血紅蛋白的吸收峰值，臨床上常用585 nm脈沖染料激光治療血管瘤，但照射深度＜1.5mm，所以對(duì)于較厚的血管瘤療效較差，而1064nm Nd：YAG激光穿透力強(qiáng)，深度可達(dá)4～6 mm，但特異性相對(duì)差，對(duì)正常組織易造成損傷。Cynegy雙波長(zhǎng)激光器應(yīng)用了multiplex技術(shù)，可以將585 nm脈沖染料和1 064 nm Nd：YAG兩種激光按順序相繼發(fā)射，585 nm脈沖染料激光將氧合血紅蛋白轉(zhuǎn)變成為高鐵血紅蛋白，使得靶組織對(duì)Nd：YAG激光的吸收率增加了3～5倍，使1 064 nm的激光可以在低能量密度下達(dá)到療效，從而減少不良反應(yīng)的發(fā)生，增加安全性，減少瘢痕產(chǎn)生，提高療效[11］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示雙波長(zhǎng)激光組可以使毛細(xì)血管減少，毛細(xì)血管減少率為（70.01±2.21）%，與A組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.39，P＞0.05），同樣有治療意義，但由于雙波長(zhǎng)激光穿透深度有限，對(duì)于位于皮膚深部的血管瘤療效欠佳。筆者采用二者聯(lián)合應(yīng)用的方法，以期得到治療血管瘤更好的效果，由本實(shí)驗(yàn)得出，通過(guò)組織學(xué)觀察及計(jì)算，C組毛細(xì)血管減少率為（89.63±1.93）%，毛血血管減少率明顯高于其余2組，C組與A組、C組與B組之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=34.31，22.09；均P＜0.05），說(shuō)明聯(lián)合應(yīng)用的方法對(duì)血管瘤的療效明顯高于單一療法。由此可見(jiàn)聯(lián)合療法治療血管瘤，可明顯提高療效，臨床應(yīng)用時(shí)，推測(cè)可以減少曲安奈德的用量及脈沖激光治療次數(shù)，從而減少不良反應(yīng)的發(fā)生。

本實(shí)驗(yàn)從基礎(chǔ)理論研究，對(duì)雙波長(zhǎng)激光和曲安奈德注射液治療血管瘤的機(jī)制作了進(jìn)一步闡述，為臨床提供理論依據(jù)，值得臨床進(jìn)一步探索。