王建化，王英平，孫高飛，谷建昀，張玲玲*

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 海都學(xué)院，山東 萊陽 265200；2.黃島海關(guān)，山東 黃島 266000； 3.煙臺市富林礦山機械有限公司，山東 招遠 265400)

薇菜作為食用蔬菜已有悠久的歷史，過去在荒年是救荒草，現(xiàn)已步入高檔餐桌，其經(jīng)濟效益為一般蔬菜的4～5倍。野生薇菜鮮嫩味美，營養(yǎng)豐富，未展開的嫩葉尤為上品。薇菜既可鮮食，又可腌漬、干制，是向日本出口的大宗山珍野菜。水煮薇菜中主要含有防腐劑和甜味劑[1，2]，由于日本的標準嚴苛，因此檢測出口食品中的食品添加劑含量達到標準，對于國內(nèi)食品添加劑含量的檢測也是一種保障。

我國標準檢測方法有很多，如滴定法、比色法、薄層色譜法、氣相色譜法等[3]，但都是對樣品分別處理進行不同方法的測定，沒有同時檢測的方法?，F(xiàn)在相對先進的檢測機構(gòu)都在研究這5種食品添加劑同時檢測的方法，針對于不同的基質(zhì)使用不同方法，目前按照檢測樣品的不同大致可以分為肉食品、飲品、乳制品、含油量高的基質(zhì)和普通基質(zhì)等檢測方法[4]。在我國國標中，最早出現(xiàn)對于食品添加劑檢測的是在2003年，那時的檢測針對于單獨的添加劑且方法相對落后。本法采用一種簡單的前處理方法，使用的樣品為水煮薇菜，基質(zhì)簡單易得，用高效液相色譜法對5種添加劑同時進樣，一次檢測得到多種結(jié)果，大大節(jié)省了人力、物力和時間，結(jié)果準確可靠。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇(色譜純):Fisher Scientific公司；乙酸銨(分析純)、稱取1.54 g乙酸銨加水溶解并稀釋至1000 mL，靜置，過0.45 μm孔徑濾膜[5]，鹽酸(分析純)：量取100 mL鹽酸，與100 mL水充分混合，靜置)；氨水、乙醚(分析純)：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;實驗用水為屈臣氏蒸餾水。

1.2 儀器與設(shè)備

LX-130離心機(控溫) 日本TOMY公司；UW402S電子天平 梅特勒-托利多有限公司；UMV-2多管渦旋混合器 北京優(yōu)晟聯(lián)合科技有限公司；Agilent-1100高效液相色譜儀 安捷倫公司；50 mL離心管、10 mL移液管、移液槍、一次性吸管、pH試紙、0.45 μm水性濾膜等。

1.3 樣品前處理

大多數(shù)樣品中存在許多大分子物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、脂肪等[6]，需要使用沉淀劑進行凈化處理，如乙酸鋅、亞鐵氰化鉀等，但本樣品不含有上述大分子物質(zhì)，故無需進行凈化操作。

本法為反提法，即將樣品中的食品添加劑先正提取到乙醚層中，后用水反提取至水層中，定量檢測水層中的食品添加劑。

將水煮薇菜經(jīng)破碎處理后，稱取2.0 g樣品于50 mL離心管中，加水10 mL和0.5 mL鹽酸(1+1)進行酸化處理。加入乙醚8 mL震蕩提取2次(共16 mL)，合并提取液。將提取液震蕩，離心(4000 r/min，5 min)，棄掉下層水層，向提取液中準確加入10.0 mL水，加氨水調(diào)節(jié)pH為7～8，震蕩離心(4000 r/min，5 min)，取下層水層過0.45 μm水性濾膜。

1.4 標準品配制

標準物質(zhì)純品溶液稀釋，配制成10 mg/L濃度的儲備液，將儲備液稀釋成0.01,0.03,0.05,0.07,0.09,0.10 mg/mL的標準溶液[7]，用于測定標準曲線。

1.5 色譜柱條件

Waters SymmetryShield C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱，流動相為0.02 mol/L乙酸銨-甲醇(100+5)緩沖溶液，檢測波長為220 mm，紫外檢測器，柱溫25 ℃，流速1 mL/min[8]，進樣量10 μL。

1.6 精確度測定

為保證試驗精確度，取6份樣品分別編號1，2，3，4，5，6，各稱取2 g于50 mL離心管中，加入10 mL水和0.5 mL鹽酸(1+1)進行酸化處理。分別加入8 mL乙醚提取2次(共16 mL)，合并提取液經(jīng)震蕩離心(4000 r/min) 5 min，棄去下層水層，準確加入10.0 mL水，用氨水調(diào)節(jié)pH為7～8，震蕩離心(4000 r/min，5 min)，取下層水層過0.45 μm水性濾膜。

1.7 準確度測定

為保證試驗方法提取到的添加劑含量的有效性，人為地向樣品中添加定量標準物質(zhì)進行檢測，通過回收率判斷樣品的檢測結(jié)果是否有效。大量實驗證明，當(dāng)回收率在85%～110%之間時，結(jié)果可靠。

向樣品中加入1 mL 1 mg/L的混標溶液，與樣品進行相同的前處理步驟，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后進儀器檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線的建立

對混標稀釋后濃度為0.01,0.03,0.05,0.07,0.09,0.10 mg/mL的標準系列溶液進行測定，以質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，分別得到回歸方程，見表1。安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉這5種添加劑的出峰圖見圖1，按照出峰的時間分別是安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉。

表1 線性方程和相關(guān)系數(shù)Table 1 Linear equations and correlation coefficients

由表1可知，該混標溶液出峰時間分散，在檢出限濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

圖1 10 mg/L標準品溶液譜圖Fig.1 Spectrum of 10 mg/L standard solution

由圖1可知，5種添加劑出峰時間間隔明顯，且峰不存在重合現(xiàn)象，即如果樣品中含有上述5種添加劑，譜圖中會在相應(yīng)位置出峰。

2.2 樣品測定

對水煮薇菜使用反提法檢測食品添加劑含量，其結(jié)果見表2，譜圖見圖2。

表2 樣品添加劑含量Table 2 Content of sample additives

圖2 樣品譜圖Fig.2 Sample spectrogram

對比圖1和圖2可以看出，圖2中的譜圖沒有在相應(yīng)位置出峰，所以水煮薇菜樣品中不含有安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉這5種食品添加劑。

2.3 精確度試驗

為保證樣品的精確度，分別對水煮薇菜進行6次平行試驗，試驗結(jié)果見表3。

表3 精確度試驗Table 3 Test of precision

由表3可知，進行6次平行試驗均無檢出添加劑，可能的情況是含有添加劑，但含量低于檢出限導(dǎo)致未檢出；另一種情況是均不含添加劑，故無檢出。上述2種情況均達到標準，結(jié)果判定為水煮薇菜不含有安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉5種添加劑。

2.4 準確度試驗

為了保證檢測的準確度，進行回收試驗[9，10]，標準曲線見圖3，結(jié)果見表4。

圖3 回收樣品譜圖Fig.3 Spectrum of recovered samples

名稱保留時間(min)線性方程相關(guān)系數(shù)回收率(%)安賽蜜4.789Y=30.07804x+4.409060.9999189.7糖精鈉6.679Y=22.31909x-3.229500.99986102.3苯甲酸8.102Y=33.34349x+7.878380.9999495.5山梨酸11.206Y=54.49386x-5.473310.9999491.9脫氫醋酸鈉12.356Y=39.72542x-3.220050.9997699.6

由圖3和表4可知，人為加入含有混標的樣品檢測結(jié)果是含有添加劑的，且同一種方法回收得到的添加劑含量不同?；厥章士梢宰C明該方法得到的結(jié)果可信，因為在前處理過程中提取得到的添加劑會有一定程度的損失；當(dāng)回收率低于100%時證明提取不完全或者有損失；當(dāng)回收率高于100%時，說明樣品中同時也含有該添加劑。本法的相關(guān)系數(shù)均在0.999以上，回收率在89%以上，說明試驗結(jié)果可靠。

2.5 結(jié)果計算

樣品中山梨酸、苯甲酸、脫氫醋酸鈉、安賽蜜、糖精鈉的含量按照下式計算[11，12]：

式中：X為樣品中食品添加劑含量，mg/kg；A為進樣體積中食品添加劑的含量，mg；V為試樣稀釋體積，mL；m為試樣質(zhì)量，g。

3 討論

試驗表明：對樣品進行破碎、浸提后，使用Waters SymmetryShield C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱，流動相為0.02 mol/L乙酸銨-甲醇(100+5)緩沖溶液，檢測波長為220 mm，紫外檢測器，柱溫25 ℃，流速1 mL/min，進樣量10 μL時，混標中安賽蜜、糖精鈉、山梨酸、苯甲酸、脫氫醋酸鈉的出峰時間分別為4.785，6.681，8.117，11.310，12.987 min，樣品中未檢出。不同回收率表明在實驗操作過程中，會有不明原因的損失，可能是提取時間不足，可能是提取試劑還有待改善，還有可能是檢測時間不及時，導(dǎo)致部分添加劑降解。在國標中以水煮薇菜為例，使用反提法檢測5種食品添加劑，方法簡便，可以節(jié)約大量人力、物力，節(jié)約成本和資源，加快工作效率。