劉清清，李青，杜衛(wèi)佳，張志快，馬慧，閆戰(zhàn)勝，張二明，張勇

(1.河北首農(nóng)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技有限公司，定州 073000；2.北京首農(nóng)畜牧發(fā)展有限公司，北京 100176；3.綠荷康牧有限公司，北京 101105）

飼用微生物常應(yīng)用于泌乳動(dòng)物生產(chǎn)中，其不僅對(duì)動(dòng)物腸道微生物代謝有促進(jìn)作用，可改變瘤胃發(fā)酵模式，提高飼料利用效率以及動(dòng)物健康水平和生產(chǎn)性能，還對(duì)動(dòng)物周邊微生物環(huán)境有改善作用[1]。相關(guān)研究證明，在反芻動(dòng)物日糧中添加飼用微生物能改變瘤胃微生物數(shù)量，增進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的外流速度，提高飼料采食速率、產(chǎn)奶量及改善乳成分[2]。目前，國(guó)內(nèi)外在奶牛上有關(guān)直接飼喂益生菌的研究已取得了初步成績(jī)，但直接飼喂+圈舍環(huán)境噴灑雙重因素對(duì)奶牛生產(chǎn)性能的影響尚不清楚。因此，本試驗(yàn)旨在通過研究日糧中添加益生菌與圈舍運(yùn)動(dòng)場(chǎng)噴灑益生酵母，探討其對(duì)奶牛健康狀況的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 益生菌

試驗(yàn)用益生菌產(chǎn)品均為綠荷康牧公司研制生產(chǎn)。飼喂益生菌產(chǎn)品名為乳鍵寶（植物乳桿菌＞1×107CFU/g，乳酸腸球菌＞1×107CFU/g）；圈舍運(yùn)動(dòng)場(chǎng)所噴灑益生菌為有機(jī)物料腐熟劑，產(chǎn)品名土肥寶（主要成分為解淀粉芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌，有效活菌數(shù)＞5×108CFU/g）。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

健康澳洲荷斯坦牛，由河北首農(nóng)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)時(shí)間為2015年2月至2016年2月。選用胎次、產(chǎn)量、泌乳天數(shù)相近的荷斯坦牛480頭，隨機(jī)分為2組（對(duì)照組與試驗(yàn)組），每組240頭 。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧；試驗(yàn)組飼喂基礎(chǔ)日糧+30g/（頭·d）益生菌。日糧組成與營(yíng)養(yǎng)成分見表1。

對(duì)照組與試驗(yàn)組均飼養(yǎng)在環(huán)境相同的圈舍，試驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)場(chǎng)每?jī)稍聡姙⒁淮我嫔óa(chǎn)品∶墊料=1∶5，每千克可鋪成生物菌床15～30m2），采用旋耕機(jī)旋耕；對(duì)照組運(yùn)動(dòng)場(chǎng)不噴灑，僅進(jìn)行日常的旋耕管理。

1.3 樣品的采集與指標(biāo)測(cè)定

每月統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)組與對(duì)照組的未發(fā)病頭數(shù)；每月根據(jù)DHI數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)各組乳中尿素氮的含量與產(chǎn)量及體細(xì)胞數(shù)；每?jī)稍虏杉淮卧囼?yàn)組與對(duì)照組牛群糞便，統(tǒng)計(jì)大腸桿菌數(shù)、金黃色葡萄球菌數(shù)與菌落總數(shù)。

表1 基礎(chǔ)日糧營(yíng)養(yǎng)成分（DM基礎(chǔ)）

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 益生菌對(duì)牛群發(fā)病率的影響

圖1為2015年2月至2016年2月，試驗(yàn)組和對(duì)照組奶牛未發(fā)病的比率統(tǒng)計(jì)。由圖1可知，試驗(yàn)組平均未發(fā)病奶牛比率（96.79%）明顯高于對(duì)照組（93.78%），差異極顯著（P=0.003）。

圖1 益生菌對(duì)奶牛發(fā)病情況的影響

2.2 益生菌對(duì)乳平均體細(xì)胞數(shù)的影響

表2、圖2為2015年2月至2016年2月期間，試驗(yàn)組和對(duì)照組采集的奶樣中不同體細(xì)胞數(shù)的區(qū)間占比。由圖2可知，平均體細(xì)胞數(shù)小于10萬/mL的，試驗(yàn)組頭數(shù)占比略低于對(duì)照組，體細(xì)胞數(shù)在10萬～30萬/mL、30萬～50萬/mL、50萬～100萬/mL、100萬/mL以上的奶牛頭數(shù)占比，試驗(yàn)組略高于對(duì)照組，差異均不顯著（P=0.51）。

圖2 益生菌對(duì)奶牛乳平均體細(xì)胞數(shù)的影響

2.3 益生菌對(duì)乳中尿素氮的影響

圖3、圖4為2015年2月至2016年2月，試驗(yàn)組與對(duì)照組奶牛乳中尿素氮含量和尿素氮產(chǎn)量的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。由圖3、圖4可知，試驗(yàn)組牛奶中尿素氮含量（11.97%）低于對(duì)照組（12.66%），差異不顯著（P=0.091）；試驗(yàn)組牛奶中尿素氮產(chǎn)量（3.25kg）低于對(duì)照組（3.38kg），差異不顯著（P=0.160）。

圖3 益生菌對(duì)奶牛乳中尿素氮含量的影響

表2 益生菌對(duì)兩組奶牛乳中體細(xì)胞數(shù)的影響（頭數(shù)占比）

圖4 益生菌對(duì)奶牛乳中尿素氮產(chǎn)量的影響

2.4 益生菌對(duì)奶牛糞便中細(xì)菌數(shù)的影響

表3 益生菌對(duì)奶牛糞便中細(xì)菌數(shù)的影響

表3為試驗(yàn)組和對(duì)照組奶牛糞便中的大腸桿菌數(shù)、金黃色葡萄球菌數(shù)和菌落總數(shù)對(duì)比。由表3可知，試驗(yàn)組大腸桿菌數(shù)、金黃色葡萄球菌數(shù)和菌落總數(shù)均低于對(duì)照組，但差異均不顯著（P=0.322、P=0.141、P=0.122）。

3 討論

3.1 益生菌制劑對(duì)奶牛發(fā)病率的影響

益生菌能夠通過競(jìng)爭(zhēng)機(jī)理在腸道內(nèi)定殖，加強(qiáng)腸道上皮細(xì)胞的屏障功能，從而刺激腸道淋巴細(xì)胞發(fā)揮免疫保護(hù)作用，提高動(dòng)物體內(nèi)抗體水平和巨噬細(xì)胞的活性，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。楊慧娟等人對(duì)不同牧場(chǎng)的荷斯坦牛添加乳酸菌微生態(tài)制劑后發(fā)現(xiàn)，乳中平均體細(xì)胞數(shù)顯著降低（降低39.8%～62.8%）；中輕度乳房炎治愈率為71.21%，總有效率為89.39%，重度乳房炎治愈率為33%～4.19%，總有效率為73%～87.09%[1]。李炳志等對(duì)楊凌周邊地區(qū)21頭患子宮內(nèi)膜炎奶牛采用子宮內(nèi)灌注微生態(tài)制劑乳酸桿菌發(fā)酵液進(jìn)行治療，結(jié)果有效率為95.23%（20/21），治愈率為85.71%（18/21）[3]。在微生態(tài)制劑發(fā)酵墊料方面，陳永生等發(fā)現(xiàn)，使用微生物發(fā)酵墊床后，奶牛單產(chǎn)提高18.2%，乳房炎發(fā)病率降低47.0%，肢蹄病發(fā)生率降低82.0%，奶牛產(chǎn)奶高峰期延長(zhǎng)22d[4]。本試驗(yàn)與上述研究結(jié)果一致，試驗(yàn)組奶牛的發(fā)病率明顯低于對(duì)照組。這表明飼喂和運(yùn)動(dòng)場(chǎng)噴灑益生菌制劑有助于提高奶牛的免疫能力，增強(qiáng)抗病能力，對(duì)奶牛乳房炎及子宮炎等疾病的防治具有積極的效果。在運(yùn)動(dòng)場(chǎng)噴灑益生菌制劑并進(jìn)行旋耕處理后，微生物以墊料中糞尿?yàn)榛A(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)迅速繁殖，從而抑制、殺滅各種病原微生物，可快速消化分解糞尿和有害氣體，極大地改善了牛舍環(huán)境，提高奶牛舒適度，降低發(fā)病率，提高奶產(chǎn)量。

3.2 益生菌制劑對(duì)體細(xì)胞數(shù)的影響

張志軍等[2]在日糧中添加復(fù)合益生菌，結(jié)果試驗(yàn)組體細(xì)胞數(shù)低于對(duì)照組，試驗(yàn)期間對(duì)照組奶牛的體細(xì)胞數(shù)持續(xù)增加，而試驗(yàn)組則相對(duì)保持平穩(wěn)。臧長(zhǎng)江等[5]通過飼喂微生物制劑，發(fā)現(xiàn)奶牛血液中GSH-Px、SOD的含量升高，清除體內(nèi)過剩的氧自由基的能力提高，從而減少機(jī)體體細(xì)胞的凋亡，顯著降低了牛乳中的體細(xì)胞數(shù)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在平均體細(xì)胞數(shù)＜10萬/mL區(qū)間內(nèi)試驗(yàn)組比對(duì)照組略低，但在其他區(qū)間內(nèi)（10萬～30萬/mL，30萬～50萬/mL，50萬～100萬/mL，＞100萬/mL）均為試驗(yàn)組略高于對(duì)照組，但差異都不顯著。分析原因，可能因試驗(yàn)期間有干奶、淘汰、死亡牛只出群，新補(bǔ)入牛只個(gè)體存在差異而影響了試驗(yàn)結(jié)果。對(duì)此還有待進(jìn)一步研究證明。

3.3 益生菌制劑對(duì)乳中尿素氮的影響

乳中尿素氮含量受營(yíng)養(yǎng)與非營(yíng)養(yǎng)等多種因素的影響，其中營(yíng)養(yǎng)因素是主要因素。營(yíng)養(yǎng)因素包括日糧蛋白質(zhì)水平、能量水平、能氮比和蛋白質(zhì)降解率；非營(yíng)養(yǎng)因素則包括牛群、泌乳階段、季節(jié)、取樣時(shí)間和取樣方法等[6]。夏天嬋等[7]在南方夏季奶牛日糧中添加不同益生菌，發(fā)現(xiàn)可顯著降低乳中尿素氮含量。而本試驗(yàn)的結(jié)果表明，添加益生菌對(duì)乳中尿素氮含量及產(chǎn)量的影響均不顯著，這可能是由于日糧水平、季節(jié)或者牛群差異等原因所造成的。

3.4 益生菌制劑對(duì)糞中細(xì)菌數(shù)的影響

大腸桿菌等有害菌群活動(dòng)增強(qiáng)會(huì)促進(jìn)有機(jī)質(zhì)向腐敗物質(zhì)轉(zhuǎn)化，增加氨的產(chǎn)生；而乳酸菌等有益菌群的增加則可抑制有害菌的增值，從而減少氨的產(chǎn)生量。大量有益微生物的進(jìn)入競(jìng)爭(zhēng)性地排斥或抑制牛糞中的腐敗菌群，也減少了蛋白氮向氨或胺的轉(zhuǎn)化，從而起到保氮和除臭的效果。付曉政等[8]通過在奶牛新鮮糞便中添加不同濃度的益生菌在35℃恒溫培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，隨著添加劑量的增加，各處理組氨氮及大腸桿菌含量顯著降低，全氮及乳酸菌含量顯著增加。而本試驗(yàn)通過飼喂及圈舍噴灑益生菌發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組奶牛糞便中大腸桿菌數(shù)、金黃色葡萄球菌數(shù)和菌落總數(shù)均低于對(duì)照組，但差異未達(dá)顯著水平。

4 結(jié)論

飼喂+運(yùn)動(dòng)場(chǎng)噴灑益生菌可降低牛群發(fā)病率；對(duì)乳中體細(xì)胞數(shù)、尿素氮含量和產(chǎn)量，以及糞便中細(xì)菌數(shù)無顯著影響。