陳香玲，何泰東，李 麗

(1. 廣東省深圳市中醫(yī)院，廣東 518033； 2.天津藥明康德新藥開發(fā)有限公司，天津 300070)

鹽酸左布比卡因，化學(xué)名為S-(-)-1-丁基-N-(2, 2-二甲苯基)-2-哌啶甲酰胺鹽酸鹽，是一種酰胺類局部麻醉藥，具有神經(jīng)阻滯作用，主要用于硬膜外麻醉、蛛網(wǎng)膜下腔阻滯麻醉、產(chǎn)科麻醉和術(shù)后鎮(zhèn)痛等，與鹽酸布比卡因相比，麻醉的作用相當，但是中樞神經(jīng)系統(tǒng)和心臟毒性更小[1-5]。鹽酸左布比卡因異構(gòu)體的檢查方法有高效液相色譜法[6，7]和毛細管電泳法[8]，未見超臨界流體色譜法的文獻報道。超臨界流體色譜法(SFC)作為手性分析的手段也逐漸應(yīng)用于藥物的分析當中，相對于常規(guī)的分離手段，SFC具有綠色、快速的特點[9-13]。本試驗通過建立SFC法測定鹽酸左布比卡因注射液中的異構(gòu)體，對鹽酸左布比卡因注射液進行質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Agilent 1260 HPLC系統(tǒng)，Thar SFC系統(tǒng)；XSE 205電子天平；Thermo Scientific Heraeus離心機，KQ2000D型超聲波清洗器。鹽酸左布比卡因?qū)φ掌?批號171011，質(zhì)量分數(shù)為 99.1%)、鹽酸左布比卡因異構(gòu)體對照品(批號170807，質(zhì)量分數(shù)為 99.9%)均購自深圳菲斯生物科技有限公司。鹽酸左布比卡因注射液(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，規(guī)格：375 mg/5 ml，批號20170105，20170106，20170107)；異丙醇為色譜純，購自西格瑪有限公司。鹽酸、氫氧化鈉、過氧化氫均為分析純，購自天津光復(fù)科技發(fā)展有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱為Chiralomix SD 色譜柱(150 mm×4.6 mm，3.5 μm)，柱溫為35 ℃，檢測波長為215 nm，進樣量為10 μl，流動相為CO2-異丙醇(73∶27)，流速為1.5 ml/min。

2.2溶液的制備

2.2.1系統(tǒng)適用性溶液 精密稱取10 mg鹽酸羅哌卡因?qū)φ掌放c10 mg 異構(gòu)體對照品，置于100 ml量瓶中，加異丙醇溶解，稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液10 ml至100 ml量瓶中，加異丙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2供試品溶液 精密量取鹽酸左布比卡因注射液10 ml(約含鹽酸左布比卡因注射液750 mg)置1 000 ml量瓶中，加入異丙醇，超聲2 min，稀釋至刻度，搖勻。離心，取上清液，即得。

2.3系統(tǒng)適用性試驗 取系統(tǒng)適用性溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，結(jié)果表明鹽酸左布比卡因色譜峰與異構(gòu)體色譜峰的分離度大于1.5，理論塔板數(shù)均大于5 000，空白無干擾。色譜圖見圖1。

2.4專屬性試驗

2.4.1酸降解溶液 取鹽酸左布比卡因注射液10 ml(約含鹽酸左布比卡因注射液750 mg)置1 000 ml量瓶中，加入異丙醇20 ml，超聲2 min，加入0.2 mol/L鹽酸異丙醇溶液5 ml，放置2 h；用氫氧化鈉異丙醇溶液調(diào)pH值，加異丙醇稀釋至刻度，搖勻。離心，取上清液，即得。

2.4.2堿降解溶液 取鹽酸左布比卡因注射液10 ml(約含鹽酸左布比卡因注射液750 mg)置1 000 ml量瓶中，加入異丙醇20 ml，超聲2 min，加入0.2 mol/L氫氧化鈉異丙醇溶液5 ml，放置2 h；用鹽酸異丙醇溶液調(diào)pH值，加異丙醇稀釋至刻度，搖勻。離心，取上清液，即得。

2.4.3高溫降解溶液 取鹽酸左布比卡因注射液10 ml(約含鹽酸左布比卡因注射液750 mg)置1 000 ml量瓶中，置于水浴鍋上，90 ℃加熱5 h，取出，加入異丙醇，超聲2 min，并用異丙醇稀釋至刻度，搖勻。離心，取上清液，即得。

1.異構(gòu)體 2.鹽酸左布比卡因圖1 系統(tǒng)適用性(A) 供試品(B)酸降解(C) 堿降解(D)氧化降解(E) 光照降解(F)高溫降解(G)HPLC色譜圖

2.4.4光照降解溶液 取鹽酸左布比卡因注射液10 ml(約含鹽酸左布比卡因注射液750 mg)置1 000 ml量瓶中，放置于強光照射照箱[(4 500±500)lx]中放置24 h，取出，加入異丙醇，超聲2 min，并用異丙醇稀釋至刻度，搖勻。離心，取上清液，即得。

2.4.5氧化降解溶液 取鹽酸左布比卡因注射液10 ml(約含鹽酸左布比卡因注射液750 mg)置1 000 ml量瓶中，加入異丙醇20 ml，超聲2 min，加入30%的過氧化氫溶液5 ml，放置2 h；加異丙醇稀釋至刻度，搖勻。離心，取上清液，即得。

取各降解溶液按“2.1”項下色譜條件進樣測定，結(jié)果表明，供試品在酸、堿、光照、高溫、氧化條件下降解的雜質(zhì)對于異構(gòu)體的檢測未能造成干擾。色譜圖見圖1。

2.5線性關(guān)系、檢測限與定量限試驗 取系統(tǒng)適用性溶液，精密量取該溶液 1.5、3、9、12和15 ml分別置 100 ml 量瓶中，異丙醇稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項下色譜條件進樣測定。以質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程。鹽酸左布比卡因色譜峰的線性方程為：A=24.54C-2.563(r=0.999 5)；鹽酸左布比卡因異構(gòu)體色譜峰的線性方程為：A=23.99C+2.124(r=0.999 3)。試驗結(jié)果表明，鹽酸左布比卡因與異構(gòu)體的色譜峰在0.15～1.5 μg/ml濃度范圍內(nèi)濃度與峰面積的線性關(guān)系良好。鹽酸左布比卡因與異構(gòu)體的色譜峰檢測限濃度為0.075 μg/ml；定量限濃度為0.15 μg/ml。

2.6精密度試驗 精密吸取系統(tǒng)適用性溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定。重復(fù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，鹽酸左布比卡因與異構(gòu)體的峰面積的RSD值分別為0.5%和0.3%，表明精密度良好。

2.7溶液穩(wěn)定性試驗 取20170105批樣品 1份，照“2.2.2”項下供試品溶液制備方法配制，分別于0、8、12、24、36、60和72 h進樣，按“2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果均未檢出異構(gòu)體。表明供試品溶液放置 72 h 內(nèi)異構(gòu)體含量未發(fā)生變化。

2.8耐用性試驗 通過對柱溫、流動相比例、流速的微小變化，同一品牌同一型號不同批號色譜柱的考查，不同品牌的儀器對異構(gòu)體檢查的影響。結(jié)果顯示，儀器、色譜柱、柱溫、流速、流動相比例的微小變化對異構(gòu)體的測定無明顯影響，表明耐用性良好。

2.9加樣回收率試驗 取鹽酸左布比卡因注射液10 ml(約含鹽酸左布比卡因750 mg)置1 000 ml量瓶，分別加入相當于鹽酸左布比卡因0.08%、0.1%和0.12%的異構(gòu)體對照品，每個質(zhì)量濃度制備 3 份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，外標法計算，鹽酸左布比卡因異構(gòu)體平均回收率為99.6%，RSD為0.89%。結(jié)果見表1。

2.10樣品的測定 取20170105、20170106、20170107 批3個批號的供試品，按“2.2.2”項下供試品溶液的配制方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行測定，供試品溶液中均未檢出異構(gòu)體峰。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

3 討論

超臨界流體色譜相比于常規(guī)的手性分離有自己的獨特優(yōu)勢，本試驗中鹽酸左布比卡因與異構(gòu)體的分離度就優(yōu)于文獻中液相色譜法的分離效果。試驗中，通過對多個品牌、多個型號、多種填料手性色譜柱的篩選，最終優(yōu)選賽分公司的Chiralomix SD色譜柱；同時對改性劑進行了篩選，異丙醇的分離效果最好；在此基礎(chǔ)上，對柱溫、流速、儀器的背壓進行了優(yōu)化，確定了鹽酸左布比卡因與異構(gòu)體分離的最優(yōu)條件。