何天近

【摘 要】 目的：探索HE（Haematoxylinandeosin）染色和巴氏染色兩種方法處理宮頸液基細胞學檢查（TCT）中應(yīng)用價值。方法：選取我院2017年1月-2018年12月2000例宮頸液基細胞學檢查（TCT）制片，平均分成兩組，分別用HE染色和巴氏染色，按照TBS分類，ASC-H及以上判讀為陽性、ASC-H及以上陰道鏡活檢、比較兩組染色方法處理宮頸TCT檢查的陽性率與病理活檢診斷符合率。結(jié)果：巴氏染色組TCT細胞學陽性率為4.7%、與病理活檢診斷符合率為77.3%，HE染色組TCT細胞學檢查陽性率為4.5%、與病理活檢診斷符合率為76.7%。結(jié)論：兩種染色方法在液基細胞學（TCT）檢查中應(yīng)用價值無明顯差異、我們可以根據(jù)醫(yī)院的條件合適選擇這兩種方法中一種應(yīng)用于宮頸液基細胞學檢查。

【關(guān)鍵詞】 液基細胞學;巴氏;H-E染色;應(yīng)用價值

【中圖分類號】R365【文獻標志碼】A【文章編號】1005-0019（2019）09-219-02

宮頸癌是我國女性健康的重要殺手、從癌前病變轉(zhuǎn)變成癌有一個過程、一般所需10年左右、因此早癌篩查很重要，而液基細胞學（TCT）檢查是目前國際上較先進的一種宮頸癌細胞學檢查技術(shù)，檢出率為100%，在宮頸病變診斷中普及，改變了傳統(tǒng)手工涂片的方法，制片效果好，利于觀察，陽性檢出率高，是應(yīng)用于婦女宮頸癌篩查的一項先進的技術(shù)[1]。宮頸細胞學的常用染色方法以巴氏染色，HE染色為主，效果各有優(yōu)劣。比較兩種染色方法，分析各自的優(yōu)缺點，便于在工作中選擇合適的染色方法。

1 材料與方法

1.1 儀器材料

我院TCT采用武漢呵爾醫(yī)療科技發(fā)展有限公司的薄層液基細胞涂片試劑盒（細胞保存液），細胞保存液I型，規(guī)格15ml/瓶人份，保存條件4℃-30℃保存。細胞保存液I型成分為：無水乙醇﹑氯化鈉和去離子水等，I型主要用于宮頸癌篩查，對取得的宮頸細胞進行固定和保存。

H-E 染色，其染液用蘇木素染色液采用Harris液為珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的。伊紅（水溶性）為珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的。按《臨床技術(shù)操作規(guī)范》病理學分冊介紹的方法自行進行染液配制。

1.2 取材與制片方法

取材方法：將宮頸充分暴露以后，用一次性宮頸刷采集宮頸細胞標本，大拇指和食指捏住刷柄，將宮頸刷伸入到宮頸口內(nèi)，順時針旋轉(zhuǎn)3-5圈，抽出宮頸刷，卸下刷頭放入裝有15ml的細胞保存Ⅰ液的小瓶中。從而成功提取宮頸處的表皮細胞，在這里值得注意的是，（如果病人宮頸上的粘液或分泌物較多，應(yīng)先用棉球?qū)⒃撜骋夯蚍置谖锾崆安潦靡幌潞笤偃樱?/p>

液基細胞制片，婦科取材保存于細胞保存液中送檢。通過95%酒精固定30min，水沖洗，分別用巴氏、HE兩種染色法。

巴氏染色：液基細胞涂片置蘇木素染液浸染3min，水沖洗，鹽酸酒精分化5s，水沖洗堿水反藍，95%酒精2min，EA-50染色2min，95%酒精第一次lmin，95%酒精第二次lmin，100%酒精第一次2min，100%酒精第二次5min，二甲苯1～2min，中性樹膠封固[2]。

HE染色：浸入蘇木素染液浸染10～15min，水沖洗30s～1min，1%鹽酸酒精分化30S，流水沖洗15min，1%伊紅染色3～5min，水沖洗，90%～95%酒精第一次分化30s，95%酒精第二次1min，95%酒精第三次分化1min，100%酒精第一次分化2min，100%酒精第二次分化5min，二甲苯1～2min，中性樹膠封固。

2 結(jié)果

巴氏染液染出的涂片， 其細胞透明度好， 細胞核結(jié)構(gòu)清新， 胞質(zhì)色彩豐富而鮮艷。染色結(jié)果：細胞核呈深藍色，核仁呈紅色;不同分化類型的鱗狀上皮細胞，其胞質(zhì)染色顏色不一。

HE（Haematoxylinandeosin）染色：蘇木素染色后的細胞核呈現(xiàn)藍色，染色透明度好，核與胞質(zhì)對比鮮明、紅藍適度。兩組染色方法處理宮頸TCT診斷均按照TBS分類、ASC-H及以上判讀為檢查陽性。巴氏染色組診斷ASC62例（ASC-H8例、ASCUS54例）、LSIL26例、HSIL10例、SCC3例，HE染色組：ASC50例（ASC-H7例、ASCUS43例）、LSIL29例、HSIL7例、SCC2例，兩組染色方法處理TCT診斷結(jié)果與病理活檢診斷結(jié)果符合情況如下表由上述得出結(jié)果：巴氏染色組處理TCT檢查陽性率4.7%（47/1000）、HE染色組處理TCT檢查陽性率4.5%（45/1000），巴氏染色組處理宮頸TCT陽性病例與病理組織學診斷符合率77.3%（34/46）、HE染色組處理宮頸TCT檢查陽性病例與病理組織學診斷符合率76.7%（33/43），通過兩組染色方法處理宮頸TCT檢查陽性率及病理組織學診斷符合率對比分析、發(fā)現(xiàn)宮頸TCT檢查陽性率及與病理組織學診斷符合率、兩種染色方法無統(tǒng)計學差異。

3 討論

宮頸液基薄層細胞學檢查技術(shù)是細胞學診斷的一場革命，它通過技術(shù)處理去掉涂片上的雜質(zhì)，直接制成清晰的薄層涂片，液基薄片背景中細胞分布均勻、重疊現(xiàn)象較少、細胞形態(tài)保存完好、細胞不容易退變（與傳統(tǒng)涂片相比）、使閱片者更易觀察，它由于更全面、也更實用、更具有臨床應(yīng)用價值，其診斷準確性比傳統(tǒng)的細胞涂片要高[3]，目前在我國大部分地區(qū)已開始應(yīng)用起來。

涂片的正確診斷除了與涂片質(zhì)量、涂片固定有關(guān)外，與染色的好壞關(guān)系密切，染色的好壞很影響觀察[4]HE（Haematoxylinandeosin）染色的特點，首先染液的滲透性強，染色透明度好，核漿對比鮮明，操作簡便、核仁清晰;再者宮頸陰道為非角化復層鱗狀上皮，H-E染色后的細胞涂片更易與組織切片相對照[5].其次，當HE（Haematoxylinandeosin）染色不理想時，還能進行彌補，如染色較淺，可分別進行蘇木素及伊紅復染;如用蘇木素使涂片染色過深，后用鹽酸酒精處理，直到背景干凈，至滿意為止，最后H-E染色液也可以重復使用，直至認為效果不佳時再換用新的染色液，缺點：胞質(zhì)染色顏色單一、胞核內(nèi)部結(jié)構(gòu)不夠清晰、不利于沒有經(jīng)驗的診斷醫(yī)師閱片。巴氏染色背景干凈、細胞質(zhì)染色顏色不一、豐富而鮮艷、胞核深藍色、胞核與胞質(zhì)對比度明顯、胞核內(nèi)結(jié)構(gòu)清晰、核仁清晰、尤其是染色質(zhì)粗細情況更為能夠保證HPV感染引起的細胞嗜異染和雙染以及異常角化方面給予更多信息表達，缺點：染色成本較高，工作步驟繁多，而宮頸液基細胞學檢查（TCT）TBS判斷標準是根據(jù)細胞核大小、細胞核異型、細胞核染色質(zhì)粗細、核仁情況、核漿比來判斷將鱗狀上皮分為未見上皮內(nèi)病變（NILM）、非典型不明確意義鱗狀上皮（ASC，包括ASCUS、ASC-H）、低級別上皮內(nèi)病變（LSIL）、高級別上皮內(nèi)病變（HSIL）、鱗狀細胞癌（SCC）。從這個角度兩種染色方法都能滿足液基細胞學檢查診斷需要;從本文隨機選取的2000例平均分成兩組、檢查陽性率4.7%和4.5%，在與病理組織學診斷符合率77.3%和76.7%、兩組無顯著的統(tǒng)計學差異。我們在實踐工作中可以根據(jù)醫(yī)院的具體情況來選擇巴氏染色方法和HE染色方法處理宮頸液基細胞學檢查。

參考文獻

[1] 朱燕燕，懷建國，蔣艷.細胞DNA定量分析結(jié)合液基細胞學檢測在肺癌診斷中的價值[J].臨床與實驗病理學雜志，2016，32（5）：92-97.

[2] 王俊生.探討HE染色方法在臨床病理診斷中的應(yīng)用價值[J].世界最新醫(yī)學信息文摘，2016，16（68）：96-97.

[3] 王瑩 卞美璐主編 液基薄層宮頸細胞學圖譜[M]，第一版 科學技術(shù)文獻出版社團組織，2005，11-14。陳樂直，主編。婦產(chǎn)科診斷病理學[M]，第1版。，北京：人民軍醫(yī)出版社，2002。478-503。

[4] 廖秦平 宮頸癌病因?qū)W研究新進展[J]，中國婦產(chǎn)科臨床雜志，2003，4（4）：243-245。

[5] 于芳，李純.DakeweDP260全自動智能染色機在細胞染色中的使用體會[J].診斷病理學雜志，2017（3）：52-53.