陳楚杰， 潘華山， 賴秋媛， 焦?jié)櫵嚕?黃德強(qiáng)， 汶希

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東廣州 510006）

人參養(yǎng)榮湯作為一種補(bǔ)益劑，具有溫補(bǔ)氣血功效，有近900年的應(yīng)用歷史。我國(guó)有諸多學(xué)者臨床應(yīng)用人參養(yǎng)榮湯治療疲乏等癥，取得了較好的效果。馮燁等[1，2]臨床應(yīng)用人參養(yǎng)榮湯治療疲乏癥結(jié)果表明，其可改善患者疲乏癥狀，對(duì)于患者情緒、總體生活質(zhì)量、軀體功能及呼吸困難情況也有較明顯改善。耿以安等學(xué)者[3]研究顯示人參養(yǎng)榮湯加減治療慢性疲勞綜合征效果良好。陳衍智等[4]研究認(rèn)為人參養(yǎng)榮湯可以提高小鼠抗疲勞、耐缺氧和耐高低溫能力，具有抗疲勞和抗應(yīng)激作用。本課題組基于人參養(yǎng)榮湯抗疲勞、抗疲乏、可顯著改善慢性疲勞癥狀的作用，開(kāi)展其對(duì)運(yùn)動(dòng)中樞性疲勞的動(dòng)物研究，以期為運(yùn)動(dòng)疲勞恢復(fù)提供指導(dǎo)，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)選用SPF級(jí)雄性SD大鼠48只，180～220 g，由廣州醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，并在廣州醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：312024300003479。大鼠均分籠飼養(yǎng)，每籠5只，飼養(yǎng)籠選用塑料制品，并配用不銹鋼罩、玻璃吸水瓶和不銹鋼吸水管，墊料為消毒木屑（每周更換2～3次），飼養(yǎng)溫度21～24℃，濕度60%～70%，自然光照，以國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)固體混合飼料喂養(yǎng)，自由飲食、飲水。

1.2 藥物 人參養(yǎng)榮湯方由白芍30 g，當(dāng)歸、陳皮、黃芪、肉桂、人參、白術(shù)、炙甘草各10 g，熟地、五味子、茯苓各7.5 g，遠(yuǎn)志5 g組成，組成藥物均購(gòu)于廣州康美藥業(yè)有限公司；支鏈氨基酸（BCAA）由無(wú)錫金維氨生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.3 主要試劑與儀器 全血乳酸、血尿素氮、血紅蛋白、肌酸激酶試劑盒（南京建成生物工程研究所）；游離色氨酸（f-Trp）標(biāo)準(zhǔn)品、支鏈氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品、5-羥色胺（5-HT）標(biāo)準(zhǔn)品、5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）標(biāo)準(zhǔn)品（西安化學(xué)試劑廠）。ABXMicros60全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（法國(guó)Horiba ABX診斷公司）；Anke ABL-50B高速離心機(jī)（上海安亭儀器廠）；LC-6A高壓液相色譜儀、LPAD-6A紫外檢測(cè)器、RF-5301P熒光分光光度計(jì)（日本島津公司）；TGL-16冷凍離心機(jī)（上海安亭儀器廠）。

1.4 分組、造模與給藥 大鼠適應(yīng)性訓(xùn)練3 d后，將大鼠按照體質(zhì)量由輕到重進(jìn)行編號(hào)，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表將48只大鼠分為4組，即空白組、模型組、支鏈氨基酸組、人參養(yǎng)榮湯組，每組12只。12只空白組大鼠不進(jìn)行游泳訓(xùn)練，其余36只復(fù)制運(yùn)動(dòng)中樞性疲勞模型。動(dòng)物游泳池水深設(shè)定為50 cm，水溫30℃，打開(kāi)游泳池電源開(kāi)關(guān)，開(kāi)始加熱，直至水溫恒定后放入實(shí)驗(yàn)大鼠，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中有專人驅(qū)趕大鼠，防止在游泳過(guò)程中出現(xiàn)不游的情況而產(chǎn)生偷懶行為。通過(guò)秒表記錄大鼠在動(dòng)物游泳池中游泳至力竭的時(shí)間（即大鼠游泳協(xié)調(diào)性顯著性下降、身體下沉、水淹沒(méi)鼻尖至再次浮出水面超過(guò)10 s），每天1次游泳訓(xùn)練，共4周[5-7]。按成人與大鼠間藥物劑量換算表進(jìn)行折算，人參養(yǎng)榮湯煎液每mL含生藥0.5 g（每次灌胃的生藥量為2.5 g/kg）；將支鏈氨基酸配制成0.02 g/mL（每次灌胃的劑量為2 g/kg）?？瞻讓?duì)照組：正常飼養(yǎng)4周，不給予任何處置；模型組：正常造模，每次游泳前1 h、游泳后5 h蒸餾水灌胃，每次1 mL，共4周；支鏈氨基酸組：每次游泳前1 h、游泳后5 h，給予大鼠支鏈氨基酸灌胃，每次1 mL，共治療4周；人參養(yǎng)榮湯組：每次游泳前1 h、游泳后5 h，給予大鼠人參養(yǎng)榮湯灌胃，每次1 mL，共治療4周。

1.5 觀察指標(biāo)與方法 大鼠最后1次游泳力竭后，采用100 g/L水合氯醛（給藥量按0.4 mL每100 g大鼠體質(zhì)量計(jì)算）經(jīng)腹腔注射麻醉，將大鼠仰臥位固定，開(kāi)胸心臟取血，將血液裝入事先肝素鈉抗凝的離心管內(nèi)，靜置30 min，2 000 r/min離心15 min，用吸管吸取上置血清，放入-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩１壬y(cè)定乳酸、血紅蛋白水平；速率法測(cè)定肌酸激酶水平；脲酶法測(cè)定尿素氮水平；高效液相色譜法測(cè)定支鏈氨基酸、游離色氨酸水平；熒光分光光度法測(cè)定5-羥色胺、5-羥吲哚乙酸水平。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，多組均數(shù)之間的比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），各組之間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般情況觀察 與空白組比較，模型組大鼠體質(zhì)量下降明顯，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，皮毛晦暗，脫毛，攝食及飲水量明顯減少，便溏。人參養(yǎng)榮湯組與支鏈氨基酸組大鼠體質(zhì)量、毛色、精神、攝食及飲水量、大便較模型組明顯好轉(zhuǎn)。其中人參養(yǎng)榮湯組與支鏈氨基酸組大鼠各死亡1只。

2.2 各組大鼠游泳力竭時(shí)間比較 表1結(jié)果顯示：與模型組比較，人參養(yǎng)榮湯組、支鏈氨基酸組大鼠游泳力竭時(shí)間顯著延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），且人參養(yǎng)榮湯組游泳力竭時(shí)間較支鏈氨基酸組延長(zhǎng)（P＜0.01）。提示人參養(yǎng)榮湯組可以延長(zhǎng)大鼠的游泳力竭時(shí)間，作用優(yōu)于支鏈氨基酸組。

表1 各組大鼠游泳力竭時(shí)間比較Table 1 Comparison of the time for exhaustive swimming in various groups (±s)

表1 各組大鼠游泳力竭時(shí)間比較Table 1 Comparison of the time for exhaustive swimming in various groups (±s)

①P＜0.01，與模型組比較；②P＜0.01，與支鏈氨基酸組比較

力竭時(shí)間（t/s）301±43.18 337±23.80①384± 35.40①②組別模型組支鏈氨基酸組人參養(yǎng)榮湯組N 12 11 11

2.3 各組大鼠全血乳酸、血紅蛋白、肌酸激酶、尿素氮水平比較 表2結(jié)果顯示：與空白組比較，模型組大鼠全血乳酸、肌酸激酶、尿素氮值升高，血紅蛋白值降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，人參養(yǎng)榮湯組、支鏈氨基酸組大鼠全血乳酸、肌酸激酶降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），且人參養(yǎng)榮湯組降低作用優(yōu)于支鏈氨基酸組。與模型組比較，人參養(yǎng)榮湯組血紅蛋白升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，人參養(yǎng)榮湯組、支鏈氨基酸組大鼠尿素氮降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），但2個(gè)給藥組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。表明人參養(yǎng)榮湯組在降低血乳酸、肌酸激酶值及升高血紅蛋白方面優(yōu)于支鏈氨基酸組。

2.4 各組大鼠血清游離色氨酸和支鏈氨基酸水平比較 表3結(jié)果顯示：與空白組比較，模型組大鼠血清色氨酸水平升高，支鏈氨基酸水平降低，色氨酸/支鏈氨基酸比值升高（均P＜0.01）；與模型組比較，人參養(yǎng)榮湯組、支鏈氨基酸組大鼠血清色氨酸水平降低，支鏈氨基酸水平升高，色氨酸/支鏈氨基酸值降低（均P＜0.01），且人參養(yǎng)榮湯組對(duì)色氨酸、支鏈氨基酸、色氨酸/支鏈氨基酸的改善作用優(yōu)于支鏈氨基酸組（均P＜0.01）。

表2 各組乳酸、血紅蛋白、肌酸激酶、尿素氮水平比較Table 2 Comparison of the levels of lactic acid，hemoglobin，creatine kinase and urea nitrogen in various groups (±s)

表2 各組乳酸、血紅蛋白、肌酸激酶、尿素氮水平比較Table 2 Comparison of the levels of lactic acid，hemoglobin，creatine kinase and urea nitrogen in various groups (±s)

①P＜0.01，與空白組比較；②P＜0.01，與模型組比較；③P＜0.01，與支鏈氨基酸組比較

尿素氮[c/（mmo1·L-1）]6.14±0.2 8.67±0.2①7.42±0.2②6.69±0.2②分組空白組模型組支鏈氨基酸組人參養(yǎng)榮湯組N 12 12 11 11乳酸[c/（mmol·L-1）]5.27±0.2 20.72±0.5①18.63±0.3②16.46±0.3②③血紅蛋白[ρ/（g·L-1）]117.42±4.1 85.24±3.9①93.31±3.6 113.38±4.1②肌酸激酶[J/（U·mL-1）]1.46±0.50 2.63±0.01①2.31±0.07②1.86±0.05②③

表3 各組大鼠血清色氨酸、支鏈氨基酸水平比較Table 3 Comparison of the levels of f-Trp and BCAA in various groups (±s)

表3 各組大鼠血清色氨酸、支鏈氨基酸水平比較Table 3 Comparison of the levels of f-Trp and BCAA in various groups (±s)

①P＜0.01，與空白組比較；②P＜0.01，與模型組比較；③P＜0.01，與支鏈氨基酸組比較

色氨酸/支鏈氨基酸0.070 9±0.005 3 0.545 0±0.037 6①0.458 6±0.021 3②0.215 9± 0.017 0②③組別空白組模型組支鏈氨基酸組人參養(yǎng)榮湯組N 12 12 11 11色氨酸[c/（μmol·L-1）]23.09±1.34 142.49±6.62①103.47±4.46②63.67± 2.93②③支鏈氨基酸[c/（μmol·L-1）]328.42±5.26 264.18±7.28①227.91±5.69②303.92± 10.52②③

2.5 各組大鼠血清5-羥色胺及5-羥吲哚乙酸水平比較 表4結(jié)果顯示：與空白組比較，模型組大鼠血清5-羥色胺、5-羥吲哚乙酸水平升高，5-羥吲哚乙酸/5-羥色胺比值降低（均P＜0.01）；與模型組比較，人參養(yǎng)榮湯組、支鏈氨基酸組大鼠血清5-羥色胺、5-羥吲哚乙酸水平均降低（P＜0.05），2個(gè)給藥組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與模型組比較，人參養(yǎng)榮湯組5-羥吲哚乙酸/5-羥色胺比值升高（P＜0.05），支鏈氨基酸組無(wú)明顯變化（P＞0.05）。表明人參養(yǎng)榮湯在降低5-羥色胺生成、增強(qiáng)5-羥色胺轉(zhuǎn)換率方面優(yōu)于支鏈氨基酸。

表4 各組大鼠血清5-羥色胺、5-羥吲哚乙酸水平比較Table 4 Comparison of the serum levels of 5-HT and 5-HIAA in various groups (±s)

表4 各組大鼠血清5-羥色胺、5-羥吲哚乙酸水平比較Table 4 Comparison of the serum levels of 5-HT and 5-HIAA in various groups (±s)

①P＜0.01，與空白組比較；②P＜0.05，與模型組比較

組別空白組模型組支鏈氨基酸組人參養(yǎng)榮湯組5-羥吲哚乙酸/5-羥色胺0.748±0.071 0.663±0.045①0.641±0.011 0.717±0.075②N 12 12 11 11 5-羥色胺[w/（ng·g-1）]252.11±3.65 573.41±5.11①514.17±5.17②441.95±4.87②5-羥吲哚乙酸[w/（ng·g-1）]261.08±22.71 379.28±21.25①328.15±19.41②314.66±18.24②

3 討論

第五屆國(guó)際運(yùn)動(dòng)生化學(xué)術(shù)會(huì)議將運(yùn)動(dòng)性疲勞定義為“機(jī)體生理過(guò)程不能持續(xù)其機(jī)能在特定水平上和/或不能維持預(yù)定的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度”[8]。隨著社會(huì)的不斷發(fā)展，運(yùn)動(dòng)性疲勞逐漸受到體育界和醫(yī)學(xué)界的重視，這對(duì)防治運(yùn)動(dòng)性疾病，保障運(yùn)動(dòng)員健康，提高運(yùn)動(dòng)成績(jī)等有重要意義。運(yùn)動(dòng)性疲勞分為外周性疲勞與中樞性疲勞，外周性疲勞一般指肌肉疲勞，而中樞性疲勞是指由于運(yùn)動(dòng)神經(jīng)中樞紊亂造成運(yùn)動(dòng)神經(jīng)興奮性下降的現(xiàn)象[9]。運(yùn)用中醫(yī)藥抗運(yùn)動(dòng)性疲勞一直是我國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

中醫(yī)古籍無(wú)“運(yùn)動(dòng)性疲勞”一詞，多數(shù)中醫(yī)學(xué)者認(rèn)為運(yùn)動(dòng)性疲勞屬于中醫(yī)“勞倦”、“虛損”、“勞役”、“勞傷”等范疇。本研究中的人參養(yǎng)榮湯出自《太平惠民和劑局方》，由12味藥組成：人參、白術(shù)（土炒）、茯苓、炙甘草、當(dāng)歸、熟地黃、白芍（麩炒）、炙黃芪、陳皮、遠(yuǎn)志（制）、肉桂、五味子（酒蒸）。內(nèi)含四君子湯與當(dāng)歸補(bǔ)血湯之義。人參補(bǔ)脾益氣，熟地黃大補(bǔ)陰血為君藥；黃芪、白術(shù)、茯苓助人參補(bǔ)脾益氣且祛濕，當(dāng)歸、白芍助熟地黃補(bǔ)血養(yǎng)心肝，共為臣藥；肉桂補(bǔ)火助陽(yáng)、溫暖脾腎，陳皮理氣行滯、使補(bǔ)而不滯，五味子斂肺滋腎、生津止渴，遠(yuǎn)志寧心安神，共為佐藥；炙甘草益氣調(diào)藥為使。全方共奏益氣補(bǔ)血、養(yǎng)心安神之功，主治積勞虛損、四肢沉滯、骨肉酸疼、行動(dòng)喘啜等證，且已得到諸多學(xué)者臨床應(yīng)用驗(yàn)證。本研究觀察人參養(yǎng)榮湯對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)后中樞性疲勞的影響，結(jié)果顯示人參養(yǎng)榮湯可顯著延長(zhǎng)大鼠的力竭游泳時(shí)間，表明人參養(yǎng)榮湯可改善大鼠運(yùn)動(dòng)后中樞性疲勞。另外，補(bǔ)充支鏈氨基酸可使長(zhǎng)時(shí)間大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后的疲勞程度降低[10，11]。因此，本研究以支鏈氨基酸為陽(yáng)性對(duì)照藥，結(jié)果顯示，在延長(zhǎng)大鼠的力竭游泳時(shí)間方面，人參養(yǎng)榮湯優(yōu)于支鏈氨基酸。

乳酸產(chǎn)生于能量代謝活躍的骨骼肌，是無(wú)氧糖酵解產(chǎn)物?！岸氯麑W(xué)說(shuō)”認(rèn)為，若運(yùn)動(dòng)過(guò)于劇烈或持久，體內(nèi)乳酸來(lái)不及被處理，乳酸堆積使肌肉中H+濃度上升，pH值下降，進(jìn)而引起一系列生化變化，是導(dǎo)致疲勞的重要原因[12]。血清肌酸激酶與運(yùn)動(dòng)時(shí)和運(yùn)動(dòng)后能量平衡及轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，是評(píng)定疲勞程度和恢復(fù)過(guò)程的重要指標(biāo)。血液中的尿素氮濃度的高低，可因運(yùn)動(dòng)量和強(qiáng)度大小的不同而發(fā)生變化，當(dāng)肌肉進(jìn)行大量的運(yùn)動(dòng)時(shí)，肌肉便通過(guò)丙氨酸的形式釋放出氨，氨的釋放量與運(yùn)動(dòng)總量和運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度成正比。而氨則是合成尿素氮的原料，血液中的尿素氮濃度指標(biāo)在理論上可以評(píng)定運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)后的疲勞程度[13]。血紅蛋白是人體運(yùn)輸氧氣的載體，是運(yùn)動(dòng)性疲勞重要的血液診斷指標(biāo)。人體運(yùn)動(dòng)能力下降或運(yùn)動(dòng)性疲勞發(fā)生時(shí)，血紅蛋白含量下降。本研究以運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠模型為研究對(duì)象，探討了人參養(yǎng)榮湯對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠上述血液生化指標(biāo)的影響。結(jié)果表明，運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠乳酸、肌酸激酶、尿素氮水平升高，血紅蛋白降低，與文獻(xiàn)[14，15]研究結(jié)果一致；人參養(yǎng)榮湯可降低乳酸、肌酸激酶、尿素氮水平，提高血紅蛋白水平。

在導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)中樞性疲勞的因素中，5-羥色胺作為一種抑制性神經(jīng)遞質(zhì)受到了諸多學(xué)者的關(guān)注，大量證據(jù)表明腦中5-羥色胺的增加可致運(yùn)動(dòng)中樞性疲勞，引起乏力、倦怠、食欲不振、睡眠紊亂等癥狀。例如，Davis等[16]研究發(fā)現(xiàn)超長(zhǎng)低強(qiáng)度游泳后及劇烈跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)后，腦內(nèi)5-羥色胺均增加；Chaouloff等[17]觀察運(yùn)動(dòng)對(duì)小鼠腦5-羥色胺系統(tǒng)的影響，發(fā)現(xiàn)5-羥色胺的激活參與了運(yùn)動(dòng)性疲勞；Hoffmann等[18]研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練可降低5-羥色胺的合成和代謝；許玲[19]研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)動(dòng)會(huì)引起色氨基酸譜發(fā)生變化，色氨酸、色氨酸/支鏈氨基酸比值的增加，可促進(jìn)腦內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)和5-羥色胺、5-羥吲哚乙酸濃度的提高，從而引起中樞疲勞。本研究結(jié)果顯示：模型組大鼠血清5-羥色胺、5-羥吲哚乙酸水平較空白組升高；與模型組比較，人參養(yǎng)榮湯組大鼠血清5-羥色胺、5-羥吲哚乙酸水平降低。表明人參養(yǎng)榮湯可下調(diào)運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠血清5-羥色胺、5-羥吲哚乙酸水平。另外，本研究觀察人參養(yǎng)榮湯對(duì)血清色氨酸、支鏈氨基酸水平的影響，結(jié)果顯示人參養(yǎng)榮湯可降低血清色氨酸水平，升高支鏈氨基酸水平。

綜上所述，人參養(yǎng)榮湯可顯著延長(zhǎng)大鼠的游泳時(shí)間，促進(jìn)血清肌酸激酶、尿素氮、乳酸等代謝廢物的排出，提高其血紅蛋白濃度，降低血中色氨酸、5-羥色胺水平，升高支鏈氨基酸水平，且諸多指標(biāo)效果比支鏈氨基酸更佳。