莞香靈芝與市售靈芝中總?cè)坪康膶Ρ确治?/h1>
2019-05-13 02:50:50戚怡呂思敏丁鴻燕李林科吳鐵于豐彥
廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報 2019年5期
戚怡， 呂思敏， 丁鴻燕， 李林科， 吳鐵，， 于豐彥
（1.廣東醫(yī)科大學(xué)，廣東東莞 523808；2.廣東醫(yī)科大學(xué)﹠廣東潤和生物科技有限公司輔酶Q10聯(lián)合研究中心，廣東東莞 523808）
靈芝藥用在我國已有2 000多年的歷史，其藥用及保健價值一直備受青睞，銷量快速增長，但由于野生靈芝資源稀缺，所以對人工栽培靈芝的需求越來越大。“莞香靈芝”是以瑞香科沉香屬植物沉香的木屑為栽培原料培養(yǎng)出的一種以靈芝總?cè)坪枯^高為特色的靈芝新品種（專利申請?zhí)枺?01610320833.5）。靈芝總?cè)剖窃陟`芝中發(fā)現(xiàn)的一類三萜類化合物，是靈芝的主要化學(xué)和藥效成分，具有抗腫瘤、保肝護(hù)肝、降低膽固醇、降血脂、降血糖、抗氧化延緩衰老、抗HIV等功效[1-3]。
為更好地開發(fā)和推廣莞香靈芝，本研究分別采用2015版《中華人民共和國藥典》（簡稱《中國藥典》）及《安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)》中的方法檢測靈芝總?cè)频暮浚瑢?種隨機(jī)市售的靈芝及人工栽培的莞香靈芝進(jìn)行對照檢測與評價。《中國藥典》、《安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)》均以紫外分光光度法測定總?cè)疲韵悴萑宜犸@色，區(qū)別在于二者提取方法不同，但均有對應(yīng)的質(zhì)量評估標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。
1 材料
1.1 儀器 FR223CN電子天平（奧豪斯儀器有限公司）；紫外—可見分光光度計（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；水浴鍋（上海愛明儀器有限公司）；超聲波清理器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）。
1.2 試藥與試劑 樣品G1～G7（見表1）為隨機(jī)市售不同來源地的靈芝子實體，均購自廣東化州市不同藥材批發(fā)部；樣品G8為實驗室用莞香木栽培的靈芝子實體（莞香靈芝，專利申請?zhí)枺?01610320833.5）。齊墩果酸對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號：821882）；無水乙醇、氯仿、高氯酸均為分析純；5%香草醛—冰乙酸（現(xiàn)配現(xiàn)用）。
1.3 統(tǒng)計方法 采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，樣品含量比較采用方差分析，莞香靈芝（G8）與市售靈芝（G1～G7）總?cè)坪勘容^采用LSD法。
表1 市售靈芝來源信息Table 1 The information of commercial Ganoderma scorces
2 方法與結(jié)果
2.1 按《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)檢測靈芝總?cè)坪?/p>
2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取齊墩果酸5mg，用甲醇溶解，超聲1 min促溶，用甲醇定容至25 mL量瓶中，4℃冰箱保存，作為對照品溶液。
2.1.2 供試品溶液的制備 每種試藥分別取粉碎的靈芝子實體試樣平行2份，精密稱取樣品各2 g，置于100 mL錐形瓶中，加入50 mL的無水乙醇溶液，超聲處理（功率40%、頻率53 kHz）45 min；抽濾，濾液置于100 mL容量瓶中，用適量的無水乙醇溶液洗滌容量瓶和濾渣，洗液并入同一容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取上述對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，分別置于10 mL的EP管中，80～90℃水浴揮干，放冷；加入新配制的香草醛—冰醋酸溶液（精密稱取香草醛5 g加入10 mL的冰醋酸，并使它溶解）0.2 mL，高氯酸0.8 mL，搖勻。在70℃水浴中加熱15 min；立即水浴中冷卻5 min，取出，精密加入乙酸乙酯4 mL，搖勻，以相應(yīng)試劑為空白，在546 nm處測定吸光度[D（λ）]，以齊墩果酸含量（m/mg）為橫坐標(biāo)X，吸光度D（546 nm）為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求得回歸方程為Y=8.530X-0.038，R2=0.997。靈芝總?cè)凭€性范圍為0.02～0.10 mg。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。
圖1 按《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)繪制的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 1 Standard curve of oleanolic acid drawn following Chinese Pharmacopoeia standard
2.1.4 樣品的含量測定 取供試品適量，置于10mL的EP管中80～90℃水浴揮干，放冷；加入新配制的香草—醛冰醋酸溶液0.2 mL，高氯酸0.8 mL，搖勻，在70℃水浴中加熱15 min，立即水浴中冷卻5 min；取出，精密加入乙酸乙酯4 mL，搖勻。以相應(yīng)試劑為空白，在546 nm處測定吸光度[D（λ）]，平行2份，取平均吸光度D（546 nm）。通過線性回歸方程算得測定用的樣液中三萜類物質(zhì)的質(zhì)量。按公式計算各樣品總?cè)坪浚╳）：w（g/100 g）=（m2×V1）/（m1×V2×1 000）×100。其中：m2為回歸方程計算出的含量；m1為試樣的質(zhì)量；V1定容體積；V2使用樣液的體積。結(jié)果見表2。
表2 莞香靈芝與市售靈芝總?cè)坪繙y定結(jié)果（按《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)測定）Table 2 The determination results for the contents of total triterpenoids in Guanxiang Ganoderma and commercial Ganoderma according to Chinese Pharmacopoeia standard
2.2 按安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)檢測靈芝總?cè)坪?/p>
2.2.1 對照品溶液的制備 齊墩果酸儲備液（0.1 mg/mL）：精密稱取95℃干燥2 h的對照品10.0 mg用無水乙醇溶解并定容至100 mL容量瓶，作為標(biāo)準(zhǔn)品儲備液（4℃保存）。
2.2.2 供試品溶液的制備 每種試藥分別取粉碎的靈芝子實體試樣1份，精密稱取樣品各1 g，準(zhǔn)確至0.1 mg。置于100 mL圓底燒瓶中，加入30 mL氯仿。（60±1）℃水浴回流2 h，減壓過濾，濾渣加入30 mL氯仿，再回流1 h，常壓過濾。合并濾液，40℃旋蒸至干。加入無水乙醇約40 mL，70℃水浴加熱，并搖動至其完全溶解。冷卻至室溫后用無水乙醇定容至50 mL，等待測液。
2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取標(biāo)準(zhǔn)品儲備液0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20 mL置于10 mL EP管中，常壓水浴蒸干溶劑（98～100℃）。加入新配制的5%香草醛—冰乙酸溶液0.20 mL和高氯酸0.80 mL，搖勻。70℃水浴加熱15 min，取出，冰水冷卻5 min，用自來水浴調(diào)至室溫。用移液管準(zhǔn)確移取冰乙酸5.00 mL稀釋，搖勻。以試劑空白做參照，在30 min內(nèi)用紫外可見分光光度計在545 nm處測吸光度[D（λ）]值。以吸光度D（545 nm）為縱坐標(biāo)Y，以三萜含量（m/mg）為橫坐標(biāo)X，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出直線回歸方程并計算相關(guān)系數(shù)。求得回歸方程為Y=8.288X-0.040，R2=0.996。靈芝總?cè)凭€性范圍為0.01～0.12 mg。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。
圖2 按安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)繪制的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 2 Standard curve of oleanolic acid drawn following Anhui local standard
2.2.4 樣品的含量測定 吸取待測液適量于25 mL具塞比色管中，常壓水浴蒸干溶劑（98～100℃）。加入新配制的5%香草醛—冰乙酸溶液0.20 mL和高氯酸0.80 mL，搖勻。70℃水浴加熱15 min，取出，冰水冷卻5 min，用自來水浴調(diào)至室溫。加冰乙酸5.00 mL稀釋，搖勻。以試劑空白做參照，在30 min內(nèi)用紫外可見分光光度計在545 nm處測吸光度[D（λ）]值。通過線性回歸方程算得測定用的樣液中三萜類物質(zhì)的質(zhì)量。按下面公式計算各樣品靈芝總?cè)坪浚╳）：w（g/100 g）=[m2/m1（1-w′）×（V2/V1）×1 000]×100。其中：m1為試樣的質(zhì)量，單位為g；m2為通過線性回歸方程算得的測定用樣液中三萜類物質(zhì)的質(zhì)量，單位為mg；V1為待測液定容的體積，單位為mL；V2為測定用的樣液體積，單位為mL；w′為試樣的含水量，單位為克每百克（g/100 g）。結(jié)果見表3。
表3 莞香靈芝與市售靈芝總?cè)坪繙y定結(jié)果（按安徽地方標(biāo)準(zhǔn)測定）Table 3 The determination results for the contents of total triterpenoids in Guanxiang Ganoderma and commercial Ganoderma according to Anhui local standard
2.3 《中國藥典》方法檢測莞香靈芝與市售靈芝總?cè)坪康牟町愋詫Ρ?由表4～6可看出，8種靈芝含量之間存在顯著性差異（P＜0.05），莞香靈芝平均含量顯著高于其他7種市售靈芝平均含量（P＜0.05），G1的平均含量顯著低于其他種靈芝的平均含量（P＜0.05）。
3 討論
靈芝為食藥兩用真菌，我國已將靈芝列入《中國藥典》范圍之內(nèi)，并可根據(jù)靈芝的實體中的主要活性成分和營養(yǎng)成分高低對其進(jìn)行全面的功能評價[4]。靈芝中所含靈芝三萜具有顯著的藥理活性，《中國藥典》及地方標(biāo)準(zhǔn)中均以檢測總?cè)瞥煞肿鳛樵u價靈芝質(zhì)量中必不可少的重要指標(biāo)之一。安徽省是我國最重要的靈芝產(chǎn)區(qū)，其中宣城旌德縣及大別山是有名的靈芝培植基地，安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)（DB34/T 485—2004）中建立的大別山靈芝的標(biāo)準(zhǔn)是國內(nèi)較早制定的地方標(biāo)準(zhǔn)，有重要行業(yè)代表的參考意義，其有機(jī)溶劑回流提取主要是運(yùn)用總?cè)迫苡谝恍┯袡C(jī)溶劑，使得總?cè)蒲b入到溶劑中而除去不溶性的雜質(zhì)。而《中國藥典》要求試品經(jīng)過超聲波提取，利用超聲波產(chǎn)生強(qiáng)烈震蕩、高速和在溶劑和樣品之間產(chǎn)生聲波空化作用，導(dǎo)致溶液內(nèi)氣泡的形成、增長和爆破壓縮，破壞植物藥材的細(xì)胞，使溶劑能夠滲透到藥材細(xì)胞中，提高目標(biāo)物從固相轉(zhuǎn)移到液相的傳質(zhì)速率。本研究采用上述2種方法，以齊墩果酸為對照品，用紫外—可見分光光度法，對靈芝總?cè)坪窟M(jìn)行測定，測得莞香靈芝及市售靈芝中靈芝總?cè)坪?。按照《中國藥典》方法檢測，靈芝總?cè)撇坏蒙儆?.50%，本研究測得長白山、廣西、江西產(chǎn)靈芝，莞香靈芝均符合要求，莞香靈芝和市售靈芝（分別產(chǎn)自安徽、山東、河南、長白山、廣西、廣東、江西等地）等8種靈芝含量之間存在顯著性差異（P＜0.05），莞香靈芝平均含量顯著高于其他7種市售靈芝平均含量（P＜0.05），安徽產(chǎn)靈芝子實體的平均含量顯著低于其他種靈芝的平均含量（P＜0.05）。按照安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)方法檢測：靈芝總?cè)坪浚╳/%）≥1.2，本研究測得僅有莞香靈芝符合要求。本研究結(jié)果表明，莞香靈芝的靈芝總?cè)坪棵黠@高于市售其他品種的靈芝，并符合中國藥典及地方標(biāo)準(zhǔn)的要求。提示以莞香木為原料栽培的靈芝可能具有更好的藥理功效，在食用、保健及藥用研發(fā)時可以優(yōu)先選擇總?cè)坪扛叩妮赶沆`芝。
表4 莞香靈芝與市售靈芝總?cè)频暮縏able 4 Comparison of Guanxiang Ganoderma and commercial Ganoderma (±s)
表4 莞香靈芝與市售靈芝總?cè)频暮縏able 4 Comparison of Guanxiang Ganoderma and commercial Ganoderma (±s)
編號G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7 G8份2 2 2 2 2 2 2 2靈芝總?cè)坪浚╳/%）0.354±0.049 0.455±0.031 0.370±0.030 0.600±0.008 0.727±0.006 0.370±0.022 0.523±0.070 0.937±0.091
表5 8種靈芝平均含量的差異性分析Table 5 Differentiation among average contents in 8 kinds of Ganoderma
表6 莞香靈芝與市售靈芝總?cè)坪繉Ρ萒able 6 Comparison of contents of total triterpenoids in Guanxiang Ganoderma and commercial Ganoderma
很多研究[5-7]表明，不同栽培條件、不同栽培方式、不同處理下培養(yǎng)的靈芝在重要成分的含量方面存在顯著差異。莞香，為瑞香科沉香屬木，是在我國樹木中唯一以“東莞”命名的樹木，歷來是東莞的特產(chǎn)，其老莖受傷后所積得的樹脂，俗稱沉香，可作香料原料，亦為治胃癌特效藥。為了得到更多的沉香，每年莞香農(nóng)都要對莞香木進(jìn)行鑿采，剔除下來的白木香下腳料可充分利用為莞香靈芝栽培原料。利用莞香木屑為原料培植出的靈芝中總?cè)坪枯^高，這可能與培養(yǎng)基質(zhì)中的莞香木的養(yǎng)分及活性成分遷移有關(guān)。
本研究測得莞香靈芝中總?cè)坪棵黠@高于市售的不同品種靈芝，符合《中國藥典》及地方標(biāo)準(zhǔn)的要求，為莞香靈芝的開發(fā)與利用提供了有意義的科學(xué)依據(jù)。
猜你喜歡
澤瀉原三萜、降三萜和倍半萜的分離及其抗炎活性研究世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化(2021年12期)2021-04-19 12:31:28 冰水浴暢談(2018年6期)2018-08-28 02:23:38 基于STM32的恒溫水浴溫度檢測與控制系統(tǒng)設(shè)計計算機(jī)測量與控制(2017年6期)2017-07-01 16:24:07 佩氏靈芝中三個新三萜天然產(chǎn)物研究與開發(fā)(2016年1期)2016-06-05 10:29:25 茯苓皮總?cè)频瓮柚苽涔に嚨膬?yōu)化中成藥(2016年4期)2016-05-17 06:08:05 水浴回流與超聲波輔助回流提取百合皂苷工藝比較研究天然產(chǎn)物研究與開發(fā)(2014年6期)2014-04-27 14:16:00 市售威靈仙飲片的質(zhì)量分析安徽醫(yī)藥(2014年4期)2014-03-20 13:12:36 14種市售抗菌藥對金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的體外抑菌作用中國合理用藥探索(2014年11期)2014-03-11 20:30:20 市售泡菜中生物胺含量的比較分析食品工業(yè)科技(2014年21期)2014-03-11 18:18:43 一種改進(jìn)的混合蛙跳算法及其在水浴牽伸控制中的應(yīng)用華東理工大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)(2014年1期)2014-02-27 13:48:35
戚怡， 呂思敏， 丁鴻燕， 李林科， 吳鐵，， 于豐彥
（1.廣東醫(yī)科大學(xué)，廣東東莞 523808；2.廣東醫(yī)科大學(xué)﹠廣東潤和生物科技有限公司輔酶Q10聯(lián)合研究中心，廣東東莞 523808）
靈芝藥用在我國已有2 000多年的歷史，其藥用及保健價值一直備受青睞，銷量快速增長，但由于野生靈芝資源稀缺，所以對人工栽培靈芝的需求越來越大。“莞香靈芝”是以瑞香科沉香屬植物沉香的木屑為栽培原料培養(yǎng)出的一種以靈芝總?cè)坪枯^高為特色的靈芝新品種（專利申請?zhí)枺?01610320833.5）。靈芝總?cè)剖窃陟`芝中發(fā)現(xiàn)的一類三萜類化合物，是靈芝的主要化學(xué)和藥效成分，具有抗腫瘤、保肝護(hù)肝、降低膽固醇、降血脂、降血糖、抗氧化延緩衰老、抗HIV等功效[1-3]。
為更好地開發(fā)和推廣莞香靈芝，本研究分別采用2015版《中華人民共和國藥典》（簡稱《中國藥典》）及《安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)》中的方法檢測靈芝總?cè)频暮浚瑢?種隨機(jī)市售的靈芝及人工栽培的莞香靈芝進(jìn)行對照檢測與評價。《中國藥典》、《安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)》均以紫外分光光度法測定總?cè)疲韵悴萑宜犸@色，區(qū)別在于二者提取方法不同，但均有對應(yīng)的質(zhì)量評估標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。
1 材料
1.1 儀器 FR223CN電子天平（奧豪斯儀器有限公司）；紫外—可見分光光度計（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；水浴鍋（上海愛明儀器有限公司）；超聲波清理器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）。
1.2 試藥與試劑 樣品G1～G7（見表1）為隨機(jī)市售不同來源地的靈芝子實體，均購自廣東化州市不同藥材批發(fā)部；樣品G8為實驗室用莞香木栽培的靈芝子實體（莞香靈芝，專利申請?zhí)枺?01610320833.5）。齊墩果酸對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號：821882）；無水乙醇、氯仿、高氯酸均為分析純；5%香草醛—冰乙酸（現(xiàn)配現(xiàn)用）。
1.3 統(tǒng)計方法 采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，樣品含量比較采用方差分析，莞香靈芝（G8）與市售靈芝（G1～G7）總?cè)坪勘容^采用LSD法。
表1 市售靈芝來源信息Table 1 The information of commercial Ganoderma scorces
2 方法與結(jié)果
2.1 按《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)檢測靈芝總?cè)坪?/p>
2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取齊墩果酸5mg，用甲醇溶解，超聲1 min促溶，用甲醇定容至25 mL量瓶中，4℃冰箱保存，作為對照品溶液。
2.1.2 供試品溶液的制備 每種試藥分別取粉碎的靈芝子實體試樣平行2份，精密稱取樣品各2 g，置于100 mL錐形瓶中，加入50 mL的無水乙醇溶液，超聲處理（功率40%、頻率53 kHz）45 min；抽濾，濾液置于100 mL容量瓶中，用適量的無水乙醇溶液洗滌容量瓶和濾渣，洗液并入同一容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取上述對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，分別置于10 mL的EP管中，80～90℃水浴揮干，放冷；加入新配制的香草醛—冰醋酸溶液（精密稱取香草醛5 g加入10 mL的冰醋酸，并使它溶解）0.2 mL，高氯酸0.8 mL，搖勻。在70℃水浴中加熱15 min；立即水浴中冷卻5 min，取出，精密加入乙酸乙酯4 mL，搖勻，以相應(yīng)試劑為空白，在546 nm處測定吸光度[D（λ）]，以齊墩果酸含量（m/mg）為橫坐標(biāo)X，吸光度D（546 nm）為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求得回歸方程為Y=8.530X-0.038，R2=0.997。靈芝總?cè)凭€性范圍為0.02～0.10 mg。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。
圖1 按《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)繪制的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 1 Standard curve of oleanolic acid drawn following Chinese Pharmacopoeia standard
2.1.4 樣品的含量測定 取供試品適量，置于10mL的EP管中80～90℃水浴揮干，放冷；加入新配制的香草—醛冰醋酸溶液0.2 mL，高氯酸0.8 mL，搖勻，在70℃水浴中加熱15 min，立即水浴中冷卻5 min；取出，精密加入乙酸乙酯4 mL，搖勻。以相應(yīng)試劑為空白，在546 nm處測定吸光度[D（λ）]，平行2份，取平均吸光度D（546 nm）。通過線性回歸方程算得測定用的樣液中三萜類物質(zhì)的質(zhì)量。按公式計算各樣品總?cè)坪浚╳）：w（g/100 g）=（m2×V1）/（m1×V2×1 000）×100。其中：m2為回歸方程計算出的含量；m1為試樣的質(zhì)量；V1定容體積；V2使用樣液的體積。結(jié)果見表2。
表2 莞香靈芝與市售靈芝總?cè)坪繙y定結(jié)果（按《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)測定）Table 2 The determination results for the contents of total triterpenoids in Guanxiang Ganoderma and commercial Ganoderma according to Chinese Pharmacopoeia standard
2.2 按安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)檢測靈芝總?cè)坪?/p>
2.2.1 對照品溶液的制備 齊墩果酸儲備液（0.1 mg/mL）：精密稱取95℃干燥2 h的對照品10.0 mg用無水乙醇溶解并定容至100 mL容量瓶，作為標(biāo)準(zhǔn)品儲備液（4℃保存）。
2.2.2 供試品溶液的制備 每種試藥分別取粉碎的靈芝子實體試樣1份，精密稱取樣品各1 g，準(zhǔn)確至0.1 mg。置于100 mL圓底燒瓶中，加入30 mL氯仿。（60±1）℃水浴回流2 h，減壓過濾，濾渣加入30 mL氯仿，再回流1 h，常壓過濾。合并濾液，40℃旋蒸至干。加入無水乙醇約40 mL，70℃水浴加熱，并搖動至其完全溶解。冷卻至室溫后用無水乙醇定容至50 mL，等待測液。
2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取標(biāo)準(zhǔn)品儲備液0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20 mL置于10 mL EP管中，常壓水浴蒸干溶劑（98～100℃）。加入新配制的5%香草醛—冰乙酸溶液0.20 mL和高氯酸0.80 mL，搖勻。70℃水浴加熱15 min，取出，冰水冷卻5 min，用自來水浴調(diào)至室溫。用移液管準(zhǔn)確移取冰乙酸5.00 mL稀釋，搖勻。以試劑空白做參照，在30 min內(nèi)用紫外可見分光光度計在545 nm處測吸光度[D（λ）]值。以吸光度D（545 nm）為縱坐標(biāo)Y，以三萜含量（m/mg）為橫坐標(biāo)X，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出直線回歸方程并計算相關(guān)系數(shù)。求得回歸方程為Y=8.288X-0.040，R2=0.996。靈芝總?cè)凭€性范圍為0.01～0.12 mg。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。
圖2 按安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)繪制的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 2 Standard curve of oleanolic acid drawn following Anhui local standard
2.2.4 樣品的含量測定 吸取待測液適量于25 mL具塞比色管中，常壓水浴蒸干溶劑（98～100℃）。加入新配制的5%香草醛—冰乙酸溶液0.20 mL和高氯酸0.80 mL，搖勻。70℃水浴加熱15 min，取出，冰水冷卻5 min，用自來水浴調(diào)至室溫。加冰乙酸5.00 mL稀釋，搖勻。以試劑空白做參照，在30 min內(nèi)用紫外可見分光光度計在545 nm處測吸光度[D（λ）]值。通過線性回歸方程算得測定用的樣液中三萜類物質(zhì)的質(zhì)量。按下面公式計算各樣品靈芝總?cè)坪浚╳）：w（g/100 g）=[m2/m1（1-w′）×（V2/V1）×1 000]×100。其中：m1為試樣的質(zhì)量，單位為g；m2為通過線性回歸方程算得的測定用樣液中三萜類物質(zhì)的質(zhì)量，單位為mg；V1為待測液定容的體積，單位為mL；V2為測定用的樣液體積，單位為mL；w′為試樣的含水量，單位為克每百克（g/100 g）。結(jié)果見表3。
表3 莞香靈芝與市售靈芝總?cè)坪繙y定結(jié)果（按安徽地方標(biāo)準(zhǔn)測定）Table 3 The determination results for the contents of total triterpenoids in Guanxiang Ganoderma and commercial Ganoderma according to Anhui local standard
2.3 《中國藥典》方法檢測莞香靈芝與市售靈芝總?cè)坪康牟町愋詫Ρ?由表4～6可看出，8種靈芝含量之間存在顯著性差異（P＜0.05），莞香靈芝平均含量顯著高于其他7種市售靈芝平均含量（P＜0.05），G1的平均含量顯著低于其他種靈芝的平均含量（P＜0.05）。
3 討論
靈芝為食藥兩用真菌，我國已將靈芝列入《中國藥典》范圍之內(nèi)，并可根據(jù)靈芝的實體中的主要活性成分和營養(yǎng)成分高低對其進(jìn)行全面的功能評價[4]。靈芝中所含靈芝三萜具有顯著的藥理活性，《中國藥典》及地方標(biāo)準(zhǔn)中均以檢測總?cè)瞥煞肿鳛樵u價靈芝質(zhì)量中必不可少的重要指標(biāo)之一。安徽省是我國最重要的靈芝產(chǎn)區(qū)，其中宣城旌德縣及大別山是有名的靈芝培植基地，安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)（DB34/T 485—2004）中建立的大別山靈芝的標(biāo)準(zhǔn)是國內(nèi)較早制定的地方標(biāo)準(zhǔn)，有重要行業(yè)代表的參考意義，其有機(jī)溶劑回流提取主要是運(yùn)用總?cè)迫苡谝恍┯袡C(jī)溶劑，使得總?cè)蒲b入到溶劑中而除去不溶性的雜質(zhì)。而《中國藥典》要求試品經(jīng)過超聲波提取，利用超聲波產(chǎn)生強(qiáng)烈震蕩、高速和在溶劑和樣品之間產(chǎn)生聲波空化作用，導(dǎo)致溶液內(nèi)氣泡的形成、增長和爆破壓縮，破壞植物藥材的細(xì)胞，使溶劑能夠滲透到藥材細(xì)胞中，提高目標(biāo)物從固相轉(zhuǎn)移到液相的傳質(zhì)速率。本研究采用上述2種方法，以齊墩果酸為對照品，用紫外—可見分光光度法，對靈芝總?cè)坪窟M(jìn)行測定，測得莞香靈芝及市售靈芝中靈芝總?cè)坪?。按照《中國藥典》方法檢測，靈芝總?cè)撇坏蒙儆?.50%，本研究測得長白山、廣西、江西產(chǎn)靈芝，莞香靈芝均符合要求，莞香靈芝和市售靈芝（分別產(chǎn)自安徽、山東、河南、長白山、廣西、廣東、江西等地）等8種靈芝含量之間存在顯著性差異（P＜0.05），莞香靈芝平均含量顯著高于其他7種市售靈芝平均含量（P＜0.05），安徽產(chǎn)靈芝子實體的平均含量顯著低于其他種靈芝的平均含量（P＜0.05）。按照安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)方法檢測：靈芝總?cè)坪浚╳/%）≥1.2，本研究測得僅有莞香靈芝符合要求。本研究結(jié)果表明，莞香靈芝的靈芝總?cè)坪棵黠@高于市售其他品種的靈芝，并符合中國藥典及地方標(biāo)準(zhǔn)的要求。提示以莞香木為原料栽培的靈芝可能具有更好的藥理功效，在食用、保健及藥用研發(fā)時可以優(yōu)先選擇總?cè)坪扛叩妮赶沆`芝。
表4 莞香靈芝與市售靈芝總?cè)频暮縏able 4 Comparison of Guanxiang Ganoderma and commercial Ganoderma (±s)
表4 莞香靈芝與市售靈芝總?cè)频暮縏able 4 Comparison of Guanxiang Ganoderma and commercial Ganoderma (±s)
編號G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7 G8份2 2 2 2 2 2 2 2靈芝總?cè)坪浚╳/%）0.354±0.049 0.455±0.031 0.370±0.030 0.600±0.008 0.727±0.006 0.370±0.022 0.523±0.070 0.937±0.091
表5 8種靈芝平均含量的差異性分析Table 5 Differentiation among average contents in 8 kinds of Ganoderma
表6 莞香靈芝與市售靈芝總?cè)坪繉Ρ萒able 6 Comparison of contents of total triterpenoids in Guanxiang Ganoderma and commercial Ganoderma
很多研究[5-7]表明，不同栽培條件、不同栽培方式、不同處理下培養(yǎng)的靈芝在重要成分的含量方面存在顯著差異。莞香，為瑞香科沉香屬木，是在我國樹木中唯一以“東莞”命名的樹木，歷來是東莞的特產(chǎn)，其老莖受傷后所積得的樹脂，俗稱沉香，可作香料原料，亦為治胃癌特效藥。為了得到更多的沉香，每年莞香農(nóng)都要對莞香木進(jìn)行鑿采，剔除下來的白木香下腳料可充分利用為莞香靈芝栽培原料。利用莞香木屑為原料培植出的靈芝中總?cè)坪枯^高，這可能與培養(yǎng)基質(zhì)中的莞香木的養(yǎng)分及活性成分遷移有關(guān)。
本研究測得莞香靈芝中總?cè)坪棵黠@高于市售的不同品種靈芝，符合《中國藥典》及地方標(biāo)準(zhǔn)的要求，為莞香靈芝的開發(fā)與利用提供了有意義的科學(xué)依據(jù)。
猜你喜歡
世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化(2021年12期)2021-04-19 12:31:28
暢談(2018年6期)2018-08-28 02:23:38
計算機(jī)測量與控制(2017年6期)2017-07-01 16:24:07
天然產(chǎn)物研究與開發(fā)(2016年1期)2016-06-05 10:29:25
中成藥(2016年4期)2016-05-17 06:08:05
天然產(chǎn)物研究與開發(fā)(2014年6期)2014-04-27 14:16:00
安徽醫(yī)藥(2014年4期)2014-03-20 13:12:36
中國合理用藥探索(2014年11期)2014-03-11 20:30:20
食品工業(yè)科技(2014年21期)2014-03-11 18:18:43
華東理工大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)(2014年1期)2014-02-27 13:48:35
