(廣西醫(yī)科大學附屬武鳴醫(yī)院檢驗科，廣西 南寧 530199)

地中海貧血(Thalassemia，簡稱地貧)是由于珠蛋白基因缺失導致血紅蛋白合成障礙的一組遺傳性貧血，以廣西的發(fā)病率最高，達14.13%[1]。該病屬于常染色體隱性遺傳病，主要分為α-地貧和β-地貧，具有明顯的地域差異和種族特征。重癥地貧致死、致殘率極高，每年需要大額醫(yī)療費來維持生命，給家庭、社會帶來嚴重負擔。廣西是地貧高發(fā)區(qū)，武鳴區(qū)是廣西南寧市的一個壯族聚居地，調(diào)查該地區(qū)壯族人群的地貧初篩陽性率及其基因型狀況，分析地貧發(fā)生的種族和地域的典型特征，有助于推動本區(qū)地貧防控工作的開展。廣西醫(yī)科大學附屬武鳴醫(yī)院(原為武鳴區(qū)人民醫(yī)院)是本區(qū)規(guī)模最大、實力最強的的綜合性公立醫(yī)院，于2016年8月開展地貧基因檢驗項目，是目前本區(qū)唯一具有地貧基因診斷資質(zhì)的醫(yī)療機構(gòu)。基于此，本研究通過收集自2016年8月—2018年8月期間在本院出生的雙方父母或其中一方為武鳴壯族人的新生兒臍血共9215例及壯族成年人體檢、婚檢和育齡成人體檢的外周血共4778例分別進行α-地貧和β-地貧篩查，并統(tǒng)計同期基因檢測確診為地貧的壯族人群共734例的型別分布，進行型別特點分析，同時分析4例少見地貧基因型病例特點，現(xiàn)報告如下：

1 對象與方法

1.1研究對象 收集2016年8月—2018年8月期間雙方父母或一方為武鳴壯族的9215例新生兒臍血進行α-地貧篩查，收集同時期體檢、婚檢和育齡成人體檢的武鳴壯族成年人4778例進行β-地貧篩查，所有樣品均進行血細胞計數(shù)和血紅蛋白電泳分析，在篩查檢出陽性病例中有1030例進行了地貧基因檢測，分析734例在本院基因確診為地貧的型別特點同時也分析少見地貧基因型病例特點。本次研究所涉及檢查項目實施前，均進行相關(guān)地貧知識宣講，孕婦及其家屬對該方法和結(jié)果均知情并同意。

1.2研究方法 ①血常規(guī)用邁瑞B(yǎng)C-6800血液分析儀和配套血常規(guī)檢測試劑。9215例新生兒臍血以毛細管(法國Sebia公司)電泳篩查出現(xiàn) Hb Bart’s為α-地貧篩查陽性，成人4778例以血常規(guī)MCV<82fL和或MCH<27 Pg，電泳出現(xiàn)Hb A2>3.5%和/或HbF>2%和/或出現(xiàn)HbE為β-地貧篩查陽性。②地貧基因檢測采用潮州凱普生物化學有限公司的α-地貧、β-地中海貧血基因檢測試劑盒(PCR+導流雜交法)，同時檢測α-地貧和β-地貧，α-地貧包括中國人常見的3種缺失型(--SEA、-α3.7、-α4.2)和3種突變(cs、Qs、ws)， β-地貧包括17種常見點突變(CD41-42、IVS-I-654、-28、CD71-72、CD17、βE、CD31、CD27/28、IVS-I-1、IVS-I-5、Int、CAP、CD14-15、CD-30、CD-29、CD-32、CD43)。

1.3統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理，對例數(shù)用(n)和構(gòu)成比(%)表示。

2 結(jié)果

2.1篩查結(jié)果 9215例新生兒臍血中1322例Hb Bart’s(α-地貧)陽性，α-地貧初篩陽性率14.35%(1322/9215)，4778例壯族成人中有345例β-地貧初篩陽性，β-地貧初篩陽性率7.22%(345/4778)。武鳴壯族人群地貧篩查總陽性率為21.57%(14.35%+7.22%)。

2.2基因診斷結(jié)果 734例在本院確診為地貧，其中α-地貧占60.90%(447/734)，β-地貧占33.11%(243/734)，α復合β地貧占5.99%(44/734)，地貧基因類型及構(gòu)成比，見表1、表2、表3。

表1 447例α-地貧基因突變類型及構(gòu)成比

表3 44例α復合β地貧基因突變類型及構(gòu)成比

3 討論

廣西是地貧高發(fā)區(qū)，武鳴區(qū)是廣西壯族人口的聚居地，分析武鳴區(qū)壯族人群的地貧發(fā)生率和基因類型特點，有助于本區(qū)地貧防控工作的開展，并對研究廣西其他壯族地區(qū)人群的地貧發(fā)生特點和防控工作有啟發(fā)意義。因受缺鐵性貧血、營養(yǎng)不良等因素的影響，成人運用Hb A2篩查α-地貧的敏感性不佳，與基因診斷結(jié)果符合率低。相比之下，Hb Bart’s用于篩查新生兒α-地貧具有敏感性好、準確率高的特點，是新生兒α-地貧篩查的金標準。有研究表明，在新生兒期利用臍血進行毛細管電泳Hb Bart’s定量測定技術(shù)進行α-地貧篩查，其結(jié)果與基因檢測的符合率達91.8%[2]，表明新生兒進行α-地貧篩查的可信度高。本次統(tǒng)計顯示，武鳴區(qū)壯族人群地貧篩查的陽性率達21.75%，與廣西近年來的初篩陽性率(19.4%～22.65%)[3-5]基本一致，但均比廣東省(7.84%～12.43%)[6-8]，江西省萍鄉(xiāng)地區(qū)(12.19%)[9]，云南省(10.5%)[10]高，說明武鳴區(qū)壯族人群是地貧高發(fā)人群，具有比較典型的地域和種族特征。

本研究發(fā)現(xiàn)，武鳴壯族人群α-地貧占60.90%(447/734)，β-地貧占33.11%(243/734)，α復合β地貧占5.99%(44/734)，三者之比約為11∶6∶1，α-地貧是β-地貧近兩倍，其中，靜止型α-地貧占18.67%，輕型α-地貧占30.11%，中間型α-地貧占12.12%。新生兒出生三個月后靜止型α-地貧和輕型α-地貧是篩查不出的，除非有CS突變。表1顯示，有CS突變的靜止型和輕型α-地貧僅5.45%，還有43.33%的其他靜止型和輕型α-地貧篩查不出，說明在武鳴壯族人群中進行新生兒α-地貧篩查的必要性。此次統(tǒng)計數(shù)據(jù)還顯示，α-地貧排在前四位的基因型別依次為--SEA/αα、-α3.7/αα、ααCS/αα 、--SEA/ααCS，與黃曉佳[11]所述的肇慶地區(qū)有差別，肇慶地區(qū)排前四位的α-地貧為--SEA/αα、-α3.7/αα、--SEA/-α3.7、-α4.2/αα ，表明武鳴壯族人群α-地貧CS突變率比較高，這幾種基因婚配產(chǎn)生重型α-地貧的幾率比較大。有研究指出，(--SEA/ααCS)和極少數(shù)(αCSα/)純合子也可以導致Hb Bart’s水腫胎[12]，武鳴壯族人群α-地貧CS突變的高發(fā)率增加了產(chǎn)下Hb Bart’s水腫胎的概率。--SEA/αα與-α3.7/αα或ααCS/αα婚配，可以生下嚴重的HbH病患兒，--SEA/αα與--SEA/αα或--SEA/ααCS婚配可以導致Hb Bart’s水腫胎的產(chǎn)生，所以，在--SEA/αα、-α3.7/αα、ααCS/αα 、--SEA/ααCS高發(fā)的武鳴壯族人群在孕檢、產(chǎn)檢中進行地貧檢查很有必要。徐湘民[12]指出，αWSα/是最常見的非缺失型α-地中海貧血，在廣西地區(qū)人群中該基因發(fā)生率約為1.55%，αCSα/和αQSα/次之，分別為1.21%和0.36%。此次武鳴壯族人群地貧篩查發(fā)現(xiàn)ααWS/、ααCS/、ααQS/分別為3.41%、4.63%、0%，也表明武鳴壯族人群α-地貧CS、WS突變的高發(fā)率，有明顯的地域和種族特征。此次調(diào)查還發(fā)現(xiàn)，武鳴壯族人群β-地貧排在前四位的依次是β41-42/βN、β17/βN、β71-72/βN、βE/βN，與沈寅琛所述[13]排在前四位的依次為β41-42/βN、β17/βN、β-28/βN、βE/βN略有不同，說明武鳴壯族人群β-地貧71-72突變比-28突變高。

α復合β地貧占5.99%(44/734)，其中以靜止型和輕型α-地貧復合β-地貧為主。有研究表明，如果β-地貧合并α-地貧基因突變臨床表型會有所改善，但此類雙重雜合子個體無論與α-地貧或者β-地貧的雜合子個體婚配，均有孕產(chǎn)中型和重型地貧患兒的可能。因此，夫妻一方為α、β復合突變雜合子時，另一方應該進行α和β地貧基因的檢測[14]。

本次研究期間，還觀察到3例(未列入本研究數(shù)據(jù))診斷為重型α-地貧，即Bart’s水腫胎，基因型為-- /--，其中2例為新生兒(均于分娩后1 h死亡)，1例為引產(chǎn)胎兒，這個發(fā)現(xiàn)值得深思。兩個--SEA/αα的人婚配，有1/4的概率生出Bart’s水腫胎，2/4的概率生出輕型地貧(--SEA/αα)患兒，1/4概率為正常。重型α-地貧是廣西圍產(chǎn)兒及新生兒死亡、出生缺陷及孕產(chǎn)婦并發(fā)癥(產(chǎn)后出血、妊高癥等)的主要原因之一[15]。由于地中海貧血只在純合子(aa)時才發(fā)病，基因攜帶者(Aa)中具有的正常珠蛋白基因可以掩蓋突變珠蛋白基因帶來的缺陷，故基因攜帶者通常為正常表型，無生理或智力異常，也不需要藥物治療。大部分地中海貧血基因攜帶者并不知道自己是攜帶者，易被忽略，常規(guī)體檢也很難確定基因攜帶者的存在，除非進行專門的實驗室檢查或群體篩查方可發(fā)現(xiàn)。攜帶者自身雖不發(fā)病，卻可能將突變基因a傳遞給下一代。若夫妻雙方有一方是地中海貧血基因攜帶者，另一方正常，則他們的子女有50%的概率成為基因攜帶者。若夫妻雙方同為地中海貧血基因攜帶者，則有25%概率產(chǎn)下重型地中海貧血患兒。由此可見，地貧基因攜帶者是致病基因的保存者和傳遞者，地貧篩查不能有僥幸心理，為了降低本區(qū)壯族人群地貧患兒的出生率，重視地貧基因攜帶者的篩查是非常必要的預防措施。武鳴壯族人群中，α-地貧的靜止型和輕型比較多，表明在新生兒期進行α-地貧篩查是非常必要的。α-地貧排在前四位的依次為--SEA/αα、-α3.7/αα、ααCS/αα 、--SEA/ααCS，這幾種基因婚配產(chǎn)生重型α-地貧的概率比較高，應加強產(chǎn)前檢查意識的宣傳力度，避免或減少重型地貧胎兒的出生。

本次研究還發(fā)現(xiàn)6例表型和基因型不一致的病例，外送測序發(fā)現(xiàn)4例是少見地貧基因型，其中：患者1，女性，42歲，Hb 119 g/L，MCV 93.4 fl，MCH 26.8 Pg，HbA 93.3%，HbA23.4%，電泳在E帶有3.3%，地貧基因未發(fā)現(xiàn)有βE，外送測序為少見β地貧，基因型βCD98/βN?；颊?，女性， 33歲， 排除缺鐵，Hb 118 g/L，MCV 69.4 fl，MCH 23.6 Pg，HbA 97.6%， HbA22.4%，常見地貧基因檢測正常，外送測序是THAI型α地貧?；颊?(新生兒)和患者4是母子關(guān)系，患者3在出生前已在某三甲醫(yī)院做產(chǎn)前診斷，其母親(患者4)也做了地貧基因，基因型分別為βCD41-42/βN、β17/βN。患者3的表型為Hb 157 g/L，MCV 93.7 fl，MCH 32.0 Pg，HbA 0%，HbA20.2%，HbF 93.7%，異常帶6.1%?；颊?的表型為Hb 106 g/L，MCV 52.5 fl，MCH 17.7 Pg，HbA 0%，HbA26.9%，HbF 8.4%，異常帶84.7%。新生兒及0～6月嬰兒血樣本中，如A完全缺乏，可考慮重型地中海貧血，因患者3表型與基因型不一致，患者4顯示為β地貧外還有84.7%的異常帶，故外送測序，反饋結(jié)果患者3為βCD41-42/βCD52，患者4為β17/βCD52。

總之，本次研究結(jié)果說明武鳴壯族人群是地貧高發(fā)人群，α-地貧CS突變率比較高，α-地貧靜止型和輕型比較多。同時，臨床過程會遇到少見或稀有地貧的出現(xiàn)，而目前臨床上使用的地貧診斷試劑盒只能檢測常見的位點和缺失的片段，對一些少見或稀有基因突變或缺失則無法檢測，因此實際工作中，我們應以血液學常規(guī)檢查→血紅蛋白電游分析→基因分型聯(lián)合檢測的順序為基礎(chǔ)，必要時引入、應用測序技術(shù)，防止漏檢和重癥地貧患兒的出生。