葉麗珍

研究背景：子宮內(nèi)膜異位癥簡(jiǎn)稱內(nèi)異癥，作為一種具有侵襲性的婦科良性疾病，它表現(xiàn)的子宮內(nèi)膜組織的遠(yuǎn)處種植與生長(zhǎng)，與惡性腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移性極其相似。目前其發(fā)病機(jī)制尚未清楚。最近研究表明，作為重要的粘附因子之一的E-cad表達(dá)的下降或喪失與惡性腫瘤的低分化、高侵襲、淋巴及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。以E-cad基因啟動(dòng)子區(qū)的DNA甲基化為代表的表觀遺傳改變可能是某些腫瘤中表達(dá)減少或喪失的主要原因。學(xué)者們推測(cè)，在具有與惡性腫瘤相似生物學(xué)行為的內(nèi)異癥發(fā)生、發(fā)展中，細(xì)胞粘附分子E-cad表達(dá)的下降或喪失可能起同樣重要作用，E-cad基因啟動(dòng)子甲基化與內(nèi)異癥相關(guān)，可能是內(nèi)異癥發(fā)病中的異位內(nèi)膜種植的始發(fā)機(jī)制之一。

關(guān)鍵詞：鈣粘蛋白;啟動(dòng)子甲基化;子宮內(nèi)膜異位癥

研究目的：本研究通過檢測(cè)子宮內(nèi)異癥的異位內(nèi)膜及對(duì)照組在位內(nèi)膜組織的E-cad啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀況與其蛋白表達(dá)關(guān)系，探索內(nèi)異癥可能的發(fā)病機(jī)制，以及在發(fā)生、發(fā)展中的作用，為子宮內(nèi)膜異位癥的治療找到新的突破點(diǎn)，并為進(jìn)一步可能的臨床治療建立理論基礎(chǔ)。

研究方法：

1.樣本資料：采用隨機(jī)對(duì)照法，收集廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦科2013年1月至2015年1月手術(shù)治療的并經(jīng)病理證實(shí)的標(biāo)本共65例，其中異位內(nèi)膜組織（巧克力囊腫囊腫）45例為研究組，對(duì)照組為20例同期因診刮、子宮切除而取到的正常子宮內(nèi)膜組織。

2方法：通過免疫組化、Western Blotting檢測(cè)E-cad異位與在位內(nèi)膜表達(dá)情況;并采用甲基化特異性PCR檢測(cè)異位與在位內(nèi)膜E-cad啟動(dòng)子甲基化狀況。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。用X²和Spearmans等級(jí)相關(guān)性分析比較異位內(nèi)膜與正常子宮內(nèi)膜E-cad蛋白表達(dá)及甲基化情況。P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

對(duì)比結(jié)果：

1.內(nèi)異癥組E-cad蛋白陽(yáng)性率為40%，對(duì)照組中E-cad蛋白陽(yáng)性率為100%。X²=20.526，P=0.000，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.內(nèi)異癥組13例Ⅰ-Ⅱ期樣本中，E-cad蛋白陽(yáng)性率為61%，17例Ⅲ期樣本中，E-cad蛋白陽(yáng)性率為41%，15例Ⅳ期樣本中，E-cad陽(yáng)性表達(dá)率降低為2%，內(nèi)異癥組E-cad蛋白陽(yáng)性率在不同的臨床分期呈直線相關(guān)，X²=5.023，P=0.081，P>0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.45例內(nèi)異癥組中甲基化例數(shù)為26例，甲基化率為58%;20例對(duì)照組中甲基化例數(shù)為0，甲基化率為0%。X²=19.259，P=0.000，P<0.05。有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4內(nèi)異癥組Ⅰ-Ⅱ期E-cad啟動(dòng)子甲基化率為23%，Ⅲ期甲基化率為59%，Ⅳ期甲基化率為86%。X²=9.702，P=0.008，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

5.Spearmans等級(jí)相關(guān)分析顯示在內(nèi)異癥不同臨床分期中E-cad啟動(dòng)子甲基化與蛋白表達(dá)之間相關(guān)系數(shù)，分別是Ⅰ-Ⅱ期r=-0.850，Ⅲ期r=-0.842，Ⅳ期r=--0.961，P=0.000，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

（一）內(nèi)異癥組異位內(nèi)膜和對(duì)照組在位內(nèi)膜組織中E-cad蛋白表達(dá)情況分析

把收取的45例內(nèi)異癥異位內(nèi)膜和20例對(duì)照組正常子宮內(nèi)膜樣本為對(duì)照分別石蠟包埋切片，以E-cad為一抗，進(jìn)行免疫組化試驗(yàn)，得到每個(gè)樣本的免疫組化的組織切片，按照上面試驗(yàn)方法介紹的E-cad蛋白表達(dá)陽(yáng)性與陰性判定方法，判定E-cad蛋白是否表達(dá)。按照要求讀片，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道正常的子宮內(nèi)膜腺上皮有E-cad表達(dá)，而內(nèi)異癥中E-cad蛋白有低表達(dá)或者不表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1內(nèi)異癥組、對(duì)照組E-cad蛋白陽(yáng)性率表達(dá)比較。（n，%）

E-cadherin基因啟動(dòng)子CpG島的異常甲基化可能是導(dǎo)致蛋白表達(dá)下調(diào)的原因之一。諸多惡性腫瘤中，E-cad基因啟動(dòng)子區(qū)域呈現(xiàn)高度甲基化引致的E-cad表達(dá)喪失是腫瘤侵襲性的可能機(jī)制，那么，在具有與惡性腫瘤相似遠(yuǎn)處種植行為的內(nèi)異癥發(fā)病中，E-cad啟動(dòng)子甲基化也可能是引起該基因表達(dá)下降或喪失的關(guān)鍵原因。

結(jié)論

E-cad在子宮內(nèi)膜異位癥中呈低表達(dá)，E-Cad啟動(dòng)子5端CpG島甲基化可能是內(nèi)異癥中該基因失活的機(jī)制之一。E-cad啟動(dòng)子區(qū)域5CpG島在內(nèi)異癥中呈高甲基化狀態(tài)，而在正常內(nèi)膜組織則為非甲基化狀態(tài)，E-cad基因啟動(dòng)子異常甲基化可能與為內(nèi)異癥有密切相關(guān)性，可能參與內(nèi)異癥的發(fā)生、發(fā)展。E-cad基因啟動(dòng)子區(qū)域5CpG島在Ⅲ、Ⅳ期內(nèi)異癥者中的甲基化率顯著高于Ⅰ、Ⅱ期，而E-cad蛋白表達(dá)率則相反。E-cad啟動(dòng)子甲基化程度越高，其蛋白表達(dá)越低，內(nèi)異癥臨床分期越晚。