蔡永健 張顯軍 柯莽 洪濤

[摘要] 目的 探討EZH2基因在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。 方法 選取2011年1月～2017年8月我院手術(shù)切除并病理證實(shí)的膀胱尿路上皮癌患者共60例，采用En Vision二步法免疫組化檢測EZH2基因的表達(dá)，并分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。另取前列腺TURP手術(shù)時(shí)切取的正常膀胱組織10例作為對照。 結(jié)果 膀胱尿路上皮癌中EZH2基因陽性率75.00%（45/60），正常膀胱組織EZH2基因陽性率10.00%（1/10）。膀胱尿路上皮癌標(biāo)本中EZH2基因陽性率顯著高于正常膀胱組織（χ2=13.32，P<0.01）。膀胱尿路上皮癌組織中EZH2基因的表達(dá)程度與性別和年齡等特征無明顯相關(guān)性（P>0.05），與浸潤深度和病理分級等密切相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中高表達(dá)，其表達(dá)增加可能在膀胱尿路上皮癌的形成、發(fā)展中扮演極其重要的角色。膀胱尿路上皮癌中EZH2基因表達(dá)與其惡性程度、浸潤深度密切相關(guān)，參與其浸潤轉(zhuǎn)移過程，促使腫瘤的發(fā)展，有望成為膀胱尿路上皮癌早期診斷以及預(yù)后評估的靶分子。

[關(guān)鍵詞] 膀胱尿路上皮癌;免疫組化;EZH2基因;臨床病理參數(shù)

膀胱癌是尿路系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，其中超過92%為尿路移行上皮癌，其發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，受多種基因與多重因素的影響與調(diào)控，尤其與癌基因的激活密切相關(guān)[1，2]。EZH2（ehancer of zeste homolog 2）基因是一種新發(fā)現(xiàn)的癌基因，位于人染色體7q35位置，其主要作用是促進(jìn)癌細(xì)胞的分化、生長及增殖，在腫瘤細(xì)胞局部浸潤、轉(zhuǎn)移的過程中起重要作用，在多種癌細(xì)胞中高表達(dá)，但EZH2基因在膀胱尿路移行上皮癌中的表達(dá)情況國內(nèi)外報(bào)道較少[3-7]。本文旨在探討EZH2基因在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月～2017年8月在我院手術(shù)切除并病理證實(shí)的膀胱尿路上皮癌患者共60例。納入標(biāo)準(zhǔn)[4]：所有患者均經(jīng)手術(shù)切除，且術(shù)后病理證實(shí)為膀胱尿路上皮癌;排除標(biāo)準(zhǔn)[5]：術(shù)前接受放療、化療或免疫治療。其中男42例，女18例;年齡39～87歲，平均（67.5±5.3）歲;浸潤性19例，非浸潤性41例。另取前列腺TURP手術(shù)時(shí)切取的正常膀胱組織10例作為對照，其中男7例，女3例;年齡40～86歲，平均（68.1±5.6）歲。兩組性別和年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 檢測方法

采用免疫組化二步法（En Vision）測定，標(biāo)本常規(guī)10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，標(biāo)本連續(xù)4 μm厚切片，先予5%羊血清37℃封閉2 h，抗原修復(fù)采用EDTA，加入一抗工作液4 ℃孵育過夜，用PBS沖洗后滴加二抗En Vision試劑孵育1 h（室溫），PBS沖洗后再滴加DAB顯色，蘇木精復(fù)染、脫水透明、封片鏡檢。分別用已知陽性切片和PBS代替一抗作陽性和陰性對照。

1.3 觀察指標(biāo)

分析膀胱癌及正常膀胱組織中EZH2基因表達(dá)的差異，并分析膀胱尿路上皮癌組織中EZH2基因表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

1.3.1 結(jié)果判斷? EZH2陽性信號(hào)以細(xì)胞核著色，呈棕黃色或棕褐色顆粒。染色結(jié)果評價(jià)采用半定量積分法判斷，通過對高倍鏡視野下細(xì)胞的染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞占總的細(xì)胞的百分率進(jìn)行綜合性評分，其中細(xì)胞的染色強(qiáng)度根據(jù)其強(qiáng)度：如陰性、弱陽性、陽性及強(qiáng)陽性分別記為0分、1分、2分及3分;陽性細(xì)胞占總的細(xì)胞的百分率：如陰性、百分率≤10%、百分率11%～50%、百分率51%～80%和百分率≥81%分別記為0分、1分、2分、3分和4分。兩者乘積≥4認(rèn)為EZH2基因表達(dá)陽性，否則EZH2基因表達(dá)陰性。

1.3.2 EZH2基因與臨床病理參數(shù)關(guān)系? 包括性別、年齡、浸潤深度和病理分級等。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EZH2基因在膀胱尿路上皮癌及正常組織中的表達(dá)比較

EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中陽性率為75.00%（45/60），正常膀胱組織EZH2基因陽性率為10.00%（1/10）。膀胱尿路上皮癌標(biāo)本中EZH2基因陽性率顯著高于正常膀胱組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=13.32，P<0.01）。

2.2 膀胱尿路上皮癌組織中EZH2基因的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性

EZH2基因膀胱尿路上皮癌組織中的表達(dá)程度與性別和年齡等特征無明顯相關(guān)性（P>0.05），與浸潤深度和病理分級等密切相關(guān)（P<0.05）。見表1。

3 討論

EZH2是1996年發(fā)現(xiàn)的一種新的人類基因，是果蠅zeste基因增強(qiáng)子的人類同源物，是PcG基因家族的核心成員，在胚胎干細(xì)胞發(fā)育、細(xì)胞增殖和凋亡及浸潤、遷移等方面扮演重要角色[8-11]。EZH2定位于人染色體7q35位置，具有組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶，通過催化組蛋白H3第27位賴氨酸三甲基化（H3K27m3），從而抑制基因表達(dá)，通過抑制細(xì)胞增殖和分化對腫瘤的發(fā)生發(fā)展起重要作用;EZH2作為轉(zhuǎn)錄阻遏因子，能減少轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合，抑制靶基因的表達(dá)，并作用于pRb2/p130蛋白C-末端與組蛋白去乙?；?（HDAC1）相聯(lián)的區(qū)域，恢復(fù)pRb2/pB0 HDAC1復(fù)合物介導(dǎo)的細(xì)胞周期素A啟動(dòng)子活性，促進(jìn)細(xì)胞的演進(jìn)和惡性變[12-14]。EZH2基因在胃癌、大腸癌、腎瘤、乳腺癌、前列腺腺瘤、腦癌等癌組織呈現(xiàn)明顯高表達(dá)狀態(tài)，較正常的人體組織中的表達(dá)顯著升高，參與了大多數(shù)惡性腫瘤的形成、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移的整個(gè)過程[15-19]。

膀胱癌是我國泌尿系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤之一，其術(shù)后易出現(xiàn)腫瘤的復(fù)發(fā)和浸潤、轉(zhuǎn)移，臨床治療效果欠理想，部分患者復(fù)發(fā)后其腫瘤的惡性程度反而明顯增加。在非浸潤性尿路上皮癌中，約有10%以后發(fā)展為浸潤性癌或發(fā)生浸潤、轉(zhuǎn)移。尋找新的可用于診斷、治療、判斷預(yù)后、預(yù)測治療效果的基因，可以為膀胱尿路上皮癌的預(yù)后提供科學(xué)依據(jù)。近年來EZH2基因在膀胱癌中的表達(dá)及臨床意義受到臨床的高度重視。李海波等[4]研究發(fā)現(xiàn)膀胱尿路上皮癌中EZH2基因呈高表達(dá)，且與其病理分級、臨床分期密切相關(guān)。徐松濤等[20]研究發(fā)現(xiàn)膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展與EZH2基因表達(dá)增高密切有關(guān)，且與膀胱癌的臨床分期、復(fù)發(fā)密切相關(guān)。

本研究示膀胱尿路上皮癌標(biāo)本中EZH2基因陽性率明顯高于正常膀胱組織。表明EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中高表達(dá)，其表達(dá)增加可能在膀胱尿路上皮癌的形成、發(fā)展中扮演極其重要的角色，可能是膀胱尿路上皮癌一個(gè)敏感的生物學(xué)標(biāo)志。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)EZH2基因在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(dá)程度與浸潤深度及病理分級有相關(guān)性。表明EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)程度與其惡性程度、浸潤深度密切相關(guān)，提示EZH2基因參與其浸潤轉(zhuǎn)移過程，促使腫瘤的發(fā)展，有望成為膀胱尿路上皮癌早期診斷以及預(yù)后評估的靶分子。必要時(shí)可進(jìn)一步分析研究EZH2基因與膀胱癌其他臨床病理參數(shù)及膀胱鏡檢查結(jié)果的相關(guān)性，進(jìn)一步了解膀胱尿路癌發(fā)病的分子病理機(jī)制，從而指導(dǎo)臨床診斷及基因治療，有望成為膀胱癌早期基因診斷、治療及預(yù)后評估分析的靶分子[21，22]。

總之，EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中高表達(dá)，其表達(dá)增加可能在膀胱尿路上皮癌的形成、 發(fā)展中扮演極其重要的角色。EZH2基因在膀胱尿路上皮癌組織中表達(dá)程度與浸潤深度及病理分級有相關(guān)性，其表達(dá)程度參與其浸潤轉(zhuǎn)移過程，可促使腫瘤的發(fā)展。EZH2在膀胱尿路上皮癌的發(fā)病進(jìn)展中起重要作用，進(jìn)一步深入研究對膀胱尿路上皮癌的診斷和治療及判斷預(yù)后有一定的臨床意義。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Zeidler M，Kleer CG.The polycomb group protein enhancer of zeste 2 its links to DNA repair and breast cancer[J]. J Mol Histol，2006，37（5/7）：219-223.

[2] Kim KH Roberts CW. Targeting EZH2 in cancer[J]. Nat Med，2016，22（2）：128-134.

[3] Boscolo Rizzo P，Da Mosto MC，Ampazzo E，et al. Telomeres and telomerase in head and neck squamous cell car cinoma from pathogenesis to clinical implications[J].Cancer Metastasis Re，2016 35（3）：457-474.

[4] 李海波，王禾，武國軍，等. EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及臨床意義[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008， 39（6）：530-533.

[5] 楊國奮，蔡木炎. EZH2基因在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其臨床病理意義[J]. 中國腫瘤臨床，2010，37（23）：1321-1325.

[6] Weikert S，Christoph F，Kollermann J，et al. Expression levels of the EZH2 polycomb transcriptional repressor correlate with aggressiveness and invasive potential of bladder carcknomas[J]. Int J Mol Med，2005，16（2）：349-353.

[7] 董桂蘭，張小楠，袁文棋. EZH2和P53在乳腺癌中的表達(dá)及相關(guān)性探討[J]. 中國腫瘤臨床，2007，34（16）：931-933.

[8] Gonzalez ME，Duprie ML，Krueger H，et al. Histone methyl transferase EZH2 induces Akt dependent genomic instability and BRCA1 inhibition in breast cancer[J]. Cancer Res，2011，71（6）：2360-2370.

[9] Margueron R，Li G，Sarma K，et al. Ezh1 and Ezh2 maintain repressive chromatin through different mecha-nisms[J].Mol Cell， 2008，32（3）：503-518.

[10] Viréd E，Brenner C，Deplus R，et al. The Polycomb group protein EZH2 directly controls DNA methylation[J]. Nature，2006，439（7078）：871-874.

[11] Studo T，Utsunomiya T，Mimori K，et al. Clinicopathological significance of EZH2 mRNA expression in patients with hepatocellular carcinoma[J]. Br J Cancer，2005，92（9）：1754-1758.

[12] Sasaki M，Ikeda H，Itatsu K，et al. The overexpression of polycomb group proteins Bmi1 and EZH2 is associated with the progression and aggressive biological behavior of hepatocellular carcinoma[J]. Lab Invest，2008，88（8）：873-882

[13] Liu Y，Liu T，Bao X，et al. Increased EZH2 expression is associated with proliferation and progression of cervical cancer and indicates a poor prognosis[J]. Int J Gynecol Pathol，2014，33（3）： 218-224.

[14] Eskander RN，Ji T，Huynh B，et al. Inhibition of enhancer of zeste homolog 2（EZH2）expression is associated with decreased tumor cell proliferation，migration，and invasion in endometrial cancer cell lines[J]. Int J Gynecol Cancer，2013，23（6）：997-1005.

[15] Cai MY，Tong ZT，Zhu W， et al. H3K27me3 protein is a promising predictive biomarker of patients survival and chemoradioresistance in human nasopharyngeal carcinoma[J]. Mol Med，2011，17（11-12）：1137-1145.

[16] He LJ，Cai MY，Xu GL，et al. Prognostic significance of overexpression of EZH2 and H3K27 me3 proteins in gastric cancer[J]. Asian Pac J Cancer Prev，2012，13（7）：3173-3178.

[17] Luo H，Jiang Y，Ma S，et al. EZH2 promotes invasion and metastasis of laryngeal squamous cells carcinoma via epithelial mesenchymal transition through H3K27me3[J]. Biochem Biophys Res Commun，2016，479（2）：253-259.

[18] Liu L，Xu Z，Zhong L，et al. Enhancer of zeste homolog 2（EZH2） promotes tumour cell migration and invasion via epigenetic repression of E cadherin in renal cell carcinoma[J]. BJU Int，2016，117（2）：351-362.

[19] Hu S，Yu L，Li Z，et al. Overexpression of EZH2 contributes to acquired cisplatin resistance in ovarian cancer cells [J]. Cancer Biol Ther，2010，10（8）：788-795.

[20] 徐松濤，邵雪峰，蔣挺，等. EZH2和 Ki67蛋白在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志，2010，12（11）：72-74.

[21] Raman JD，Mongan NP，Tickoo SK，et al.Increased expression of the polycomb group gene，EZH2，in transitional cell carcinoma of the bladder[J]. Clin Cancer Res，2005，11（24）：8570-8576.

[22] 廖彬，楊占斌. EZH2、FHIT和VEGF在膀胱尿路上皮癌的表達(dá)及臨床意義[J]. 中國癌癥防治雜志，2013，5（2）：142